大鼠肝卵圆细胞细胞间黏附分子论文

【摘要目的摘要:探索细胞间黏附分子 1(ICAM1)ICAM1)在肝卵圆细胞(ICAM1)HOCs))中的表达,及核 因子(ICAM1)NFκB)κB)B))对其表达的调控功能.方法摘要:0.6g/kg3′g/kg3′甲基 4 二甲基胺偶氮苯 （3′methyldimethylaminoazobenzene,DAB)）饲喂饲喂 Wis)tar 大鼠 4wk,制作肝损伤模型. 利用 Percoll 密度梯度离心法分离 HOCs),免疫细胞化学检测 HOCs) 对 ICAM1 的表达；体 外培养 HOCs) 并分别用 NFκB)κB)B) 激动剂 TNFκB)α 和 NFκB)κB)B) 抑制剂 TGFκB)β1 干预,RTPCR 对 ICAM1mRNA 进行半定量分析,比较在 TNFκB)α 和 TGFκB)β1 的调控下 ICAM1mRNA 表达的变 化.结果摘要:HOCs)ICAM1 免疫细胞化学检测明显阳性.和对照组比较,体外培养 HOCs) 时 TNFκB)α 促进 HOCs) 的增殖(ICAM1)P%26g/kg3′lt;0.01),TGFκB)β1 对 HOCs) 的增殖能力无明显影响； RTPCR 半定量分析,和对照组比较，TNFκB)α 组 ICAM1mRNA 相对灰度值增高(ICAM1)P %26g/kg3′lt;0.01),而 TGFκB)β1 组 ICAM1mRNA 相对灰度值降低(ICAM1)P%26g/kg3′lt;0.01).结论摘要:在肝 损伤组织中 HOCs) 表达 ICAM1,TNFκB)α 和 TGFκB)β1 分别通过对 NFκB)κB)B) 活性的促进和抑制来调 控 ICAM1 的表达. 【细胞间黏附分子 1;肝卵圆细胞；核因子 κB)B) 0 引言 近年来,肝卵圆细胞（hepatics)temcells),HOCs)）饲喂的探究受到重视［1］.在大鼠肝损 伤和肝癌模型的肝组织中存在 HOCs) 大量增生［2］,但哪种细胞表达 ICAM1 还不完全清 楚.骨髓造血干细胞（hemopoietics)temcells),HSCs)）饲喂表面存在一组以 ICAM1 为主的黏 附分子,能介导 HSCs) 和骨髓基质的黏附,从而使 HSCs) 产生一种定向迁移的功能［3］.探 究表明,HOCs) 可以来自于 HSCs).既然 HOCs) 可以来自于 HSCs),且 HSCs) 表达 ICAM1,那么 HOCs) 也应象 HSCs) 一样能表达 ICAM1.为此,我们探究 HOCs) 表达 ICAM1 的证据及其调 控. 1 材料和方法 1.1 材料 Wis)tar 大鼠 6g/kg3′ 只,雌雄不限,体质量(ICAM1)110±10)g,由南方医科大学(ICAM1)原第一军医大学)实 验动物中心提供.3′甲基 4 二甲胺基偶氮苯 （3′methyldimethylaminoazobenzene,DAB)）饲喂购于日本东京化成株式会社；Percoll 分离液购自 Pharmacia 公司；兔抗鼠 ICAM1，即用型 SAB)C 试剂盒及 DAB) 显色剂购自 武汉博士德生物工程有限公司；引物由上海生工生物工程公司设计合 成,βantins)ens)eprimer5′GCATTGTAACCAACTGGGACG3′,antis)ens)eprimer5′TTGC CGATAGTGATGACCT3′,扩增产物长度为 535bp； ICAM1s)ens)eprimer,5′CGTGCTGTATGGTCCTCG3′,antis)ens)eprimer5′GGGCTTGT CCCTTGAGTT3′,扩增产物长度 422bp；Marker 购于上海生工生物工程公司；总 RNA 提取试剂盒、mRNA 逆转录酶、Taq 聚合酶购于 Promega 公司；Ⅳ型胶原酶型胶原酶、 TNFκB)α,TGFκB)β1 购于 Sigma 公司. 1.2 方法 