甲氧西林葡萄球菌研究论文

［摘要］目的：比较分析耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)MRS))仪器检测与纸片扩散检测的检出 率。方法：采用 KB 纸片扩散法，全自动微生物分析仪法，并以琼脂稀释法为标准对临床 分离的 63 株葡萄球菌进行检测，比较 3 种方法的检出率。结果：对 63 株葡萄球菌(MRS)凝固 酶阳性 50 株，凝固酶阴性 13 株)3 种方法检出率分别为 60.3%、57.1%、50.8%。含 4%氯化钠(MRS)NaCl)MH)MHH 平板药敏纸片扩散法和 VITEKH32 型自动微生物鉴定系统法差异无 显著性(MRS)P＞0.05)，与琼脂稀释法差异无显著性(MRS)P>0.05)，而仪器法与琼脂稀释法差异无 显著性(MRS)P＞0.05)。结论：KB 纸片扩散法,仪器法和作为 MRS) 检测推荐方法的含盐琼脂平 板稀释法对 MRS) 的检出率,三者差异均无显著性，仪器法与 KB 纸片扩散法均可用于临床 常规实验室 MRS) 的检测。 ［关键词］耐甲氧西林葡萄球菌；纸片扩散法；仪器法；琼脂稀释法 耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)Methicil)MHl)MHinresistantStaphylococcusHresistanresistantStaphylococcustS)taphyl)MHococcus，MRS))所致院内感染 已成为全球范围内一个越来越严重的问题［1］，有效预防和控制其感染的关键是及时准 确地检出 MRS)，为临床合理选择抗生素提供依据［2］，因而快捷、准确的检测方法对快 速采取有效的感染控制措施和 MRS) 感染流行病学调查十分重要。MRS) 的检测方法有苯唑 西林纸片扩散法、肉汤稀释法、琼脂扩散法、EHtest 法、仪器法及 PCR 技术检测 mecA 基因等［3］，我们将临床分离的 63 株葡萄球菌用含 4%氯化钠(MRS)NaCl)MH)MHH 平板苯唑西林 纸片扩散法和 VITEKH32 型自动微生物鉴定仪法进行检测比较，并以含 6μg/mlg/ml)MH 苯唑西林 的琼脂稀释法为标准，评价其准确性。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 菌株及其来源自 2006 年 1 月至 2006 年 5 月从江医二附院临床患者的痰、血、 尿、脓液、前列腺液及阴道分泌物等标本，经常规分离得到 63 株葡萄球菌，包括凝固酶 阳性葡萄球菌 50 株，凝固酶阴性葡萄球菌(MRS)CNS))13 株。另 MRS) 阳性参考菌株 ATCC(MRS)R)43300，MRS) 阴性金黄色葡萄球菌 ATCC25923，购自卫生部临检中心。 1.1.2 苯唑西林纸片购自北京天坛生物制品有限公司，苯唑西林标准品购自重庆药友 制药有限公司，S)DS) 琼脂糖、溴化乙锭、溶菌酶、蛋白酶 K 为美国 S)igma 产品，丙烯酰 胺、双丙烯酰胺 TEMED 和 TBE 为美国 Gibcobrl)MH 公司产品。 1.1.3 仪器法国生物梅里埃公司生产的 VITEKH32 型鉴定系统及配套的 GPS)HS)V 葡萄 球菌药敏检测卡。 1.2 方法 1.2.1 含 4%NaCl)MHMHH 平板纸片扩散法由于苯唑西林较甲氧西林稳定、不易失活，通 常用苯唑西林代替甲氧西林测定葡萄球菌。配制 0.5 麦氏单位菌液接种于含 4%NaCl)MH 的 MHH 平板，贴 1μg/mlg/片苯唑西林药敏纸片，35℃、24h 观察结果(MRS)CNS) 孵育 48h)金黄色葡 萄球菌(MRS)S)A)抑菌圈≥13mm 为敏感，11mm～12mm 为中介，≤10mm 为耐药，凝固酶 阴性葡萄球菌≥18mm 为敏感，≤17mm 为耐药。 