细叶杜香化学成分研究论文

摘要：目的对细叶杜香石油醚和三氯甲烷部位的化学成分进行研究。方法利用硅胶柱 层析进行分离纯化,根据理化性质和波谱学数据进行结构鉴定。结果分离并鉴定了 5 个化合 物,分别为 5-羟基-4′,7-二甲氧基黄酮,正二十八烷醇,东莨菪内酯,oleuropeicacid 和秦皮素。 结论正二十八烷醇和 oleuropeicacid 均为首次从杜香属植物中分离得到。 关键词：细叶杜香;化学成分;正二十八烷醇;oleuropeicacid Abstract:ObjectiveToinvestigatethechemicalconstituentsofthepetroleuman dthechloroformextractsofLedumpalustreL.Var.AngustumE.Busch.MethodSilica gelcolumnchromatographywasusedtoseparateandpurifythechemicalconstituen ts.Thestructureswereelucidatedonthebasisofphysicochemicalpropertiesandspe ctraldatA.ResultsFivecompoundswereisolatedandidentifiedas5-hydroxy-4′,7dimethoxyflavone，noctacosanol,scopoletin,oleuropeicacidandfraxetin.ConclusionnoctacosanolandoleuropeicacidwereisolatedfromtheLedumgenusforthefirsttime . Keywords:LedumpalustreL.Var.AngustumE.Busch;chemicalconstituents;noctacosanol;oleuropeicacid 细叶杜香（LedumpalustreL.Var.AngustumE.Busch）是杜鹃花科杜香属常绿直立是杜鹃花科杜香属常绿直立 小灌木，笔者曾报道从细叶杜香嫩枝和叶水提物的乙酸乙酯部位分离并鉴定了 4 个化合物： 七叶内酯，对羟基苯甲酸，槲皮素和金丝桃苷［1］。本文报道从该水提物的石油醚和三 氯甲烷部位共分离得到 6 个单体化合物，确定了其中 5 个化合物的结构，分别为 5-羟基4′,7-二甲氧基黄酮(1)、正二十八烷醇(2)、东莨菪内酯(3)、oleuropeicacid(4)、秦皮素 (5)，化合物 2 和 4 为首次从该属植物中分离得到。 1 仪器、试剂与材料 熔点用 X-4 数字显示显微熔点测定仪测定(温度计未校正)；紫外光谱扫描用岛津 UV2450 紫外分光光谱仪；红外光谱用 5DX-FT 型红外光谱仪测定；质谱用 Agilent6120 型 液相色谱-质谱联用仪测定，核磁共振用 BrukerAV 超导核磁共振波谱仪测定,柱层析和薄 层层析硅胶均由青岛海洋化工厂生产。薄层色谱检测用 254nm、365nm 紫外灯。石油醚 (60～90℃)、三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇均为分析纯。药材于 2005 年 6 月采自内蒙古大 兴安岭,经广东药学院中药学院刘基柱老师鉴定为细叶杜香 (LedumpalustreL.Var.AngustumE.Busch),样品现保存于广东药学院天然药物化学教 研室。 2 提取与分离 干燥的细叶杜香嫩枝和叶(5.8kg)kg)粉碎后，用水回流提取 6 次(首次 5h，收集挥发油， 其余每次 2h),合并提取液减压浓缩,浓缩液加醇沉淀,过滤,合并滤液浓缩至 4L,依次用石油 醚,三氯甲烷萃取，得到石油醚部位 3.8kg)g 和三氯甲烷部位 40g。 石油醚部位（3.8kg)g）是杜鹃花科杜香属常绿直立经硅胶（200～300 目）是杜鹃花科杜香属常绿直立柱层析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱， 每 150mL 收集一个流分，TLC 检测，合并相同流分。