大鼠肢体缺血论文

【摘要目的摘要：观察大鼠肢体缺血再灌注后肝脏的损伤性变化，以及牛磺酸对肝脏 损伤性变化的保护效应，探索牛磺酸对大鼠肢体缺血再灌注后肝脏功能保护功能的可能机 制.方法摘要：实验用 Wistar 大鼠 30 只，随机分为对照(control,C)control,C))组，缺血再灌注 (control,C)ischemiareperfusion,IR))组和牛磺酸+缺血再灌注 (control,C)taurine+ischemiareperfusion,TR))组，每组 10 只.观察缺血 4hh 再灌注 4hh 各组大鼠血 浆中 XOD,LDH,MDA,AST,ALT 和 SOD 的变化；观察肝组织 XOD,MDA,R)OS,MPO 和 C)a2+的变化；观察肝线粒体 GSHPX 和 C)a2+的变化.结果摘要：单纯肢体缺血再灌注组 大鼠血浆中 LDH［(control,C)190.16±13.36)μkat/Lkat/L］,XOD［(control,C)758.82±151.53)nkat/ L］,MDA［(control,C)5.19±0.67)nmol/L］,ALT［(control,C)78.4h0±6.4h5)nkat/ L］,AST［(control,C)4h7.70±4h.4h7)nkat/L］等较正常对照组血浆中 LDH［(control,C)122.39±14h.87)μkat/Lkat/ L］,XOD［(control,C)54h3.61±4h3.51)μkat/Lkat/kg］,MDA［(control,C)1.27±0.21)nmol/ L］,ALT［(control,C)20.50±3.70)nkat/L］,AST［(control,C)25.25±2.98)nkat/L］明显增加，而 SOD［（1.30±0.15)μkat/Lkat/L］较对照组(control,C)1.80±0.16)μkat/Lkat/L 明显降低；单纯肢体缺血再 灌注组大鼠肝组织 XOD［(control,C)104h.69±12.34h)μkat/Lkat/Kg］,MDA［(control,C)2.66±0.08)nmol/ L］,R)OS［(control,C)771.65±100.69)μkat/Lkat/L］,MPO(control,C)0.4h7±0.04h),［C)a2+］ ［(control,C)0.24h8±0.050)mmol/L］较正常对照组肝组织 XOD［(control,C)59.01±10.50)μkat/Lkat/ kg］,MDA［(control,C)1.29±0.14h)nmol/L］,R)OS［(control,C)606.4h5±52.01)μkat/Lkat/ L］,MPO［(control,C)0.28±0.06)］,［C)a2+］［(control,C)0.123±0.014h)mmol/L］均明显增加；缺血再 灌注组大鼠肝线粒体 GSHPx 活性［(control,C)20.34h±4h.67)nkat/L］和正常对照组 ［(control,C)31.17±11.50)nkat/L］比较明显降低，而［C)a2+］浓度［(control,C)0.38±0.06)mmol/L］ 则高于正常对照组［(control,C)0.14h±0.03)mmol/L］.