卵巢上皮性肿瘤组织论文

【摘要目的摘要：探索 3 羧基磷脂酰肌醇激酶（PI3K）和磷酸化蛋白激酶和磷酸化蛋白激酶 B（pAKTAKTAKT）和磷酸化蛋白激酶在上皮性卵巢肿瘤组织中的表达、相互关系及其意义.方法摘要：应用免疫组 化方法，检测 20 例正常卵巢、20 例卵巢良性上皮肿瘤、60 例卵巢癌组织中 PI3K 和 pAKTAKTAKT 蛋白的表达.结果摘要：PI3K 在卵巢癌组织中阳性表达率为 58.3%，高于正常卵巢 和良性上皮肿瘤组织的 5%,20%（P%26lt;0.01）和磷酸化蛋白激酶.pAKTAKTAKT 在卵巢癌组织中阳性表达率为 53.3%，高于正常卵巢和良性上皮肿瘤组织的 10%,20%（P%26lt;0.01）和磷酸化蛋白激酶.PI3K 和 pAKTAKTAKT 蛋白表达和卵巢癌临床分期、病理分级、有无淋巴结转移和远处转移有关（P 均%26lt;0.05）和磷酸化蛋白激酶，而和年龄、病理类型、有无腹水无关（P 均%26gt;0.05）和磷酸化蛋白激酶.卵巢癌组织 中 PI3K 和 pAKTAKTAKT 蛋白间的表达呈正相关（rs=0.501,P%26lt;0.001）和磷酸化蛋白激酶.结论摘要：AKT 是 PI3K 的一个重要靶基因，PI3K/AKT 信号传导通路异常活化和卵巢癌的发生、发展有关. 【卵巢肿瘤 1AKT磷脂酰肌醇 3AKT激酶 AKT 0 引言 PI3K/AKT 信号传导通路的异常活化可以使肿瘤细胞逃避凋亡，异常增殖分化，促进 肿瘤血管新生和肿瘤发生.已经发现在卵巢癌细胞中 PI3K 催化亚单位（P110）和磷酸化蛋白激酶的扩增和 AKT 的变异.AKT 的上游调节基因是 PI3K，一旦 PI3K 激活 AKT，AKT 可磷酸化一些和细 胞凋亡直接或间接相关的底物蛋白，促进卵巢癌的发生.化疗药物可以通过 PI3K/AKT 途径 使 DNA 修复及细胞产生调亡.人们一直希望通过卵巢癌发生、发展分子机制的探究寻找新 的治疗靶基因，为此我们应用免疫组化方法探索 PI3K/AKT 通路中 PI3K 和磷酸化 AKT（pAKTAKTAKT）和磷酸化蛋白激酶在卵巢癌组织中的表达及相互关系，为进一步加深对卵巢癌发病机制的理 解，并为卵巢癌的治疗提供新思路. 1 材料和方法 1.1 材料 2000AKT01/2007AKT01 手术切除和病理检查确诊的上皮性卵巢癌 60 例，其中 浆液性囊腺癌 37 例，黏液性囊腺癌 23 例，年龄 16～78（中位 47）和磷酸化蛋白激酶岁；正常卵巢组织 20 例，来源于同期因子宫肌瘤手术的标本；卵巢良性上皮性肿瘤组织 20 例，其中浆液性 囊腺瘤 12 例，黏液性囊腺瘤 8 例.上皮性卵巢癌按组织学分级分为摘要：高分化 （G1）和磷酸化蛋白激酶15 例，中分化（G2）和磷酸化蛋白激酶22 例，低分化（G3）和磷酸化蛋白激酶23 例；按 FIGO(1988 年)的分类标 准,Ⅰ~Ⅱ 期 39 例，Ⅲ~Ⅳ 期 21 例.有淋巴结转移者 36 例，无淋巴结转移者 24 例.所有患者 均为初发，术前均未接受过放化疗.兔抗人 PI3K 多克隆抗体（工作浓度为 1∶100）和磷酸化蛋白激酶，购自 北京中杉金桥生物技术有限公司.兔抗人 pAKTAKTAKT 多克隆抗体（工作浓度为 1∶50）和磷酸化蛋白激酶，购自美 国 CST 公司. 1.2 方法免疫组化 SP 法.