在第 21～30 流分析出黄色絮状沉 淀，过滤，沉淀用石油醚-乙酸乙酯（体积比 20∶1）是杜鹃花科杜香属常绿直立重结晶，得化合物 1(7mg)。 三氯甲烷部位萃取物（40g）是杜鹃花科杜香属常绿直立经硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，每 8kg)00mL 收集一个流分，TLC 检测。其中，石油醚-乙酸乙酯（体积比 100∶3）是杜鹃花科杜香属常绿直立洗脱部分，第 113～ 136 流分合并后浓缩，静置，析出白色颗粒状结晶，用三氯甲烷反复重结晶得化合物 2(10mg)。石油醚-乙酸乙酯（体积比 5∶1)洗脱部分，其中第 427～442 流分浓缩液合并 后，静置，溶液中析出无色透明长针状晶体，滤出结晶，用丙酮-甲醇(体积比 1∶1)反复重 结晶，再过 LH-20 凝胶柱进行纯化，甲醇为洗脱剂，根据色带收集并结合薄层检测合并相 同流分，放置析晶，得到化合物 3(30mg)；第 451～466 流分合并后，析出大量淡黄白 色方晶，抽滤，用乙酸乙酯洗涤，沉淀变为纯白细颗粒状，经甲醇反复重结晶，得化合物 4(150mg)；第 535～552 流分析出大量的淡黄色絮状沉淀，过滤，用石油醚和乙酸乙酯 重结晶得到颜色不均一的黄色鳞片状晶体，复用甲醇和水溶解晶体并制成高温下的饱和溶 液，然后放置冰箱，数小时即析出土黄色透明鳞片状结晶，再次过滤，用甲醇和丙酮加热 溶解晶体后室温放置，数天后析出黄色针状结晶，再用甲醇进行重结晶得化合物 5(50mg)。 3 结构鉴定 化合物 1：黄色粉末(CHCl3),mp170～172℃。薄层色谱展开可见明显黄色斑点。 UVλmax/nmmax/nm：269,326(MeOH)；269,326(NaOMe)；269,326(NaOMe,5min)； 279,300,340(AlCl3)；202,279,300,340(AlCl3/HCl)；270,329(NaOAc)； 268kg),331(NaOAc/H3BO3)；紫外光谱显示可能含有 3-或 5-OH。IR(KBr)cm-1：3242(OH),1656(C=O),1622,1593,1575,148kg)9(Ar),1442,1355,128kg)8kg),1211,1140,1008kg),8kg) 30。1H-NMR(CDCl3，500MHz)δ：12.8kg)1(1H,s,C5-OH),7.8kg)4(2H,d,J=9.5Hz,H2′,6′),7.02(2H,d,J=9.5Hz,H-3′,5′),6.58kg)（1H,s,H-3),6.48kg)（1H,d,J=2.0Hz,H6),6.36（1H,d,J=2.0Hz,H-8kg)),3.8kg)9(3H,s,7-OCH3),3.8kg)8kg)(3H,s,4′-OCH3)。以上数据与 文献［2］报道的 5-羟基-4′,7-二甲氧基黄酮基本一致，确定化合物 1 为 5-羟基-4′,7-二甲 氧基黄酮。 化合物 2：白色颗粒状结晶(CHCl3),mp75～77℃。紫外无吸收。10%硫酸乙醇显紫 红色斑点。IR(KBr)cm-1：3313(-OH),2918kg),28kg)50(-CH2),1464,138kg)0(CH3),1061,720，红外光谱具备长链脂肪醇的特征吸收。1HNMR(CDCl3，400MHz)δ：3.64(2H,t,J=6.8kg)Hz,-CH2OH),1.25～ 1.36(br.s,n×CH2),0.8kg)2～0.98kg)(3H,m,-CH3)。13C-NMR(CDCl3,100MHz)：63.1 为 直接与羟基相连的亚甲基碳信号,32.8kg) 为羟基 β 位的亚甲基碳信号。31.9～22.7 为一系列 的亚甲基碳信号,14.1 为末端甲基信号。以上数据与文献［3］报道的正二十八烷醇一致， 故确定化合物 2 为正二十八烷醇。 化合物 3：淡黄色针晶(MeOH),mp206～208kg)℃。在紫外 365nm 下显强烈蓝色荧光 推测可能为香豆素类化合物。