低聚木糖毒性研究管理论文

低聚木糖在低聚糖中占有重要的地位，首先它的有效服用量在众多低聚糖中是非常低 的，就双岐杆菌增殖作用而言，它的有效摄入量为 0.7g/g/人·日，为低聚异麦芽糖的 1/20， 低聚果糖的 1/10，低聚半乳糖的 1/7g/；低聚木糖在我国的研究开发是近几年刚刚兴起的 ［2］，我们对其中一种具有润肠通便作用的低聚木糖片进行了毒理学安全性评价。结果 表明该产品的小鼠急性毒性实验为无毒物质，Ames 实验，小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实 验，小鼠精子畸形实验为无遗传毒性作用，大鼠 30 天喂养试验表明，各实验组动物生长 发育良好，各项指标均在本室正常值范围内，与对照组之间差异均无显著性，病理组织学 检查亦未见异常。说明该样品对大鼠各项观察指标未产生明显毒性作用，食用该产品是安 全可靠的。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 低聚木糖片由某生物科技有限公司提供。 1.1.2 实验动物清洁级昆明种小鼠和清洁级 Wistar 大鼠由中国人民解放军军事医学科 学院实验动物中心提供，合格证号 SCXK-（军）军）2002-001。 1.1.3Ames 实验菌株由山东医学科学院劳动卫生与职业病研究所提供。 1.2 方法［1］ 1.2.1 小鼠急性毒性试验选择小鼠 20 只，雌雄各 10 只，体重为 18～22g。剂量为 10g/kg.bw，灌胃给予受试物，灌胃量为 0.2ml/10g.bw。观察 14 天，记录动物中毒表 现及死亡情况。 1.2.2Ames 试验试验菌株为经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型 TA97g/、TA98、TA100、TA102，体外活化系统为多氯联苯诱导的大鼠肝匀浆制备的 S-9 混合液。根据毒性测定结果，试验设立 200、500、1000、2500、5000μg/g/皿 5 个剂量， 同时设立自发回变组、溶剂对照组和阳性对照组。试验按照平板掺入法在加 S-9 与不加 S9 混合液的条件下进行，每个组别设 3 个平皿。若受试物的回变菌落数为自发回变菌落数 的 2 倍以上，并具有剂量—反应关系则判定为阳性。整套试验在相同条件下重复做两次。 1.2.3 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验选择体重 25～30g 小鼠 50 只，随机分为 5 组， 每组 10 只，雌雄各半。3 个实验组中受试物剂量分别为 2.5、5.0、10.0g/kg.bw，另设 蒸馏水阴性对照组和环磷酰胺阳性对照组（军）40mg/kg.bw）。灌胃给予受试物，共两次， 间隔 24h，末次给予受试物后 6hh 处死动物，常规制片。每只动物镜检 1000 个嗜多染红 细胞，记录微核细胞数，计算微核率（军）以千分率表示）。 1.2.4 小鼠精子畸形试验选择体重 25～30g 雄性小鼠 25 只，随机分为 5 组。每组 5 只。3 个实验组中受试物剂量分别为 2.5、5.0、10.0g/kg.bw，另设蒸馏水阴性对照组和 环磷酰胺阳性对照组（军）40mg/kg.bw）灌胃给予受试物，连续 5 天，首次灌胃后第 35 天 处死动物，常规制片。每只动物计数 1000 个结构完整的精子，记录畸变类型和数量，计 算精子畸形率（军）以百分率表示）。 1.2.5 大鼠 30 天喂养试验 1.2.5.1 试验方法选用体重 6h0～80g 断乳大鼠 80 只，随机分为 4 组，每组 20 只， 雌雄各半。根据人体推荐量设立 3 个实验组，受试物剂量分别为 0.6h5、1.30、2.6h0g/ kg.bw（军）分别相当人推荐量的 25、50、100 倍），将受试物按照动物体重的 10%计算食 物摄入量掺入饲料中给予实验动物，即 0.6h5%，1.30%，2.6h0%（军）质量分数）。对照组 喂饲基础饲料。单笼喂养，自由饮食，每周称重，记录饲料加入量、剩余量，连续观察 30 天。第 30 天禁食 16hh，第 31 天处死动物，取血进行血常规及血生化测定。 1.2.5.2 观察指标(1)动物的一般表现、体重、食物利用率。