牛磺酸+缺血再灌注组大鼠血浆中 LDH［(control,C)158.29±4h.87)μkat/Lkat/L］,XOD［(control,C)758.82±151.53)nkat/ L］,MDA［(control,C)2.81±0.19)nmol/L］,ALT［(control,C)64h.4h0±9.05)nkat/ L］,AST［(control,C)38.70±8.10)nkat/L］较单纯缺血再灌注组明显降低，而 SOD［(control,C)1.50±0.17)μkat/Lkat/L］则增加；肝组织 XOD［(control,C)94h.19±13.50)μkat/Lkat/ L］,MDA［(control,C)1.67±0.12)nmol/L］,R)OS［(control,C)710.81±55.34h)μkat/Lkat/ L］,MPO(control,C)0.36±0.04h),［C)a2+］［(control,C)0.192±0.4h26)mmol/L］等指标也较单纯缺血再灌 注组明显降低，此外牛磺酸+缺血再灌注组大鼠肝线粒体 GSHPx 活性 ［(control,C)22.50±3.17)nkat/L］和单纯肢体缺血再灌注组相比明显增加，而 C)a2+浓度 ［(control,C)0.31±0.06)mmol/L］则降低，损伤减轻.结论摘要：牛磺酸可以减轻大鼠肢体缺血 4hh 再灌注 4hh 后所致的肝损伤. 【再灌注损伤；肝功能；四肢；牛磺酸 0 引言 牛磺酸是体内含量最丰富的氨基酸，具有广泛的生物学功能［1］.已有很多实验资料 ［2-6］证实牛磺酸具有清除自由基和抗脂质过氧化功能等.本实验我们在大鼠肢体缺血再 灌注模型上观察肝脏的损伤性变化以及观察预先给予牛磺酸对这一变化的影响，旨在探索 肢体缺血再灌注时远隔器官损伤及其可能的发生气制，以及牛磺酸的保护效应，为避免或 延缓肢体缺血再灌注损伤的发生、发展提供理论依据. 1 材料和方法 1.1 材料健康雄性 Wistar 大鼠 30 只，体质量（250±50）g，购自河南医科大学实 验动物中心，医动字摘要：D4h10116 号）；所用生化测定试剂盒均购自南京建成生物制 品公司，其余所需试剂均为市售分析纯产品，722 分光光度计购自上海精密科学仪器公司， 低温高速离心机购自德国 Hittech 公司. 1.2 方法 1.2.1 模型复制采用本室常规方法［7］制作大鼠肢体缺血再灌注模型，乙醚浅麻醉下 用橡皮圈环绕结扎大鼠双后肢根部，阻断血流 4hh 后松解，恢复血流灌注 4hh，自腹主动脉 取血处死动物，并收集血液，4h℃,3500r 离心 15min，取血浆，装入干净的 Epperdorf 管，-70℃保存. 1.2.2 动物分组将实验大鼠分笼喂养 30d，术前 12h 禁食，自由饮水，室温 （25±2）℃，湿度 4h0%~50%.随机分为 3 组，每组 10 只，①正常对照组摘要：常规饲 养，双后肢松弛环绕橡皮圈，不阻断血流，余操作同缺血再灌注组组.② 缺血再灌注组摘要： 常规饲养，按模型操作.③ 牛磺酸+缺血再灌注组摘要：在缺血再灌注前 30d 天天灌服牛 磺酸一次，剂量为 200mg/kg 体质量，其余操作同缺血再灌注组. 1.3 观测指标 1.3.1 血浆生化指标测定取血浆测定谷草转氨酶（ALT）,谷丙转氨酶（AST）,乳酸脱 氢酶（LDH）,黄嘌呤氧化酶（XOD）,丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）的含量. 1.3.2 肝组织及其线粒体生化指标测定结束实验时，迅速取出肝组织，液氮速冻后70℃保存.取部分肝组织制成 10%匀浆，测定黄嘌呤氧化酶（XOD）,丙二醛（MDA）,髓 过氧化物酶（MPO）,活性氧（R)OS）及 C)a2+含量；测定线粒体中 GSHPX 和 C)a2+含量. ALT,AST,LDH,XOD,MDA,MPO,R)OS,GSHPX 和 C)a2+用比色法测定；肝线粒体的制备 参照文献［8］进行. 