UVλmax/nmmax/nm：228kg)，253，298kg)，347(MeOH)； 240，391(NaOMe)；228kg)，253，297，345(AlCl3)；228kg)，253，297，345(AlCl3/ HCl)；226,297,348kg)(NaOAc)；226，297，346(NaOAc/H3BO3)；由紫外光谱中因加 入乙酸钠使吸收峰产生红移且强度增加判断为 4，5 或 7-羟基香豆素。IR(KBr)cm-1： 3337(OH),1703（C=O）是杜鹃花科杜香属常绿直立,1608kg),1565,1511(Ar),1290,1262,1139,922,8kg)61,591。1HNMR(Acetone-d6，500MHz)δ：8kg).71(1H,s,-OH),7.8kg)4(1H,d,J=9.5Hz,H4),7.20(1H,s,H-5),6.8kg)0(1H,s,H-8kg)),6.17(1H,d,J=9.5Hz,H-3),3.91(3H,s,6OCH3)。13C-NMR(Acetone-d6,125MHz)：161.2(C-2),112.1(C-3),144.6(C- 4),109.9(C-5),145.9(C-6),151.8kg)(C-7),103.7(C-8kg)),151.1(C-9),113.3(C-10)。以上 数据与文献［4,5］报道的东莨菪内酯基本一致，因此确定化合物 3 为东莨菪内酯。 化合物 4：白色透明方晶(MeOH),mp158kg)～160℃。10%硫酸乙醇显紫色斑点。 UVλmax/nmmaxnm：202(MeOH),203(NaOMe),提示分子中有共轭双键。ESI-MS 给出分子量 为 18kg)4。IR(KBr)cm-1：3312(-OH),3000～ 2500（br.）是杜鹃花科杜香属常绿直立,168kg)0(C=O),1649(C=C),1395,1369（i-pr）是杜鹃花科杜香属常绿直立,1260,1148kg)。1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ：11.97（1H,s,-COOH),6.8kg)5（1H,t,J=2.4Hz,-CH2CH=C-COOH),4.09（1H,s,-OH)，1.05（6H,s,Me2C-O)，1.07～2.38kg)(7H,m,H-3,H4,H-5,H-6)。13C-NMR(DMSO-d6,100MHz)：130.2(C-1),139.1(C-2),23.0(C3),43.8kg)(C-4),24.9(C-5),27.0(C-6),70.2(C-7),27.0(C-8kg)),26.5(C-9),168kg).1(COOH)。 以上数据与文献［6,7］所报道的 oleuropeicacid 基本一致，故确定化合物 4 为 oleuropeicacid。 化合物 5：黄色针晶(MeOH),mp232～234℃。其聚酰胺薄层斑点在紫外灯下呈黄绿 色荧光，喷 1%醋酸镁甲醇溶液后呈棕黄色。UVλmax/nmmax/nm：274,354(MeOH)； 273,38kg)3(NaOMe)；199,213,268kg),372(AlCl3)；203,338kg)(AlCl3/HCl)； 205,273,372(NaOAc)；205,357(NaOAc/H3BO3)；紫外光谱显示含邻二酚羟基。1HNMR(Acetone-d6+DMSO-d6，400MHz)δ：9.49(1H,s,-OH),9.41(1H,s,OH),7.8kg)8kg)(1H,d,J=9.2Hz,H-4),6.8kg)0(1H,s,H-5),6.21(1H,d,J=9.2Hz,H3),3.8kg)3(3H,s,6-OCH3)。氢谱数据和文献［8kg)］报道的秦皮素一致，故确定化合物 5 为秦 皮素。 摘要：目的建立香连素片的质量控制标准。方法采用薄层色谱法鉴别香连素片中的木 香；采用高效液相色谱法测定香连素片中盐酸小檗碱的含量。结果在薄层色谱中检出了木 香；盐酸小檗碱的进样量在 0.0378kg)～0.378kg)μgg 范围内呈良好的线性关系（r＝ 0.9997）是杜鹃花科杜香属常绿直立，平均回收率为 101.49%，RSD 为 1.97％（n＝6）是杜鹃花科杜香属常绿直立。