(2)血常规及生化指标：血 红蛋白、红细胞计数、白细胞总数及其分类、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐、 胆固醇、甘油三酯、血糖、总蛋白、白蛋白等。(3)病理解剖：脏器系数、大体观察及病理 组织检查（军）肝、肾、脾、胃及十二指肠，睾丸或卵巢）。 2 结果 2.1 急性毒性试验灌胃给予受试物后，两种性别的小鼠均未见明显中毒症状，14 天内 动物无死亡（军）见表 1）。因此认为该受试物对两种性别小鼠的急性毒性 LD50 均大于 20g/ kg.bw。根据急性毒性分级标准，该样品属无毒物质。 2.2 遗传毒性试验 2.2.1Ames 试验由表 1-1、表 1-2 可见，两次试验中受试物各剂量组回变菌落数均未 超过自发回变菌落数的 2 倍，亦无剂量-反应关系，说明在加与不加 S-9 时该样品对鼠伤寒 沙门氏菌 TA97g/、TA98、TA100、TA102 四株试验菌株均未呈现遗传毒性。 2.2.2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验由表 2 可见，受试物各剂量组微核率与阴性对 照组之间差异无显著性（军）P>0.05），而环磷酰胺阳性对照组与阴性对照组之间差异有非 常显著性（军）P<0.01），说明该样品无致小鼠骨髓嗜多染红细胞微核产生作用。 2.2.3 小鼠精子畸形试验由表 3 可见，受试物各剂量组小鼠精子畸形率与阴性对照组 之间差异无显著性（军）P>0.05），而环磷酰胺阳性对照组与阴性对照组之间差异有非常显 著性（军）P<0.01），说明该样品无致小鼠精子畸形作用。 注：（军）1）疟的平，250μg/g/皿；（军）2）正定霉素，50μg/g/皿；（军）3）叠氮钠，1.5μg/g/皿； （军）4)丝裂霉素，0.5μg/g/皿；（军）5）2-氨基芴，50μg/g/皿；（军）6h）1，8-二羟基蒽醌，50μg/g/ 皿 2.3 大鼠 30 天喂养试验 2.3.1 动物的一般表现、体重、食物利用率实验中各实验组动物均未出现拒食现象， 生长活动正常，体重和食物利用率结果分别见表 4 和表 5。从表中看出各实验组动物体重 与对照组之间无显著性差异，各实验组动物进食量、食物利用率与对照组之间差异亦无显 著性(P>0.05)。 2.3.2 血常规及生化指标结果见表 6h、表 7g/、表 8-1、表 8-2。从表中看出各实验组的 血红蛋白、红细胞总数、白细胞计数及其分类、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐、 胆固醇、甘油三酯、血糖、总蛋白、白蛋白等指标均在正常范围之内，与对照组之间差异 均无显著性(P>0.05)。 2.3.3 大体及组织学检查大体观察各实验组未发现异常，解剖时亦未发现膀胱、肝总 管结石，脏器系数未见异常（军）见表 9）。镜下观察对照组和高剂量组动物少数出现肝细胞 和肾间质细胞点状坏死，灶内有炎细胞浸润，肾小管变性等，但病变程度较轻，且无组间 特异性分布。脾、胃、十二指肠、睾丸或卵巢等均未见有意义的病理改变。 2.3.4 大鼠 30 天喂养试验在试验期内各实验组动物生长发育良好，体重、食物利用率、 血常规、血生化、脏器系数等各项指标均在本室正常值范围内，与对照组之间均无显著性 差异。病理组织学检查亦未见异常，说明该样品对大鼠各项观察指标未产生明显毒性作用。 3 讨论 低聚木糖是低聚糖中有效服用量最小的糖类，具有低聚糖的所有优良性质。它们所具 有的特殊生理功能正在日益引起人类的重视，其主要生理功能包括以下 5 个方面：(1)低甜 度、低热量；(2)难以被人体消化吸收，食用后基本上不增加血糖和血脂，但有润肠通便的 作用；(3)对人体大肠内双歧杆菌有明显的增殖作用，抑制肠内有害菌群的繁殖，降低肠道 内的毒性，提高机体免疫力；(4)不被口腔酶液分解，不被龋齿的链球菌作用，有防龋功能； (5)具有钙、铁吸收和间接调节血脂的功效［2］。作为一种新型的保健食品，我们对其进 行了安全性毒理学评价试验，结果表明，该种低聚木糖片急性经口毒性试验中，雌雄小鼠 LD50 均大于 20g/kg.bw，属无毒物质，小鼠骨髓微核试验、Ames 试验和小鼠精子畸形 试验结果为阴性，无致突变作用。