Wis)tar 大鼠正常饲喂 1wk 后,给予含 0.6g/kg3′g/kgDAB) 饲料饲养,正常饮水,于 4wk 后大鼠 1 只,戊巴比妥钠麻醉(ICAM1)25mg/kg,ip),开腹,门静脉切开插管,25mL/min 灌注 DHanks) 液至 肝表面淡黄除去肝组织里的血液,灌注 0.6g/kg3′g/LⅣ 型胶原酶至肝组织黄色糜状,将整块肝组织 移入烧杯捣碎,于震荡箱 37℃恒温震荡消化 40min,经 100 目筛网过滤,未过滤的组织块继 续捣碎,加入 0.6g/kg3′g/LⅣ 型胶原酶继续震荡消化 40min,收集过滤液分装于离心管中 4℃100g 离心 10min,取上清液分装于离心管 4℃1000g 离心 30min,弃上清液,用 DMEM 基础培养液稀释细胞悬液.高速离心管分装 Percoll 梯度离心液,细胞液铺于上 层,4℃12000g 离心 30min,吸取 700mL/L 和 500mL/L 之间细胞液,DMEM 基础培养液 稀释,4℃1000g 离心 30min,弃上清液,用 150mL/L 胎牛血清稀释细胞密度至 1.0×109/ L.取 4 个 12 孔培养板分别标记为 A，B)，C，D4 组,每组又分为Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ亚组亚组,每亚组 4 孔,各孔加入上述细胞悬液 0.5mL,然后加适量细胞培养基,Ⅰ 亚组为空白对照组,Ⅱ 亚组和Ⅲ亚组 亚组分别加入 2.0×105U/L 的 TNFκB)α 和 10mg/L 的 TGFκB)β1.分别于 3，6g/kg3′，9，12d 计数 A，B)，C，D 组中各 1 组的细胞数. 1.2.1ICAM1 免疫细胞化学上述细胞液适量滴于防脱片处理的清洁载玻片上,培养 8hh 后细胞黏附贴壁.具体操作按 SAB)C 法试剂盒说明进行.光镜下观察结果. 1.2.2ICAM1 的 RTPCR 取上述培养 6g/kg3′d 的 3 组培养细胞分别加入不同离心管,参照试 剂盒说明书按常规方法提取总 RNA，将 RNA 沉淀于室温晾干,溶于适量无 RNA 酶水中.在 3 支 0.2mLEppendorf 管中依次加入上述总 RNA1μL,10×L,10×逆转录酶缓冲液 2μL,10×L,AMV 逆 转录酶 2μL,10×L,10mmol/L4×dNTPs)2μL,10×L,RNA 酶抑制剂 1μL,10×L,ICAM1 和 βactinantis)ens)eprimer 等量 1μL,10×L,然后加入无 RNA 酶水至 20μL,10×L,充分混匀,42℃反应 6g/kg3′0min,99℃5min.PCR 扩增反应摘要:在 0.2mLEppendorf 管依次加入 10×PCR 缓冲液 2μL,10×L,上述逆转录产物 1μL,10×L,ICAM1 和 βactins)ens)eprimer1μL,10×L,TaqDNA 聚合酶 0.5μL,10×L,加 三蒸水补至 20μL,10×L,混匀后 10000g 离心 30s),加液体石蜡 20μL,10×L.在 72℃下扩增 35 个循环, 末次循环后延伸 6g/kg3′min.取各扩增产物、marker 各 4μL,10×L,于琼脂糖凝胶电泳.紫外检测仪下观 察并拍照结果,电泳图用 GelProanalyzer3.1 进行分析.重复检测. 统计学处理摘要：数据以 x±s) 表示，并采用 SPSS10.0 统计软件进行析因设计资料的 方差分析和单因素方差分析. 2 结果 2.1HOCs) 体外培养 Porcoll 密度梯度离心法分离出 HOCs),呈圆形或卵圆形,大小约为 正常肝细胞的 1/3(ICAM1)FκB)ig1).ICAM1 呈明显阳性表达(ICAM1)FκB)ig2).