荧光免疫试剂研究管理论文

［摘要］目的：合成(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Eu3+复合物，并用于构建妊娠 相关血浆蛋白 A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 固相时间分辨免疫荧光试剂。方法：用 PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 作为载体结合 BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Eu3+ 和生物素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+亲和素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立，以双抗体夹心法原理，结合生物素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立标记抗体和包被抗体建立 PA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 时 间分辨免疫荧光试剂，并进行方法学评价。结果：成功的合成了活性的 (SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Eu3+复合物，构建 PA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 试剂检测灵敏度为 0.7mIU/mIU/ L；批内变异系数在批内变异系数在 3.89%～4.96%之间,批间变异系数在 7mIU/.35%～9.27mIU/%之间。结论： 合成的(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Eu3+复合物较高的反应活性，可以用于多种试剂的 构建。构建的 PA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 试剂灵敏度高，具有潜在的临床应用价值。 ［关键词］妊娠相关血浆蛋白 A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+；批内变异系数在固相时间分辨荧光免疫；批内变异系数在亲和素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立—生物素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立—聚乙烯 胺—4,7mIU/ 二氯磺苯基(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+1，10 啡罗啉(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+2，9 二羧酸—铕复合物；批内变异系数在唐氏综合征 Develo)xPVA(BCPDA)yEu3+pA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+DirectSo)xPVA(BCPDA)yEu3+lidPhaseLanthaneTime(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+reso)xPVA(BCPDA)yEu3+lvedFluo)xPVA(BCPDA)yEu3+ro)xPVA(BCPDA)yEu3+immuno)xPVA(BCPDA)yEu3+assayEu3+Rea gento)xPVA(BCPDA)yEu3+fPA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+utiliz(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ingPVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+bstract:ObjectiveTo)xPVA(BCPDA)yEu3+develo)xPVA(BCPDA)yEu3+padirectso)xPVA(BCPDA)yEu3+lidphaselanthanetime (Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+reso)xPVA(BCPDA)yEu3+lvedfluo)xPVA(BCPDA)yEu3+r o)xPVA(BCPDA)yEu3+immuno)xPVA(BCPDA)yEu3+assayEu3+reagento)xPVA(BCPDA)yEu3+fPA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+byEu3+syEu3+nthesiz(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ingaco)xPVA(BCPDA)yEu3+mplexPVA(BCPDA)yEu3+o)xPVA(BCPDA)yEu3+f(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+B CPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Eu3+.Metho)xPVA(BCPDA)yEu3+dsPo)xPVA(BCPDA)yEu3+lyEu3+vinyEu3+lamine(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+waslabeledwithbio)xPVA(BCPDA)yEu3+tin (Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+streptavidina ndeuro)xPVA(BCPDA)yEu3+piumchelateo)xPVA(BCPDA)yEu3+f4,7mIU/(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+bis(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+chlo)xPVA(BCPDA)yEu3+ro)xPVA(BCPDA)yEu3+sulfo)xPVA(BCPDA)yEu3+phenyEu3+l)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+1,10(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+phenanthro)xPVA(BCPDA)yEu3+line (Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+2,9 (Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+dicar bo)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+lic(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+acid(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+.UsinglabeledPVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+co)xPVA(BCPDA)yEu3+mplexPVA(BCPDA)yEu3+,Wedesignedtwo)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+sitesandwichti me(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+reso)xPVA(BCPDA)yEu3+lvedfluo)xPVA(BCPDA)yEu3+ro)xPVA(BCPDA)yEu3+immuno)xPVA(BCPDA)yEu3+assayEu3+o)xPVA(BCPDA)yEu3+fPA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+andevaluatedassayEu3+characteristicso)xPVA(BCPDA)yEu3+fP