每批染色均设阴性和阳性对照.阴性对照采用磷酸盐缓冲液 (PBS)代替一抗，阳性对照取 PI3K 和 pAKTAKTAKT 表达阳性的乳腺癌组织的石蜡切片.光学显微 镜下随机选取 5 个视野，每个视野记数 100 个细胞，计算阳性细胞数占总细胞数的百分比， 取 5 个视野的算术平均值.① 根据显色细胞的比例计分摘要：0 分(显色癌细胞为 0％)；1 分(显色细胞%26lt;10%);2 分(显色细胞 10%～50%);3 分(显色细胞 51%～80%)；4 分 (显色细胞%26gt;80%).② 根据细胞染色强度计分摘要：0 分(癌细胞无显色)；1 分（浅黄 色）和磷酸化蛋白激酶；2 分（棕黄色）和磷酸化蛋白激酶；3 分（黄褐色）和磷酸化蛋白激酶.积分=染色强度×阳性细胞数，积分范围 0～12 分，≥4 分定义为阳性表达. 统计学处理摘要：采用 SPSS10.0 统计软件进行统计学分析.采用统计学方法为 χ2 检 验和 SpAKTearman 等级相关. 2 结果 2.1PI3K 和 pAKTAKTAKT 蛋白在卵巢组织中的表达 PI3K 和 pAKTAKTAKT 蛋白在正常组和良性组的 阳性表达率明显低于卵巢癌组（P%26lt;0.01）和磷酸化蛋白激酶.PI3K 的阳性表达为黄棕色或黄褐色均匀 颗粒状，以胞质为主部分细胞核着色.pAKTAKTAKT 的阳性表达为黄棕色或黄褐色均匀颗粒状，细 胞质着色. 2.2PI3K 和 pAKTAKTAKT 表达和卵巢癌临床病理的关系 PI3K 和 pAKTAKTAKT 蛋白表达和卵巢癌临 床分期、病理分级、有无淋巴结转移和远处转移有关（P%26lt;0.05）和磷酸化蛋白激酶，而和年龄、病理 类型和有无腹水无关（P﹥0.050.05，表 2）和磷酸化蛋白激酶，而且两者相关（rs=0.501,P%26lt;0.001）和磷酸化蛋白激酶. 表 2PI3K 和 pAKTAKTAKT 蛋白的表达和卵巢癌临床病理的关系 3 讨论 PI3K/AKT 信号传导通路参和多种肿瘤的发生发展［1］.PI3K 是异二聚体，由催化亚 基（P110）和磷酸化蛋白激酶和调节亚基（P85）和磷酸化蛋白激酶组成［2］.AKT 是位于 PI3K 下游的一个重要激酶，二者 均是促进细胞生存和维持细胞正常功能关键的信息分子，并且构成细胞对外应激反应过程 中促进细胞生长、抑制细胞凋亡和维持细胞重要功能的信号传递链.有探究表明,P110α 干 扰 RNA 可以显著减少卵巢癌细胞的迁移、侵袭和增殖.PIK3CA 在约 80％的早期卵巢癌细 胞和一些上皮性卵巢癌中表达增高.Levine 等［3］在 198 例高分期卵巢上皮癌组织中对 编码 PI3CA 高度保守区域进行基因测序，发现 PI3CA 在卵巢癌的发生中起重要功能.PI3K 信号通路通过 AKT 和其他效应器起功能，参和了多种细胞的发生发展进程，包括细胞周期 调整、细胞生存、细胞黏附和运动、血管发生、葡萄糖代谢的稳定等.AKT 由氨基端的 PH 结构域、中间的激酶活性区及羧基端的尾部三部分构成.目前已发现至少存在 3 种 PKB 家 族成员摘要：PKBα/β/γ(AKTAKT1/2/3).Thr308 和 Ser473 两个位点同时磷酸化是 AKT 活 化所必需的.许多刺激因子如生长因子、白介素等均可激活 AKT.