1.2.2 琼脂稀释法 NCCLS) 推荐为测定耐甲氧西林葡萄球菌的参考方法，在含 4%NaCl)MH、6μg/mlg/ml)MH 苯唑西林 MHH 平板中点种 0.5 麦氏单位菌液，经 35℃、24h 孵育检 查琼脂表面有无细菌生长，只要有一个菌落生长即判为 MRS)。 1.2.3 仪器检测挑取待检菌落，严格参照 GPS)HS)V 卡说明书配制一定浓度菌悬液，置 备 GPS)HS)V 药敏卡上机，用 VITEKH32 型全自动微生物鉴定仪检测结果。 1.2.4 质量控制以金黄色葡萄球菌 ATCC(MRS)R)43300 为 MRS) 阳性参考菌株，金黄色葡 萄球菌 ATCC25923 为 MRS) 阴性参考菌株及药敏质控菌株与实验菌株同时进行检测。 2 结果 3 种方法对 MRS) 的检出率见表 1。 表 13 种方法对 MRS) 的检出率（略） 对 3 种方法 MRS) 检出率进行 χ2 检验，含 4%NaCl)MHMHH 平板药敏纸片扩散法 MRS) 检 出率与琼脂稀释法 MRS) 检出率差异无显著性(MRS)χ2=1.16，P>0.05),VITEKH32 型仪器检测 法 MRS) 检出率与琼脂稀释法 MRS) 检出率差异也无显著性(MRS)χ2=0.51，P＞0.05),同时纸片 扩散法 MRS) 检出率与 VITEKH32 型仪器检测法 MRS) 检出率差异也无显著性(MRS)χ2=0.13，P ＞0.05)。 3 讨论 目前国内外虽然用以检测 MRS) 的方法很多，由于 MRS) 本身对甲氧西林耐药存在有不 均一性，且甲氧西林不稳定，故常用苯唑西林代替甲氧西林来检测 MRS)。由于纸片扩散法 操作简便、价格低廉，不需要特殊仪器设备，可以和普通药敏实验同时进行，在多种 MRS) 检测方法中，目前很多医院临床常规微生物实验室仍在采用这种方法，从我们的实验结果 看，纸片扩散法与被 NCCLS) 推荐为参考方法的琼脂稀释法对 MRS) 检出率差异无显著性， 因此可以用于临床常规微生物实验室,对 MRS) 进行常规检测。VITEKH32 型 GPS)HS)V 药敏 卡方法简单、快捷，从结果看其 MRS) 检出率与琼脂稀释法差异无显著性，虽然其与纸片 扩散法 MRS) 检出率也无明显差异，但其检测速度比纸片扩散法更快捷，可以及时给出准 确的报告,节约了时间,因此评估 GPS)HS)V 药敏卡的准确性，为临床找出一种准确而简单、 快捷的筛选 MRS) 的方法是极有意义的，且 VITEKH32 型微生物鉴定药敏分析系统配套使用 的 GPS)HS)V 卡葡萄球菌药敏检测，其苯唑西林检测孔含有 4%NaCl)MH，符合 NCCLS) 推荐的 检测 MRS) 的方法标准［4］，因此，仪器法 GPS)HS)V 卡可用于葡萄球菌耐甲氧西林的检测， 且简便准确、快速。所以纸片扩散法和仪器法均可用于医院常规实验室 MRS) 检测,但对有 条件的实验室建议采用仪器法，目前也出现了一些更准确可靠的方法，即对耐甲氧西林葡 萄球菌进行基因层次的分型检测，并也出现了商品化的几种 mecA 基因乳胶检测法 ［5］，也是目前可采用的较好的方法。 ［摘要］芦荟是具药用、食用和观赏价值的一类重要植物。本文介绍了适于作药用栽 培的芦荟品种，描述了它们的生物学特性和药用价值，并对芦荟的无公害栽培技术包括环 境条件、繁殖方式、田间管理和病虫害防治等进行了叙述和探讨。 ［关键词］药用芦荟；品种；无公害；栽培 芦荟是百合科芦荟属（Al)MHoeL.）多年生常绿肉质植物。芦荟具有很大的药用价值。据 考证，最早把芦荟用于医治人类疾病的是 5000 年前的古埃及人。德国籍的古埃及学者耶 比鲁斯在古埃及金字塔的木乃伊棺里，发现的纸莎草古书中就记载着芦荟的药效，这是人 类发现的最早的有关芦荟记载的文字。隋末唐初中国始有芦荟的文字记载。