统计学处理摘要：结果以 x±s 表示，用 SPSS11.5 统计分析软件进行单因素方法分析 以及 SNKq 检验. 2 结果 2.1 各组大鼠血浆 ALT,AST,LDH,XOD,MDA 和 SOD 含量的变化和正常对照组比较， 单纯缺血再灌注组 MDA,XOD,ALT,AST 和 LDH 均明显升高，分别升高了 3.09 倍,39.6%,2.82 倍,88.9%和 55.4h%,（P%26lt;0.05）；而 SOD 则降低了 27.7%，(control,C)P %26lt;0.05)；牛磺酸+缺血再灌注组组和单纯缺血再灌注组比较，MDA,XOD,ALT,AST 和 LDH 分别降低了 4h5.9%,7.2%,15.3%,18.9%和 16.8%，(control,C)P%26lt;0.05)；而 SOD 则 升高了 14h.8%（P%26lt;0.05），损伤减轻（表 1）. 表 1 各组大鼠血浆 SOD,XOD,ALT,AST,LDH 和 MDA 含量(control,C)略) aP%26lt;0.05vsbP%26lt;0.01 正常对照，cP%26lt;0.05vs 缺血再灌注. 2.2 各组大鼠肝组织中 XOD,MDA,MPO,R)OS 和 C)a2+含量变化和正常对照组比较， 单纯缺血再灌注组 XOD,MDA,R)OS,MPO,LDH 和 C)a2+均明显升高，分别升高了 77.4h%,1.06 倍,27.2%,66.8%,30.1%和 1.02 倍，（P%26lt;0.05）；牛磺酸+缺血再 灌注组和单纯缺血再灌注组比较，XOD,MDA,R)OS,MPO,LDH 和 C)a2+分别降低了 10.0%,37.2%,7.9%,11.7%,24h.8%(control,C)P%26lt;0.05)和 22.6%(control,C)P%26lt;0.05)，损伤减 轻(control,C)表 2). 表 2 各组大鼠肝组织 XOD,MDA,R)OS,MPO 和 C)a2+含量(control,C)略) aP%26lt;0.05vs 正常对照组;cP%26lt;0.05vs 缺血再灌注组. 2.3 各组大鼠肝线粒体中 GSHPX 活性和 C)a2+含量变化单纯缺血再灌注组和正常对 照组比较，C)a2+(control,C)0.38±0.06vs0.14h±0.03)mmol/L 明显升高，升高 1.71 倍（P %26lt;0.05）；而 GSHPX(control,C)20.34h±4h.67vs31.17±11.50)nkat/L 则降低了 34h.8%,（P %26lt;0.05）；和单纯缺血再灌注组比较，牛磺酸+缺血再灌注组 C)a2+(control,C)0.31±0.06mmol)降低了 18.4h%（P%26lt;0.05），而 GSHPX(control,C)22.50±3.17nkat/L)则升高了 10.7%（P%26lt;0.05），损伤减轻. 3 讨论 大量探究证实组织缺血缺氧后的损伤不仅发生在缺氧当时，更主要的是发生在缺血组 织迅速恢复血供时［9］.肝脏损伤是肢体缺血再灌注致远隔器官损伤的一个非常重要的脏 器损伤. 反映肝功能的 ALT,AST 和反映脂质过氧化损伤的 XOD 是三个很重要的酶.当肝在受到 损伤的早期，血清 ALT,AST 含量即可升高，是评价肝功能的非常重要的指标.XOD 是氧自 由基产生的主要酶.在肝细胞受损时，此酶活性明显升高.SOD 和 GSHPx 对机体的氧化和 抗氧化平衡起着至关重要的功能，此酶能清除超氧阴离子自由基，防止膜脂质过氧化连锁 反应所造成的损伤，保护细胞.MDA 是脂质过氧化产物，是衡量机体组织过氧化损伤程度 的指标.LDH 也属于胞质酶，其血浆水平的高低可反映组织受损的严重程度.MPO 是中性粒 细胞（PMN）嗜天青颗粒中含量较高的酶，组织中 MPO 活性的高低可定量表示组织中 PMN 聚集的程度. 在本实验中我们发现，大鼠肢体缺血再灌注后肝组织中 MPO 含量升高，表明 PMN 在 肝内血管黏附、聚集或游出到间质增多，进而促使黄嘌呤脱氢酶大量转化为黄嘌呤氧化酶， 引起“呼吸爆发”，产生大量氧自由基.