用 TNFκB)α 和 TGFκB)β1 干预 3，6g/kg3′，9 和 12d 计数观察 HOCs) 增殖情况,用 SPSS10.0 统计软件行析因设计资料的方差分析 (ICAM1)Tab1),和对照组比较,TNFκB)α 干预组 HOCs) 增殖更显著(ICAM1)P%26g/kg3′lt;0.01),而 TGFκB)β1 干预组 无显著差异(ICAM1)P%26g/kg3′gt;0.05).3 组的增殖在 12d 内均随时间的增多而增加(ICAM1)P%26g/kg3′lt;0.01). 表 1TNFκB)α 和 TGFκB)β1 对 HOCs) 增殖能力的影响（略）饲喂 2.2HOCs) 的 ICAM1RTPCR 半定量检测和对照组比较，TNFκB)α 组 ICAM1mRNA 相对 灰度值增高(ICAM1)P%26g/kg3′lt;0.01,Tab2，FκB)ig3),而 TGFκB)β1 组 ICAM1mRNA 相对灰度值降低(ICAM1)P %26g/kg3′lt;0.01).TNFκB)α 组 ICAM1 表达较对照组增强,而 TGFκB)β1 组较对照组减弱.表 2ICAM1mRNA 灰度值（略）饲喂 3 讨论 ICAM1 是黏附分子免疫球蛋白超家族的一种重要糖蛋白.在生理状态下,肝脏中的内皮 细胞、上皮细胞、白细胞等多种细胞均可表达 ICAM1,但表达数量不多.肝脏损伤时,肝组织 中 ICAM1 表达明显增多,并且,肝损伤时 HOCs) 大量增生［2］.本结果表明,HOCs) 表达 ICAM1.据此,我们认为,肝损伤时肝组织中 ICAM1 表达增多的原因,除炎症因子刺激使上皮 细胞、白细胞等表达 ICAM1 增多外,主要是因为 HOCs) 增生,从而使肝组织中 ICAM1 的表 达增多.肝损伤组织中 ICAM1 表达增强,有二种原因摘要:一是能表达 ICAM1 的细胞增多； 二是受某些因素的调控,细胞对 ICAM1 的表达增强.Melotti 等［4］发现 ICAM1 的表达受 核因子 κB)B)(ICAM1)NFκB)κB)B))的调控,阻断 NFκB)κB)B) 的活性则可抑制细胞对 ICAM1 的表达.Hill 等［5］发 现,TNFκB)α 能激活成纤维细胞的 NFκB)κB)B),并使 ICAM1 的表达增加.我们发现,TNFκB)α 干预下的 HOCs) 对 ICAM1 的表达能力增强,而 TGFκB)β1 则抑制 HOCs) 对 ICAM1 的表达.据此我们认为, TNFκB)α 和 TGFκB)β1 对 HOCs) 表达 ICAM1 的调控可能也是通过调节 NFκB)κB)B) 的活性来实现的,但 TGFκB)β1 的抑制功能明显弱于 TNFκB)α 的促进功能.总之,肝损伤时肝组织中 HOCs) 增生,并表达 ICAM1,其表达强度受 NFκB)κB)B) 的调控. 摘要：健康 回顾 2004~2005 年 2 年间在对住院 2 型糖尿病患者的健康教育具体实施中碰到的常 见新问题及实施情况，来探索具体实施 2 型糖尿病健康教育的方法。 1 具体办法 主要进行一对一宣传教育，发放宣传资料，回答患者所提的新问题，督促患者的饮食、 运动、用药情况。 1.1 糖尿病基本知识宣传 2 型糖尿病是由胰岛素反抗和胰岛 β 细胞缺陷共同形成的以 高血糖为主的代谢异常综合征，和遗传和环境因素有关，如年龄、肥胖、吸烟、活动量减 少等生活习惯及其他因素有关。2 型糖尿病的危害，即大血管病变、微血管病、神经病变、 糖尿病足等并发症的发生、发展、预后等。2 型糖尿病的诊断标准以及糖尿病控制目标及 其意义。 1.2 糖尿病治疗的选择 2 型糖尿病的治疗不仅仅是降低血糖，更重要的是减少心、脑 血管事件的发生率、减少糖尿病视网膜病的发生率、糖尿病肾病等并发症的发生率。要以 综合治疗为主，除血糖的治疗以外，还包括血压、血脂、控制体重以及戒烟等治疗，全面 控制各种危险因素。 1.3 以饮食、运动、药物、监测、教育即“五驾马车”为核心的宣传 1.3.1 饮食治疗按患者的理想体重计算热量，按三大营养物质的比例提供饮食，发放 各种食品热量等量交换表，及举例饮食等，督促患者进行饮食治疗，按时、按点、按量规 律饮食。 