据《神农本草 经》、《本草纲目》等书记载，中国古代的医药学家们把芦荟当作一种可“明目镇心”的清 热寒药来用。现代医学证明芦荟对糖尿病、胃肠病、气管炎、消化系统出血、高血压、心 脑血管病、肝病等均有不同程度的治疗、保健作用，另外对溃疡病尤其是口腔溃疡的治疗， 对烧伤、烫伤、毒虫咬伤的治疗，效果亦佳［1］。本文对一些具有药用价值的品种进行 了介绍，并简要叙述了无公害栽培技术，以期为芦荟品种的合理利用和安全、优质生产提 供一定的参考。 1 具有药用价值的品种 全世界有野生芦荟约 300 多种，另外，还有变种和杂交种约 200 多种。品种不同， 其药效成分和含量也不同。众多种类的芦荟中，可供药用的约有 10 余种，可食用的有 6 种，其余用于观赏［2，3］。 1.1 开普芦荟（Al)MHoeferoMil)MH1）又称青鳄芦荟、好望角芦荟、非洲芦荟，原产南非。 株形很大，叶色深绿，叶缘有红褐色角质齿，30 片~50 片叶簇生于茎顶。茎粗而长，株 高 3m~6m。初春在叶腋中抽出总状花序，花色橙黄色，结蒴果，靠种子繁殖。在《希腊 本草》、《德国药典》等书中记载的药用芦荟就是开普芦荟，因此又叫药典芦荟。从叶子 的切口中收集滴落的汁液，起初为黄色，以后变成褐色，经日晒干燥后成块，粉碎后就是 药典中记载的“芦荟末”。采割叶片时，有丰富的深黄色汁液，收集此液，蒸发浓缩，冷却 凝固，即得“肝色芦荟”干胶。将汁液用狂火煮沸浓缩，冷却凝固，可得“光亮芦荟”干胶。富 含芦荟大黄素和 βH芦荟甙。该品种主要用于生产芦荟干胶。 1.2 树芦荟（Al)MHoearboresenresistantStaphylococcussMil)MH1）又称日本芦荟、木剑式芦荟、木立芦荟，在我 国民间称为龙角芦荟。原产南非，主要产于日本。叶片灰绿色细长，叶肉厚实，背部突出， 两边呈锯齿状，主干茎部不断长出侧枝，可用作插枝繁殖，冬天抽穗开花，花像纺锤形， 红色。含较多的芦荟大黄素，备受人们喜爱，已形成商业化生产，适合于加工成干粉，保 健品，鲜叶可食用和药用。 1.3 库拉索芦荟（Al)MHoebarbadenresistantStaphylococcussisMil)MH1）俗称美国芦荟。又名巴巴多斯芦荟、翠叶 芦荟、沙漠芦荟、真芦荟等。原产中美洲的巴巴多斯岛和库拉索岛。茎短，叶呈螺旋状或 轮生排列，披针状，叶长 30cm~70cm，先端渐尖，基部宽 4cm~15cm，边缘有小齿。 叶灰绿色或蓝绿色，上有白色斑点，随叶片生长白色斑点逐渐消失。花黄色但不结籽，靠 侧枝分枝繁殖。是目前利用最广泛的品种。含有丰富的凝胶，可加工成干粉、凝胶，鲜叶 可直接食用、美容、药用。美洲大量栽培，中国也有栽培。 1.4 元江芦荟（Al)MHoeyuanresistantStaphylococcusjianresistantStaphylococcusgenresistantStaphylococcussisXionresistantStaphylococcusgZhenresistantStaphylococcusgsp.nresistantStaphylococcusov.）别名亚哈菲、逼火丹、 碧合草、火炼丹等。在我国云南干热河谷、广东雷州半岛、海南、广西、台湾以及缅甸、 马来西亚等东南亚地区分布。须根发达，具粗壮根状茎，长者可达 1m 多。株型较松散， 高 1m 以上。叶簇生于基部，直立，叶在苗期呈螺旋状排列或轮生排列两种，到成株期呈 螺旋状排列。叶肥厚汁多，狭披针形，皮壁较薄，叶片在生长过程中出现不规则的扭曲， 两面平滑，先端渐尖。叶呈浅绿色，上有白色斑点，随叶片生长白色斑点逐渐消失。叶缘 上有钝硬齿。被认为是早先引入的库拉索芦荟变种。 1.5 中华芦荟（Al)MHoeveraL.VarchinresistantStaphylococcusesis(MRS)Haw.)aberg）又名斑纹芦荟、中国芦荟、 象鼻草、罗纬草、油葱等。