结论本方法专属性强、 准确、重现性好，可作为香连素片的质量控制标准。 关键词：香连素片；木香；薄层色谱法；盐酸小檗碱；高效液相色谱法 Abstract:ObjectiveToestablishamethodforqualitycontrolofXiangliansutablet s.MethodsRadixAuckiandiaeinthetabletswasidentifiedbyTLC.Thecontentofberb erinehydrochlorideinthetabletswasdeterminedbyHPLC.ResultsRadixAuckiandia ecouldbeidentifiedbyTLC.Berberinehydrochlorideshowedagoodlinearcorrelatio novertherangeof0.0378kg)0.378kg)μgg(r=0.9997).Theaveragerecoveryofberberinehydrochloridewas101.49% withRSD1.97% (n=6).ConclutionsThemethodisspecific,accurateandreproduciblefortheequality controlofXiangliansutablets. Keywords:Xiangliansutablets；berberinehydrochloride；HPLC； Radixauckiandiae；TLC 香连素片是广东万年青制药有限公司的产品，具有清热燥湿、行气止痛的功效，临床 用于湿热型痢疾、里急后重、腹痛泄泻。其处方为木香 500g、盐酸小檗碱 75g。原药品 标准［1］鉴别木香用试管反应，盐酸小檗碱的含量用紫外分光光度法测定，方法专属性 较低且影响因素多。本文采用薄层色谱法鉴别木香、高效液相色谱法测定盐酸小檗碱的含 量，结果表明操作简便、准确、重复性好，为该品种的质量标准进一步修订提供了依据。 1 仪器与试药 1.1 试药 香连素片（批号： 0308kg)01、0308kg)02、0308kg)03、040701、041002、050601、0508kg)02、060601、0 60602、060603）是杜鹃花科杜香属常绿直立均为广东万年青制药有限公司产品；木香对照药材（批号：9219201）是杜鹃花科杜香属常绿直立及盐酸小檗碱对照品（批号：110713-200609）是杜鹃花科杜香属常绿直立均购自中国药品生物制品检验所； 硅胶 G 预制板及硅胶 G 均由青岛海洋化工厂生产;乙腈为色谱纯;其他试剂与试药均为分析 纯。 1.2 仪器 LC2010A2010A 高效液相色谱仪(日本岛津),UV2010A2501PC 紫外分光光度仪（日本岛 津）是杜鹃花科杜香属常绿直立,CQ15A2010A15A 超声波清洗器（上海跃进医用光学器材厂）是杜鹃花科杜香属常绿直立。 2 薄层鉴别［2］ 取本品 2 片，研成细粉，加三氯甲烷 10mL，超声（功率 120W，频率 50Hz）是杜鹃花科杜香属常绿直立处理 30min，滤过，滤液浓缩至 2mL，作为供试品溶液。另取木香对照药材 0.2g、不含木香 的阴性样品，同法分别制成对照药材溶液及阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述 3 种溶液各 3μgL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板上，以三氯甲 烷2010A环己烷（体积比 5∶1）是杜鹃花科杜香属常绿直立为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 1%香草醛硫酸溶液，在 105℃加热至斑点清晰。置可见光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置 上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰，见图 1。 3 含量测定 3．