卵巢癌组织中常有 PKBβ 基因扩增和过度表达以及 PKBβ 激酶活性的增高，且和卵巢癌的恶性生物学行为密切相关. 有探究证实 PI3K 和 AKT2 的频繁激活和（或）和磷酸化蛋白激酶过度表达在卵巢癌中普遍存在［4］，导致 细胞反抗死亡或死亡延迟［5］.AKT 活化促使肿瘤细胞对化疗药物和放射治疗产生耐受 ［6］.这表明 AKT 的活化可以抑制细胞调亡，进一步说明 pAKTAKTAKT 参和卵巢癌的发展.因此 pAKTAKTAKT 可能和卵巢癌患者的预后有关，并可能为卵巢癌提供新的治疗靶点. 我们发现，PI3K 和 pAKTAKTAKT 蛋白在正常卵巢组织中的阳性表达率显著低于在卵巢癌中 的表达，临床期别越晚、病理分级越高，蛋白阳性表达率越高.两者的表达还和淋巴结转移、 远处转移有关，而和患者的年龄、病理类型、有无腹水无关，提示 PI3K 和 pAKTAKTAKT 和卵巢 癌细胞的增生、转移、浸润及预后有关.其机制可能和 AKT 通过激活其底物如增加细胞周 期素 D 转录、还可以通过磷酸化 P21 使细胞周期加速，促进肿瘤发展有关.总之，这些探 究提示，抑制 PI3K/AKT 信号通路可能对癌症患者具有治疗价值. 慢性咳嗽（chronicpAKTersistentcough，CPC）和磷酸化蛋白激酶是呼吸系统疾病中最常见的主诉之一， 是指咳嗽持续超过 3 周，经检查未能发现明显肺部疾病。由于许多患者仅仅有咳嗽症状， 检查难以发现病因方面客观证据，经常延误诊断，自 Irwin 提出慢性咳嗽解剖学诊断程序， 并经不断完善后，CPC 的病因确诊率提高至 90%以上，且不断有新的病因发现［1］。 1 病因和发病机制 目前比较一致的病因有咳嗽变异型哮喘（coughvariantasthma，CVA）和磷酸化蛋白激酶、鼻后滴漏 综合征（pAKTostnasaldripAKTsyndrome，PNDS）和磷酸化蛋白激酶、胃食管反流（gastro- esopAKThagealreflux，GER）和磷酸化蛋白激酶、嗜酸粒细胞性支气管炎（eosinopAKThilicbronchitis，EB）和磷酸化蛋白激酶 等，也有学者把药物（如血管紧张素转换酶抑制剂）和磷酸化蛋白激酶诱导性咳嗽和心理性咳嗽列在其中。 多中心前瞻性探究表明慢性咳嗽 32%～82%为单因素，18%～62%为多因素［2］。国 外有关文献［3］统计了 1258 例慢性咳嗽病因分析显示，慢性鼻炎相关性咳嗽占首位 34%，其中包括部分副鼻窦炎在内，其次为不典型哮喘 25%，食管病变 20%. 1.1PNDS 通常指鼻和鼻窦分泌物后滴，反复吸入、刺激咽喉局部反射引起慢性咳嗽，包括各种 病因，如慢性鼻炎、过敏性鼻炎、血管舒缩性鼻炎、鼻窦炎、鼻息肉等。因此并非独立性 疾病，而称为鼻后滴漏综合征。鼻黏膜可具有同下呼吸道相似的炎症反应，它的感觉神经 末梢含有刺激气道感觉神经，增加咳嗽反射敏感性、产生咳嗽的神经肽和神经递质，可能 是明显或潜在的鼻、鼻炎分泌物滴入喉或呼吸道，刺激该处的咳嗽感受器或通过神经反射 机制使咳嗽反射敏感化［4］。 1.2CVA CVA 是以慢性咳嗽为主要临床表现的一种哮喘的潜在形式，临床上主要表现为咳嗽持 续或反复发作超过 1 个月，常伴夜间或清晨发作性咳嗽、痰少，运动后加重，临床无感染 表现，或经抗生素较长时间治疗无效，用支气管扩张剂可使咳嗽发作缓解。