主要生长在云南红河流域，是库拉索芦荟的变异品种，其形态 酷似库拉索芦荟，但叶尖更尖，叶色呈浅绿色，有明显的白色斑纹，花粉红色或黄色，繁 殖力强，靠分枝繁殖。鲜叶含丰富的水和凝胶，主要用于美容、食用、药用，可加工成饮 料等。 1.6 皂质芦荟（Al)MHoesaponresistantStaphylococcusaria）又称皂角芦荟，几乎无茎，叶子表面具有斑纹，叶 簇生基部，呈螺旋状排列，叶有半直立和平行状两种类型。叶肥厚，狭披扁平，有美丽的 白色斑点斑纹，叶长 20cm~70cm，宽 3cm~10cm，叶先端渐尖，叶缘有刺状小齿。 皂质芦荟由于其叶片上美丽的斑纹，最具观赏价值。叶片中几乎不含芦荟大黄素。药效平 稳，对外伤、皮肤病、美容效果好，对溃疡病治疗效果明显。 2 栽培技术 2.1 芦荟对环境条件的要求芦荟喜暖、喜光、不耐寒、耐干旱、忌积水。要求通风良 好，防止气温过高、湿度过大。地势宜高不宜低，以利排水。土壤以沙质壤土为佳，以保 证良好的透性和保水力，过粘的土壤植株矮小，分蘖少［2］。当气温高于 38℃或低于 5℃时停止生长，0℃即发生冻害。此外，为保证芦荟产品的卫生安全性，生产基地的选择 应远离有污染的工矿企业和交通干道。 2.2 栽培方式露地栽培在我国海南、广东、广西 3 省(MRS)区)和福建、云南及四川部分地 区可进行露地栽培。要注意防止栽培地积水，引起芦荟烂根死亡和斑病问题。塑料大棚栽 培：我国亚热带偏北的长江流域，福建西北部地区等用塑料大棚技术可以保证芦荟安全过 冬，同时还可避免梅雨季节和夏季高温曝晒等不良气候的影响。温室栽培：华北平原、东 北平原等温带地区应以温室栽培，在严冬时有加温条件，可确保芦荟安全过冬。家庭盆栽： 不仅可美化居室，而且可随时采摘新鲜的芦荟叶片供家庭保健使用。 2.3 繁殖方法和种植时间多数品种采用无性繁殖方式［4］。分株：从植株周围的地下 茎会长出许多嫩芽，一株 2a 生的芦荟，在 1 年内能分蘖 10 个~15 个，当分蘖长到 4 片～5 片小叶和 3 条～5 条小根时，可从母株上分离，定植于大田。芦荟产生分芽主要在 春夏秋 3 季，最佳的分蘖期是 4 月～6 月。扦插：芦荟长高后，可从茎的顶部 10cm~12cm 处切断，或从叶腋处切取长 10cm~15cm 的幼芽，再将其倒挂在荫凉处 1 周，使切口收缩干燥，然后扦入搭盖荫棚的苗床中，插后约 20d 生根。扦插苗生根 3 条～ 5 条时，就可移栽大田。春季（3 月~5 月）和秋季（9 月~11 月）为最佳移栽时期，尤以 春分至清明期间定植为好，不但容易成活，而且可以延长营养生长期，有利于提高叶片产 量。 2.4 定植及田间管理园地种植前要求翻耕深度为 15cm~20cm，结合整地每公顷施腐 熟有机肥 30t~37.5t、氮磷钾复合肥 20kg~30kg。畦长 15m~20m、宽 100cm、畦高 15cm~20cm、畦间距 40cm。一般每畦 2 行，株行距为 40cm×50cm；栽时不宜太深， 以覆盖底下叶片基部为适，栽苗后要将苗 4 周的松土按实，然后浇水，并及时遮荫。芦荟 的全年管理分为 3 个阶段。4 月~5 月芦荟生长旺盛，需要肥水量大，结合浇水进行 1 次 ~2 次追肥；7 月~8 月要注意通风遮荫和浇水，有条件的可用遮阳网覆盖，以保证芦荟不 休眠；12 月~2 月不再浇水，加强中耕、保墒、保温的管理。 3 病虫害防治 芦荟叶表皮具有角质层，很少受害虫危害。病害主要有芦荟炭疽病、褐斑病和软腐病。 一般发病率为 10%~15%重者可达 20%~30%［5］。 3.1 选用抗病品种栽培中尽量选用抗病性较强的品种。一般皂质芦荟最为抗病，其次 是库拉索芦荟。 3.2 加强栽培管理温室大棚应特别注意保持芦荟生长所需的适宜温度（15℃~35℃） 及湿度（75%~85%）。若冬季室内温度低于 8℃时应采取增温措施并注意通风换气。