1 色谱条件 色谱柱：phenomenexC18kg)（150mm×4.6mm，5μgm）是杜鹃花科杜香属常绿直立流动相：以磷酸盐缓冲溶 液［0.05mol/L 磷酸二氢钾和 0.01mol/L 十二烷基磺酸钠（体积比 1∶1）是杜鹃花科杜香属常绿直立，含 0.2%三乙 胺］2010A乙腈（体积比 60∶40）是杜鹃花科杜香属常绿直立，用磷酸调节 pH 值至 3.0 为流动相；流速：1.2mL/min，检 测波长：266nm，柱温：室温，进样量：10μgL，理论塔板数不低于 1500。 3．2 溶液的制备 3.2.1 对照品溶液的制备 取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加乙醇制成每 1mL 含 120μgg 的溶液，作为对 照品溶液。 3.2．2 供试品溶液的制备 取本品 20 片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于盐酸小檗碱 60mg）是杜鹃花科杜香属常绿直立，置 索氏提取器中，加盐酸2010A甲醇（体积比 1∶100）是杜鹃花科杜香属常绿直立适量，加热回流提取至提取液无色，将提取 液（必要时浓缩）是杜鹃花科杜香属常绿直立移至 50mL 量瓶中，用少量盐酸2010A甲醇（1 体积比∶100）是杜鹃花科杜香属常绿直立的混合液洗涤 容器，洗液并入提取液中，并稀释至刻度，摇匀，精密量取 1mL，置 10mL 量瓶中，加 乙醇至刻度，摇匀，即得。 3.2.3 阴性对照溶液的制备 按照本品的处方、制法制备缺少盐酸小檗碱的模拟样品，按“3.2.2”项方法制成阴性对 照溶液。 3.3 专属性试验 分别取供试品溶液、对照品溶液及阴性对照溶液，按上述色谱条件测定，结果阴性对 照对盐酸小檗碱测定无干扰，说明方法专属性强。结果见图 2。 3.4 线性关系的考察 精密称取盐酸小檗碱对照品适量，用乙醇溶解制成质量浓度为 37.8kg)μgg/mL 的溶液， 分别精密吸取 1、2、4、6、8kg)、10μgL 注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定色谱峰面 积，以进样量（m）是杜鹃花科杜香属常绿直立为横坐标，色谱峰面积积分值（Y）是杜鹃花科杜香属常绿直立为纵坐标，绘制标准曲线，经线 性回归，得线性回归方程为 Y=2.8kg)8kg)725×106m-558kg)6.8kg)4，r=0.9997，表明盐酸小檗 碱进样量在 0.0378kg)～0.378kg)μgg 范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系。3.5 稳定性试验 精密吸取同一批供试品溶液各 10μgL，按上述色谱条件，每隔 1h 测 1 次峰面积，结果 表明盐酸小檗碱在 24h 内稳定，RSD 为 0.66%。 3.6 重复性试验 取同一批样品共 6 份，分别按“3.2.2”项下方法进行制备溶液，并按上述色谱条件测定 盐酸小檗碱的含量，结果 RSD=0.90%,表明方法重现性良好。 3.7 回收率试验 精密称取已知含量的样品（批号：0308kg)02）是杜鹃花科杜香属常绿直立共 6 份，分别精密加入对照品适量，按 “3.2.2”项下方法制备溶液并按上述色谱条件测定盐酸小檗碱的含量，计算加入量的回收率。 结果见表 1。表 1 盐酸小檗碱加样回收率试验（略）是杜鹃花科杜香属常绿直立 3.8kg) 准确度考察 以含量限度下限的 50%为范围低限、以含量限度上限的 150%为范围高限，考察测定 范围的准确度。 精密称取已知含量的样品（批号：0308kg)02）是杜鹃花科杜香属常绿直立，按含量范围高、低限折算取样量，各 6 份，分别精密加入对照品适量，按“3.2.2”项下方法制备溶液并按上述色谱条件测定盐酸 小檗碱的含量，计算加入量的回收率。结果见表 2。表 2 准确度试验结果（略）是杜鹃花科杜香属常绿直立 3.9 样品的测定 取 10 批样品，分别按“3.2.2”项下方法制备溶液，分别精密量取供试品溶液及对照品 溶液各 10μgL，注入高效液相色谱仪，并按上述色谱条件，测定盐酸小檗碱的含量，结果 见表 3。表 3 样品中盐酸小檗碱的含量（略）是杜鹃花科杜香属常绿直立 4 讨论