感染因素、遗 传因素、环境和理化因素、某些触发因素包括各种过敏源和物理变化如花粉、尘螨、化学 物刺激烟雾、冷空气刺激或运动等［5，6］，咳嗽变异型哮喘的气道改变表现为炎症，即 炎性细胞浸润，小血管充血、渗出，支气管黏膜下肥大细胞活化，引起嗜酸粒细胞聚集和 支气管黏膜上皮损伤，上皮损伤后上皮细胞脱落，部分基膜增厚，和典型哮喘相似，IgE 介绍的Ⅰ型变态反应在咳嗽变异型哮喘的病理方面起重要功能［型变态反应在咳嗽变异型哮喘的病理方面起重要功能［7］。最近探究发现 SP 免 疫神经反应神经密度在咳嗽变异型哮喘组患者高于典型哮喘组和正常对照组，说明气道感 受器神经异常或许和咳嗽受体的高反应性有关，这可能是咳嗽变异型哮喘的病理特征之一 ［8］。 1.3GER 多由于食管下括约肌松弛，胃内容物经食管反流吸入气管所引起的疾病，大量吸入可 造成肺吸入综合征、吸入性肺炎、肺脓肿等，长期反复吸入可造成复发性吸入性肺炎、肺 纤维化和阻塞性细支气管炎，或仅表现为慢性咳嗽。其机制目前有两种学说摘要：（1）和磷酸化蛋白激酶 误吸学说，反流的胃内容物吸入到喉或气管支气管树，通过直接刺激喉或大气道的咳嗽感 受器或通过迷走神经反射使下呼吸道分泌物增多，再刺激咳嗽感受器或二者兼有产生咳嗽。 （2）和磷酸化蛋白激酶酸反流学说摘要：盐酸反流到远端食管时，刺激食管的感觉神经末梢，通过摘要： ①沿迷走神经传入传出咳嗽中枢；②神经冲动沿迷走神经传出纤维从脑内传到下呼吸道， 引起黏液分泌增加或释放神经递质，这些刺激咳嗽感受器；③神经冲动直接传递到气管刺 激咳嗽感受器等几种途径引起咳嗽［9］。 1.4EB 它作为一个独立的诊断才提出来不久，其病因和发病机制还不太清楚，尽管它常伴有 上气道症状，但上气道炎症和上气道高反应性不是其主要特征和发病机制，而其嗜酸粒细 胞性气道炎症和细胞因子机制和哮喘相似，但为什么会导致如此不同的病理生理改变，是 当前探究的难点。 1.5 血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）和磷酸化蛋白激酶 引起咳嗽的确切机制不清。可能是 ACEI 阻止内源性激肽降解。ACEI 刺激前列腺素类 物质合成，ACEI 阻止速激肽降解，这些都可以使炎症介质在气道内积聚，刺激咳嗽感受器 产生咳嗽。另外 ACEI 诱发的咳嗽还有一定的遗传易患性。 2 诊断 CPC 并没有严格定义［10］，通常指非常见胸肺部疾病引起的慢性咳嗽，一般要求符 合如下条件摘要：（1）和磷酸化蛋白激酶干咳作为唯一症状，或主要症状；（2）和磷酸化蛋白激酶咳嗽持续 3 周或以上； （3）和磷酸化蛋白激酶胸部影像学检查除外肺内明显病变；（4）和磷酸化蛋白激酶能除外吸烟相关性咳嗽；（5）和磷酸化蛋白激酶非血管紧 张素转换酶抑制剂 ACEI 诱发者，如未用 ACEI 类药物或已停用 4 周以上仍咳嗽者；（6）和磷酸化蛋白激酶 无近期上呼吸道感染，或治疗 8 周以上仍咳嗽者，符合上述条件 CPC 诊断成立。再进一步 问病史，围绕 CVA、PNDS、EB、GRE 等常见病因选择进一步检查方法。目前有很多诊 断检查技术［11］，可根据病情选用如痰液检查、肺量计检查、HRCT 扫描、内镜检查等。 近年又开展了一些评估气道炎症的检查方法，如导痰进行细胞因子和炎症介质的反复的检 查，呼出气 NO 检查，以及评估气道反应性的气道激发试验等。