在 高温炎热强光照的夏季应适当遮荫，可选 50%的遮阳网。春夏灌水要勤且量大，秋季逐渐 减少次数和用量，每次都要灌透，避免从上部淋浇。雨后应特别注意防止雨水倒灌，以免 导致炭疽病和褐斑病的发生或流行。肥料管理也要随季节更替而改变，春秋是芦荟生长旺 季，施肥量偏多而勤，夏季量小次数少；冬季则更少。 3.3 化学防治目前常用的预防药剂主要有 70%代森锌可湿性粉剂、16.7%乙烯菌核利 可湿性粉剂+50%百菌清可湿性粉剂、喹枯灵、施宝克等。可在发病前每隔 1 周左右喷 1 次，连续 3 次~5 次后即可达到明显的预防效果，上述药剂对早期的炭疽病和褐斑病还有 治疗作用。对芦荟软腐病还可在发病初期向植株基部喷洒 1∶1∶100 的波尔多液或 4000 倍 农用链霉索，连续 2 次~3 次，每次间隔 7d 左右。总之，为了在芦荟整个生长过程中应采 取预防为主。综合防治的策略，通过利用抗病品种和合理的栽培管理措施，提高植株抗病 能力；注意在早期消灭病原物及控制它们的繁殖和扩散，同时严禁从发病区调运种苗，以 确保安全生产。 【摘要】小鼠胚胎干细胞（embryonresistantStaphylococcusicstemcel)MHl)MH,ES)cel)MHl)MH）体外培养可以分化成为外 胚层组织，并进一步分化为神经元和神经胶质细胞。这些细胞已用于中枢神经系统疾病的 细胞替代治疗和治疗药物的研发。小鼠胚胎干细胞定向分化为神经细胞的方法主要有拟胚 体介导的神经细胞分化、基质细胞诱导的神经细胞分化、默认模式介导的神经细胞分化、 单层粘附培养诱导的神经细胞分化和遗传工程介导的神经细胞分化等。本文综述了这些分 化方法。 【关键词】胚胎干细胞;神经细胞;分化 ProgressinresistantStaphylococcusdirecteddifferenresistantStaphylococcustiationresistantStaphylococcusofmouseembryonresistantStaphylococcusicstemcel)MHl)MHsinresistantStaphylococcustonresistantStaphylococcuseural)MHcel)MH l)MHs 【Abstract】MouseembryonresistantStaphylococcusicstemcel)MHl)MHscanresistantStaphylococcusgiverisetoectodermal)MHderivatives inresistantStaphylococcuscul)MHtureanresistantStaphylococcusdcanresistantStaphylococcusbefurtherinresistantStaphylococcusducedinresistantStaphylococcustonresistantStaphylococcuseuronresistantStaphylococcussanresistantStaphylococcusdgl)MHiaforcel)MHl)MHrepl)MHacemenresistantStaphylococcusttherapiesinresistantStaphylococcusthecenresistantStaphylococcustral)MHnresistantStaphylococcuservoussystemanresistantStaphylococcusdforuseinresistantStaphylococcusdrugdiscovery.Th emethodsofdirecteddifferenresistantStaphylococcustiationresistantStaphylococcusofmouseembryonresistantStaphylococcusicstemcel)MHl)MHsinresistantStaphylococcustonresistantStaphylococcuseural)MHcel)MHl)MHsi