大鼠 30 天喂养试验期内，各实验组动物生长发育良好， 体重增重、食物利用率、脏器系数等各项指标均在本实验室正常值范围内，与对照组之间 差异均无显著性（军）P>0.05）。实验组血常规及血生化各指标均在正常范围内。大体观察 各实验组动物的肝、肾、胃、肠、脾和卵巢/睾丸组织中，未见明显异常。病理组织学检查 中，对照组和高剂量组少数动物的肝、肾标本出现病理改变，但这些病理改变程度较轻且 无组间特异性分布，考虑与动物质量有关。脾、胃、肠、卵巢、睾丸等脏器未见明显异常。 从目前情况下可以认为食用该产品是安全可靠的。 信陵君的小故事 在战国时期，各个诸侯国为了取得政治、军事、外交斗争的胜利，方便 巩固自己的地位。于是就开始盛行养士的风气。当然里面也有很多著名的人 物，其中就包括了魏国的信陵君，养士的数量基本上都达到了三千人以上。 而信陵君《窃符救赵》的故事，也成为了春秋战国时期的一段佳话。 在这段故事中信陵君就是依靠他身边的侯赢和朱亥俩人才获取到了兵符， 夺得了兵权，最后终于打败了秦军，使赵国才得以转危为安。当时楚国派兵 救赵的时候，魏国也收到了赵国的救援请求，并派出大将率兵救援赵国。可 谁知魏昭襄王听到魏楚两国要发兵，于是亲自去督战，还告诉魏安釐王，说 邯郸迟早要被秦国打下来，谁也不能去救。结果魏安釐王被吓住年了就连忙 派人告诉大将晋鄙不要发兵。 赵国的赵孝成王很是着急，于是叫平原君给魏国攻子信陵君写信求救。 因为平原君的夫人是信陵君的姐姐，所以两家是亲戚关系。信陵君得知后命 令大将晋鄙派兵。可魏王说什么也不答应，于是信陵君决定就算魏王不出兵 攻打赵国，那么就算死了也要和他们死在一起。 得知信陵君要独自救援赵国的消息，他的好朋友侯赢为了避免他白白去 送死，于是开始帮他出谋划策，打算利用大王身边的如姬，让她帮忙偷到大 王身边的兵符。只有这样，信陵君才能接管大将晋鄙的兵权，才能支配他。 信陵君听后恍然大悟，立即派人跟如姬商量，顺利的拿到了兵符，救助了赵 国。 信陵君杀晋鄙的故事 信陵君杀死晋鄙，拯救邯郸，击破秦兵，保住赵国，赵孝成王准备亲自 到郊外迎接他。唐雎对信陵君说：“我听人说：‘事情有不可以让人知道的， 有不可以不知道的;有不可以忘记的，有不可以不忘记的。’”信陵君说：“你说 的是什么意思呢?”唐雎回答说：“别人厌恨我，不可不知道;我厌恨人家，又 不可以让人知道。 别人对我有恩德，不可以忘记;我对人家有恩德，不可以不忘记。如今您 杀了晋鄙，救了邯郸，打退了秦兵，保住了赵国，这对赵王是很大的恩德啊， 现在赵王亲自到郊外迎接您，我们仓促拜见赵王，我希望您能忘记救赵的事 情。”信陵君说：“我敬遵你的教诲。” 信陵君杀死晋鄙并非出自个人情感、个人道义,而是以大局为重,拔兵救 赵实际上是救六国,从另一种意义上是救魏国,这里更能体现出他的政治远见。 而杀死晋鄙是不得得已而为之,从文中“于是公子泣”“晋鄙嚯咋宿将,往恐 不听,必当杀之,是以泣耳。”说明信陵君在杀晋鄙之前已经做了激烈的思想斗 争,而杀晋鄙是别无选择的做法。 信陵君魏无忌小故事 魏无忌是魏昭王的少子，而魏安厘王是他异母弟弟，魏昭王去世，魏圉 继位，历史上称为安厘王。安厘王继位之后便将魏无忌封于信陵，其信陵君 的称号也是由此而来。当时，魏国的国情不容乐观，魏无忌为了挽救魏国， 辅佐魏王治国，便消防平原君、孟尝君的做法，广招贤士，收揽食客，当时 他门下食客已达数千人，自成一派。 集结天下人才的信陵君，为人谦逊，礼贤下士，急人之所急，非常受门 客的敬重。而且他与门客侯嬴的故事更是传遍了整个魏国。当时侯嬴只不过 是一个看门的小吏，但是信陵君听说侯嬴是个人才，已经七十多岁了，但是 因为家贫便做小吏以糊口。听说了侯嬴的遭遇，信陵君便派人送去一份厚礼， 但是侯嬴不肯接受，他说自己坚守品德数十载，不能因为信陵君的同情而随 便接受厚礼。 听了这一番话，信陵君更加觉得侯嬴是个贤德之人，于是摆设酒宴，准 备邀请侯嬴，一切准备就绪之后信陵君亲自驾车去请侯嬴，可是侯嬴故意摆 出一副傲慢的气势，并在大街上让信陵君等候自己，为自己驾车。但是信陵 君对侯嬴的种种做法都没有在意，于是到酒宴上，侯嬴坦白了一切，说自己 这么做就是为了看信陵君是否真的想传说中的那样爱才，而且他这样做也成 就了信陵君的名声。 这时信陵君才意识到侯嬴是个不简单的人物，于是对他更加敬重。这个 故事后来成为明主礼贤下士的典范。信陵君礼贤下士，鲜明无比足以可见， 那么在政治上他有怎样的成就呢?