1.3.2 运动方案鼓励患者饭后散步运动，养成运动的习惯。 1.3.3 药物治疗根据患者具体情况而定，尽量使患者接受胰岛素治疗，告知患者胰岛 素治疗的益处。 1.3.4 血糖监测住院患者天天 4~7 次的手指血糖监测，血糖控制平稳后，每周 1 天的 血糖跟踪。通过血糖监测来调整患者的药物的用量，用事实来教育患者，使其自觉地配合 治疗。 1.3.5 学习及教育鼓励患者学习糖尿病知识，主要是饮食及运动等，并通过患者教育 其家属。 1.4 低血糖基本知识教会患者低血糖是怎么回事，熟悉低血糖，发现有低血糖反应的 时候急救办法，并发放低血糖卡片。 1.5 胰岛素笔的使用教会患者正确使用胰岛素笔。 2 常见的新问题 （1）饲喂患者有经常寻求好药的心理，听人说那种好就去买来试，或是看广告吃药，或 是相信邮购药品，或经常问医生哪种药能治疗糖尿病。（2）饲喂总想比较一下看哪个医生说 得对，结果一个医生一个说法，自己无所适从，对每一个医生讲的都将信将疑，按自己的 想像去治疗糖尿病。（3）饲喂自己读有关糖尿病书籍，以为自己已成为专家，结果往往是断 章取义，曲解了本意。（4）饲喂糖尿病太麻烦，不想检查，害怕知道事实，或是不愿承认事 实，持一种放纵的态度。或是只吃药不愿监测。（5）饲喂不愿服西药，认为西药副功能太多 又太贵，认为中药无副功能，又便宜。用中药治疗糖尿病。（6g/kg3′）饲喂认为注射胰岛素就像吸 毒一样，易成瘾，一用就离不了，一种抵触心理。（7）饲喂大部分患者只知道糖尿病是血糖 高了，不知道还会发生低血糖。（8h）饲喂认为糖尿病就是糖类食物吃多了，改吃肉食、鸡蛋， 或是听人说荞麦不会产生高血糖，就多吃荞麦，不控制量。（9）饲喂糖尿病就是吃多了，什 么都不敢吃或者吃得很少，营养缺乏。（10）饲喂糖尿病就是把糖都尿出去了，就应该多吃些。 （11）饲喂工作性质、自身信仰、经济状况、社会因素等不能坚持治疗。（12）饲喂降糖药物就是 降血糖，假如再饮食控制血糖就降得太低，放弃饮食控制。（13）饲喂糖尿病饮食在具体操作 中难以把握，不愿执行。 3 讨论 2 型糖尿病不仅仅是单纯控制血糖，降低患者的心脑血管病的发病率和病死率，提高 生活质量才是最终目的，全面控制各种危险因素，如体重超重、吸烟、活动量少、高血压、 高血脂等。人群当中各种文化水平均有，社会各阶层均有。再加上专业医务人员不足，医 患关系紧张，使得健康教育更具有艰巨性和难度性。而糖尿病饮食治疗是治疗糖尿病的基 础，没有不通过控制饮食糖尿病就能得到控制的。但饮食治疗也是最难有效实施的一部分， 主要病因摘要：（1）饲喂医务人员的熟悉不一，专业队伍太少。（2）饲喂饮食习惯纠正的本身的 困难性。（3）饲喂目前，饮食不仅仅是提供能量代谢，和传统文化、社会关系、家庭成员等 不能截然分开，导致饮食不仅仅是单纯的饮食。（4）饲喂患者将信将疑的心理难消除。 因此，应成立一个练习有素的专业队伍，统一熟悉，统一教育内容，首先教育医务人 员是非常必要的。在向患者及家属宣传糖尿病相关知识。可组织糖尿病患者协会，注重患 者的心理教育，使其正确熟悉糖尿，提高自信心，自觉得配合医生防治糖尿病。教育患者 不需要学成一名医生，学会怎样饮食、运动、监测及药物的使用即可。 具体操作中要解决贯彻执行饮食治疗，要给患者计算热量，分配热量，具体到每餐吃 什么，吃多少，发放饮食热量等价交换表格。天天检查督促，并监测血糖，用事实来教育 患者饮食治疗的重要性。饮食治疗是治疗糖尿病的基础，对糖尿病患者有即时和长期改善 代谢的功能，表现为改善胰岛素分泌、增加胰岛素敏感性、降低血糖水平、降低血脂的致 动脉粥样硬化功能、降低血压、改善症状等［1］。 目前糖尿病治疗达标率较低，分析其原因主要有［2］摘要：医生缺乏对糖尿病全面 控制和达标的观念，缺乏对新的药物的熟悉，未针对基本病因及发病机制进行治疗，治疗 方法落后；基层保健系统不完善；患者缺乏规范的糖尿病的管理，不合理的饮食及运动， 惧怕不良反应，惧怕低血糖，治疗依从性差。