nresistantStaphylococcuscl)MHudenresistantStaphylococcuseural)MHdifferenresistantStaphylococcustiationresistantStaphylococcusfromembryonresistantStaphylococcusicstemcel)MHl)MHsviaembryoidbodies,stroma l)MHcel)MHl)MHinresistantStaphylococcusducednresistantStaphylococcuseural)MHdifferenresistantStaphylococcustiationresistantStaphylococcus,defaul)MHtmodel)MHmediatednresistantStaphylococcuseural)MHdifferenresistantStaphylococcustiationresistantStaphylococcus,a dherenresistantStaphylococcustmonresistantStaphylococcusocul)MHtureinresistantStaphylococcusducednresistantStaphylococcuseural)MHdifferenresistantStaphylococcustiationresistantStaphylococcus,genresistantStaphylococcuseticenresistantStaphylococcusginresistantStaphylococcuseerinresistantStaphylococcusgmediated nresistantStaphylococcuseural)MHdifferenresistantStaphylococcustiationresistantStaphylococcusanresistantStaphylococcusdsoonresistantStaphylococcus.Herewereviewthesemethodol)MHogies. 【Keywords】embryonresistantStaphylococcusicstemcel)MHl)MH;nresistantStaphylococcuseural)MHcel)MHl)MH;differenresistantStaphylococcustiationresistantStaphylococcus 小鼠胚胎干细胞于 1981 年首次由 EvanresistantStaphylococcuss 和 KaufmanresistantStaphylococcus［1］成功分离建系，它们来 源于胚泡的内细胞团（inresistantStaphylococcusnresistantStaphylococcusercel)MHl)MHmass,ICM），这些细胞具有稳定的二倍体核型，在体外 可以分化为三个胚层的多种细胞。将小鼠胚胎干细胞重新植入胚泡可以参与形成胚胎。体 外 ES) 细胞维持未分化状态依赖于一些细胞因子的存在，如白血病抑制因子 （l)MHeukemiainresistantStaphylococcushibitoryfactor,LIF）［2］。撤去这种自我更新的刺激信号后，ES) 细胞很 快分化为多种细胞。这些属性使 ES) 细胞成为非常有用的发育生物学和功能基因组学研究 的生物系统［3］。 1 拟胚体（embryoidbodies,EBs）内神经细胞的分化