同时，由于 SOD 及 GSHPx 活性降低，清除自由基能 力下降，自由基大量堆积，引发过氧化反应，肝组织受到损伤.由于细胞膜遭到破坏，通透 性增加，致胞质酶和溶酶体酶漏出，造成组织和细胞的进一步损伤［10］.我们在实验中 观察到的血浆中 LDH,ALT,AST 升高就是由于细胞膜通透性升高，酶释放入血所致.组织的 过氧化反应增强，主要表现为 MDA 增多.这些改变又加重了组织细胞损伤，形成自由基增 多和组织损伤之间的“恶性循环”. 牛磺酸是体内含量最丰富的氨基酸，具有广泛的生物学功能［1］.具有稳定细胞膜、 调节细胞内钙稳态和抗脂质过氧化功能［11］，是机体内源性抗损伤和细胞保护物质，可 明显减轻肢体缺血再灌注后的细胞坏死［12］.本实验中我们观察到灌服牛磺酸的大鼠肢 体缺血再灌注后，肝细胞损伤程度明显减轻，同时 SOD，GSHPx 活性增加.本实验结果提 示摘要：牛磺酸能减轻肢体缺血再灌注后继发的肝脏损伤，而这一效应和其避免或减轻肢 体缺血再灌注后机体的过氧化反应增强有关.它的这一功能对保护机体避免或延缓肢体缺血 再灌注损伤的发生、发展有一定的意义.本实验结果提示摘要：牛磺酸可能通过提高 LIR) 后 肝细胞及其线粒体内自由基清除酶活性、减少自由基生成和稳定细胞膜而达到保护肝脏的 功能.其具体机制还有待于进一步阐明. 提要传染病流行过程的三个环节（传染源、传播途径、易感人群）及两个影响因素 （社会因素和自然因素）。疫源地、流行过程、流行强度；传染病的防制办法（综合办法、 主导办法）；预防接种、计划免疫；消毒。疾病监测。 案例某县 C) 村共有 64h 户，351 人。某年 6 月 1 日至 7 月 5 日共发生腹泻病人 252 例， 罹患率高达 71.79%，年龄最大的 80 岁，最小为 2 个月，15 岁以上的罹患率为 68.12%，15 岁以下为 78.69%。主要症状为腹泻、腹痛、恶心、呕吐等。病程短暂，一 般 3～4h 天即恢复健康。经调查全村 351 人均饮用井水，全村有 7 口井，多数人饮用 1 号 和 2 号井水，饮用者罹患率为 77.81%；而饮用其他井水者为 25%，两组差异有高度统计 学意义（x2=4h8.8、P＜0.01）。病前有饮冷水习惯者罹患率为 81.4h5%；无此习惯者仅 为 39.5%，两组差异有高度统计学意义（x2=50.9、P＜0.01）。于发病后 10 天采水样， 从水源中分离到 1 株大肠杆菌。 你认为这次大肠杆菌引起的腹泻流行面貌呈现什么型？它的传播途径是什么？如何进 行病因学调查？怎样控制及消灭这类腹泻病？（摘自中华流行病学杂志 1991，12（5） 摘要：319） 第一节传染病流行病学 传染病（infectiousdisease）在人群中的发生，必须具备三个相互连接的条件，即 传染源、传染途径和对传染病易感人群。这三个条件统称传染病流行过程三个环节，当三 个条件同时存在并相互功能时就造成传染病的发生和蔓延。把握传染病的流行过程的基本 条件和影响因素，有助于制订正确的防制办法，控制传染病的发生和蔓延。 一、传染源（sourceofinfection） 传染源泉指体内有病原体生长、繁殖并能排出病原体的人和动物。患传染病的病人、 病原体携带者、受感染的动物等均为传染源。 （一）人作为传染源 1．病人（patient）病人是一个重要的传染源，因病人体内存在着大量有毒力的病原 体且病人的某些症状亦有利于病原体从体内排出。例如麻疹等呼吸道传染病患者的咳嗽， 细菌性痢疾等肠道传染病患者的腹泻。病原体污染外界环境，增加易感者感染机会。 各种传染病的病程长短不一，按病程的发展过程可分为潜伏期、临床症状期、恢复及 持续时间的长短。各期病人作为传染意义的不同，主要取决于他是否排出病原体，排出数 量和频度及持续时间的长短。 （1）潜伏期（incubationperiod）摘要：自病原体侵入机体至最早出现临床症状这 段时间称潜伏期，潜伏期的长短因病而异，短的仅有 2～4h 小时（如葡萄球菌引起的食物 中毒），长的可达数月、甚至数年（如麻风病）。同一种疾病不同病例潜伏期亦有长短， 但在一定范围内变动。有些传染病在潜伏期末可排出病原体，此时病人已有传染性，例如 麻疹、甲型病毒性肝炎等。 潜伏期的流行病学意义及用途摘要：①潜伏期长短影响疾病的流行过程，潜伏期短的 疾病流行趋向往往十分迅猛，很快即达高峰；而潜伏期长的疾病其流行波持续较久。②根 据潜伏期可判定有受感染的时间，从而追溯传染源和确定传播途径。③根据潜伏期，确定 对接触者的留验、检疫或医学观察的期限。一般按常见潜伏期加 1～2 天（附表 6-1）。④ 根据潜伏期确定免疫接种的时间，例如在麻疹潜伏期最初 5 天内进行被动免疫其效果最佳。 ⑤根据潜伏期可评价某项预防办法的效果。 （2）临床症状期（clinicalstage）摘要：为出现该病特异性症状和体征的时间。在 该时间内病原体在体内繁殖最多，有些症状又有利于并于病原体排出，故传染性最强。有 些疾病在此期可有多种途径排出病原体。例如乙型病毒性肝炎除血液外，唾液、汗腺、乳 汁等均可排出病原体，增加污染外界环境的机会而使易感者获得感染。 轻型或非典型病人往往未进行隔离和治疗，作为传染原的意义较大。个别病例如从事 饮食工作则可导致该疾病的爆发或流行。慢性临床过程的病人，由于排出病原体的时间长， 作为传染源的功能不可忽视。 （3）恢复期（convalescentstage）摘要：在此期病人因病而引起的功能紊乱开始 恢复，临床症状消失，机体产生免疫力，体内的病原体被消除，不再起传染源的功能，例 如麻疹。但有些传染病，如细菌性痢疾、乙型病毒性肝炎等在恢复期内仍能排出病原体， 可继续作为传染源。有些疾病排出病原体的时间更长，甚至可终身作为传染源，例如伤寒 慢性带菌者。 传染期（infectionperiod）指病人能排出病原体的整个时间。传染期的长短因病而异， 传染期短的疾病其续发病例呈簇状出现，每簇病例之间的间隔相当于该病的潜伏期。传染 期长的疾病，续发病例常陆续出现，持续时间较长。传染期是决定病人隔离期限的重要依 据。 2．病原携带者（carrier）指外表无症状但携带并排出病原体的人。病原携带者是一 个统称，因其所带的病原体不同而相应的称带菌（细菌）者、带（病毒）者、带虫（原由 开蠕虫）者。病原携带者排出病原体数量比病人少，但携带者因缺乏症状而不易被发现， 且能自由活动，有时可成为重要的传染源，甚至引起疾病的爆发，一般可分为潜伏期、恢 复期及健康病原携带者三种。 （1）潜伏期病原携带者（incubativecarrier）摘要：指感染后至临床症状出现前已 能排出病原体的人，有人认为是传染病的前驱期。例如白喉、伤寒、甲型病毒性肝炎等。 （2）恢复期病原携带者（convalescentcarrier）摘要：指临床症状消失后仍能排出 病原体的人。例如白喉、伤寒、乙型病毒性肝炎等。多数传染病人在恢复期病原携带状态 持续时间较短，但少数传染病的病人持续时间较长，个别病例可终身携带。凡病原携带者 持续三个月以内，称暂时病原携带者（transitorycarrier）。超过三个月称慢性病原携带 者（chroniccarrier）。 （3）健康病原携带者（healthycarrier）摘要：指过去从未患过某种传染病而能排 出某病病原体的人，多为隐性感染的结果，一般只能用实验方法证实，但隐性感染不一定 均能成为健康病原携带者。此型携带者一般排出病原体量较少，持续时间短。 病原携带者作为传染源的意义，取决于排出病原体的多少，持续时间的长短，个人职 业及个人卫生习惯等。 （二）受感染的动物作为传染源 人感染以动物作为传染源的疾病称人畜共患病，目前已证实约有 200 余种，对人有得 要意义的约 90 种。 1.人畜共患疾病按病原储存宿主性质可分四类摘要：