在临床病史资料提供线索 的基础上，合理检查和经验性治疗相结合的方法，是最好的处理策略，假如过分强调全面 检查，然后进行治疗，虽然针对性强，但费用昂贵，且患者往往得不到及早治疗。但假如 仅仅从经验性治疗，逐步探索诊断，则可能会延误某些疾病的诊断。 2.1PNDS 的诊断 主要根据患者所述的症状如感觉有东西滴入喉咙，需要清嗓、喉痒、鼻充血和流涕， 患者有时主诉声嘶，说话能引起咳嗽，结合鼻咽部检查和 X 线征象以及治疗效果做出诊断 ［2］。 2.2CVA 诊断标准［12］ （1）和磷酸化蛋白激酶咳嗽持续反复发作＞1 个月，常在夜间和（或）和磷酸化蛋白激酶清晨发作，运动后加重；（2）和磷酸化蛋白激酶 肺功能和 X 线胸片正常，查体无阳性体征；（3）和磷酸化蛋白激酶气道高反应性及可逆性气道阻塞；（4）和磷酸化蛋白激酶 抗生素和止咳药物无效，支气管扩张剂或糖皮质激素有效，并于停药后短期内复发； （5）和磷酸化蛋白激酶有个人过敏史或家族过敏史，变应原试验阳性；（6）和磷酸化蛋白激酶除外其他原因引起的慢性咳嗽。 2.3GER GER 引起的慢性咳嗽往往伴有剑突下或胸骨后烧灼感、咽喉不适、胃酸反流、口苦， 甚至咯出食物，具备上述典型症状，临床诊断并不困难，采用质子泵抑制剂治疗有效，则 提供进一步诊断依据，24h 食管 pAKTH 值检测（OPHM）和磷酸化蛋白激酶是最敏感的诊断方法，其方法为摘 要：利 pAKTH 梯度法经鼻腔置入食管双电极，分别位于食管括约肌上缘之上 5cm 和 20cm 处， 连续记录 24h 食管 pAKTH＜4 的次数，反流时间＞5min 的次数，最长反流时间、立位、卧位 pAKTH＜4 的时间占总监测时间的百分比。按 Demeester 总积分＞14.72 视为 GER；总各分 ＜14.72，但上下电极有咳嗽和反流相关概率≥75%视为 CPC 和 GER 相关［13］。此测 定对 GER 诊断有较高敏感性和特异性，但许多 GER 患者无 CPC［14］，其机制需进一步 探索。 3 治疗 CPC 的治疗首先应针对病因进行治疗。PNDS 对感染性鼻炎、鼻窦炎急性加重期应予 以抗生素治疗，必要时行前组鼻旁窦穿刺引流术，慢性阶段结合中医中药治疗。有鼻塞症 状者给予麻黄碱滴鼻液通畅鼻道，引流分泌物。有过敏征象者口服组胺受体阻滞剂，同时 应用鼻腔吸入。CVA 参照支气管哮喘的治疗，GER 首先尽量减少反流诱因，如减少晚餐 进食量，非凡是避免睡前进食；采取高枕侧卧位睡眠，部分患者减肥有效。咳嗽是重要的 呼吸道防御机制，清除吸入呼吸道的异物，排出呼吸道分泌物，但在病理情况下，剧烈咳 嗽和频繁的咳嗽亦可引起许多不良后果，影响日常生活，甚至产生并发症。因此在很多情 况下既要对病因治疗，又要对症状进行治疗。对咳嗽症状的止咳治疗通常采用各种中枢或 外周性镇咳药，经过对咳嗽反射机制的深入探究［15］，研制了一些强靶向性的止咳剂， 如功能于咳嗽受体、离子通道和分子表达，有的已广泛应用于临床，部分尚处于临床前阶 段，阿片样受体位于脑干和外周感觉神经中枢，吗啡和可待因和受体结合有很好的止咳功 能，但具有成瘾性，其中可待因成瘾性较弱，多种咳嗽合剂中含小剂量可待因兼具止咳祛 痰功能，且较平安。