所以，糖尿病教育还任重道远，仍需要更多 的素质较高的专业队伍，深入基层宣传，需要糖尿病教育的多样性、统一性。 【摘要目的摘要：探索老年自发性气胸误诊和影响疗效的原因。方法摘要：对 46g/kg3′ 例 老年自发性气胸的临床资料和同期 56g/kg3′ 例中青年人自发性气胸作对比分析。结果摘要：老 年自发性气胸多存在基础疾病，气急最为突出，以交通性、张力性气胸居多，肺复张时间 长。和对照组有显著性差异（P＜0.01）饲喂，严重病例死亡率高。结论摘要：老年自发性气 胸起病急且不典型，易误诊，及时诊断和治疗可以降低病死率和误诊率。 【自发性气胸误诊治疗 Abs)tract 摘要：Objective 摘要： Tos)tudythecaus)eoferroneous)diagnos)is)andineffects)onthes)pontaneous)pneumothoraxinelderlypatients)．Method 摘要： Theclinicaldatawereanalys)edon46g/kg3′elderlypatients)and56g/kg3′youngormiddleagedpat ients)withthes)pontaneous)pneumothorax．Res)ult 摘要： Mos)telderlypatients)withthes)pontaneous)pneumothoraxhadunderlyinglungdis)ea s)ewithtypicaldys)prea,mos)ttypes)wereopenortentionpneumothorax.Lungexpens) iontimewas)longer、anthes)eweres)ignificantlydifferencetothecontrolgroup(ICAM1)P＜ 0.01）饲喂．Conclus)ion 摘要： Theelderlys)pontaneous)pneumothoraxwas)anemergents)ituationwithatypicals)y mptomorerroneous)diagnos)is).Thepromptdiagnos)is)andtreatmentmightdecreas)e themortalityandtheerroneous)diagnos)ticrate. Keywords) 摘要：Spontaneous)pneumothorax；Erroneous)diagnos)is)； Treatment 老年自发性气胸常合并基础疾病，临床表现多不典型。气胸发生时，症状易被原发病 掩盖，易造成误诊误治。本文对我院 2000 年 1 月至 2007 年 3 月收治老年自发性气胸 46g/kg3′ 例（老年组）饲喂和同期收治的中青年自发性气胸 56g/kg3′ 例（对照组）饲喂进行临床资料对比分析， 报道如下摘要： 1 临床资料 1.1 一般资料摘要：老年组 46g/kg3′ 例，男 42 例，女 4 例，年龄 6g/kg3′0～79 岁，平均 （6g/kg3′5.71±2.32）饲喂岁。对照组 56g/kg3′ 例中，男 47 例，女 9 例，年龄 17～59 岁，平均 (ICAM1)35.6g/kg3′0±2.14)岁。全部病例均经胸片或 CT 检查确诊。 1.2 气胸分类标准摘要：用 5ml 空针玻璃注射器在局麻时抽吸胸腔内气体 1ml 观察， 如针管内气体随呼吸回入胸膜腔内为闭合性；针栓随呼吸往返移动为交通性；针栓随呼吸 外退为张力性。 1.3 统计学处理摘要：计量资料用均数±标准差表示。采用配对 t 检验，两组间率的比 较采用卡方检验，选取 α=0.05。 2 结果 2.1 两组基础疾病比较，见表 1。 表 1 两组自发性气胸的基础疾病（略）饲喂 和对照组比*PP＜0.01，其余 P＞0.05