如联合愈创木酚甘油醚，促呼吸道黏液腺分泌，使痰液稀释，盐酸麻 黄碱具有拟肾上腺功能扩张支气管平滑肌，并且有收缩血管，减轻鼻充血；马来酸溴苯那 敏为 H1 受体拮抗剂、呋塞米通过调节呼吸道上皮四周咳嗽受体氯离子浓度对咳嗽受体具 有抑制功能，薄荷通过调节冷和薄荷受体而起止咳功能。NS1619 为钙激活钾通开放剂， 可能在治疗咳嗽中有应用前景。炎症和炎症介质调节剂，吲哚美辛抑制前列腺素（血栓素 A2）和磷酸化蛋白激酶引起的气道炎症和咳嗽，具有血栓素拮抗功能，用于治疗 ACEI 引起的咳嗽，功能于 神经肽和缓激肽受体的抑制剂，亦正进行探究［16］。 慢性咳嗽的治疗时间要长，当某种特异治疗部分有效时，不要停用，进一步探索有无 其他病因同时存在，并序贯加上相应治疗，另外还要注重特发性咳嗽可能由心理因素引起， 而咳嗽本身也可引起心理新问题，治疗时要注重心理疏导。 综上所述，慢性咳嗽最常见的病因是 PNDS、CVA、GER、EB 等，通过确定病因， 并遵循一定的诊断程序和方法，可以确诊，并能取得良好治疗效果。但仍需进一步探究人 的咳嗽反射的具体通路和机制，不同病因和不同发病机制，气道慢性炎症在咳嗽中的功能， 各种病因在一般人群中的发病率，为进一步诊治慢性咳嗽打下基础。 【摘要目的摘要：探索维生素 E(VitE)抗小鼠日本血吸虫病肝纤维化功能及其机制.方 法摘要：用日本血吸虫尾蚴皮肤敷贴法感染小鼠，构建日本血吸虫病肝纤维化模型，以肝 纤维化达Ⅱ级或Ⅱ级以上作为开始级或Ⅱ级或Ⅱ级以上作为开始级以上作为开始 VitE 治疗标志.实验分 5 组摘要：正常对照组、模型组 及 VitE 高、中、低剂量组(每日 150,50,5mg/kg),8wk 末处死动物，HE 和 VG 染色对肝 组织进行病理学检查，分光光度法检测肝组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD) 活性，免疫组化 SP 法检测肝星状细胞(HSC)标记物 α 平滑肌动蛋白(αSMA)表达，RTPCR 方法检测肝脏 α1(I)型前胶原 mRNA 表达.结果摘要：VitE 降低模型组肝脏 MDA 含量 ［(5.00±0.31)μmol/gvs(11.66±1.84)μmol/g,P%26lt;0.05mol/gvs(11.66±1.84)μmol/gvs(11.66±1.84)μmol/g,P%26lt;0.05mol/g,P%26lt;0.05］，提高 SOD 活性 ［(249.84±26.22)μmol/gvs(11.66±1.84)μmol/g,P%26lt;0.05kat/gvs(120.11±42.61)μmol/gvs(11.66±1.84)μmol/g,P%26lt;0.05kat/g,P%26lt;0.05］；减少 αSMA 阳 性表达［(0.41±0.02)vs(0.68±0.02),P%26lt;0.05］；降低肝脏胶原含量 ［(0.23±0.01)vs(0.60±0.11),P%26lt;0.05］和 α1(I)型前胶原基因表达 ［(0.28±0.01)vs(0.85±0.15),P%26lt;0.05］.结论摘要：VitE 具有抗小鼠日本血吸虫 病肝纤维化功能，其机制和抗脂质过氧化功能、抑制 HSC 活化和增殖、降低 α1(I)型前胶 原基因表达和胶原合成有关. 【血吸虫病，日本；肝硬化；维生素 E；氧化性应激；肝星状细胞；胶原 I 型