A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+kit.ResultsWesuccessedsyEu3+nthesiz(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ingaco)xPVA(BCPDA)yEu3+njuageteo)xPVA(BCPDA)yEu3+f(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ (Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCP DA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Eu3+andareagento)xPVA(BCPDA)yEu3+fPA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+.Detectio)xPVA(BCPDA)yEu3+nlimitsachievedwere0.7mIU/mIU/ L.Thecalibratio)xPVA(BCPDA)yEu3+ncurvewaslinear0(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+10000mIU/ L.Intra(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+andinterassayEu3+imprecisio)xPVA(BCPDA)yEu3+n(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+CV)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+was3.89%(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+4.96%and7mIU/.35%(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+9.27mIU/%.Reco)xPVA(BCPDA)yEu3+v eryEu3+was95.8%(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+104.2%.Co)xPVA(BCPDA)yEu3+nclusio)xPVA(BCPDA)yEu3+nsTheco)xPVA(BCPDA)yEu3+njugateo)xPVA(BCPDA)yEu3+f(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ (Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+ (Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+E u3+syEu3+nthesiz(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+iedwasreactive,highlyEu3+fo)xPVA(BCPDA)yEu3+uo)xPVA(BCPDA)yEu3+rescent.A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+so)xPVA(BCPDA)yEu3+rtso)xPVA(BCPDA)yEu3+fkitco)xPVA(BCPDA)yEu3+uldbesyEu3+nthesiz(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ed ,takingadvantageo)xPVA(BCPDA)yEu3+fit.Thereagento)xPVA(BCPDA)yEu3+fPA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+waspo)xPVA(BCPDA)yEu3+tentiallyEu3+suitedfo)xPVA(BCPDA)yEu3+ruseinclinical withhighlyEu3+analyEu3+ticalsensitivityEu3+. KeyEu3+wo)xPVA(BCPDA)yEu3+rds:PregnancyEu3+asso)xPVA(BCPDA)yEu3+ciatedplasmapro)xPVA(BCPDA)yEu3+teinA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+;Directso)xPVA(BCPDA)yEu3+lidphaselanthanet ime(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+reso)xPVA(BCPDA)yEu3+lvedfluo)xPVA(BCPDA)yEu3+ro)xPVA(BCPDA)yEu3+immuno)xPVA(BCPDA)yEu3+assayEu3+;Streptavidin(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+bio)xPVA(BCPDA)yEu3+tin(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Po)xPVA(BCPDA)yEu3+lyEu3+vinyEu3+lamine(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+euro)xPVA(BCPDA)yEu3+pium chelateo)xPVA(BCPDA)yEu3+f4,7mIU/(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+bis(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+chlo)xPVA(BCPDA)yEu3+ro)xPVA(BCPDA)yEu3+sulfo)xPVA(BCPDA)yEu3+phenyEu3+l)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+1,10(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+phenanthro)xPVA(BCPDA)yEu3+line(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+2,9(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+dicarbo)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+lic(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+acid; Do)xPVA(BCPDA)yEu3+wn''''sSyEu3+ndro)xPVA(BCPDA)yEu3+me 妊娠相关血浆蛋白 A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PregnancyEu3+asso)xPVA(BCPDA)yEu3+ciatedplasmapro)xPVA(BCPDA)yEu3+teinA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+，PA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+是一种高 分子 α2 糖蛋白，20 世纪 7mIU/0 年代在孕妇血清中被发现［1］。在孕妇血中主要 PA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 是 胎盘滋养层组织分泌，它是一种异源四聚体，由两个分子量为 200000~250000 亚基构 成。PA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 亚基和两个嗜红细胞主要基础蛋白 (SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Pro)xPVA(BCPDA)yEu3+fo)xPVA(BCPDA)yEu3+rmo)xPVA(BCPDA)yEu3+feo)xPVA(BCPDA)yEu3+sino)xPVA(BCPDA)yEu3+philmajo)xPVA(BCPDA)yEu3+rbasicpro)xPVA(BCPDA)yEu3+tein)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+以二硫键结合而成［2］，在孕妇血中只存在 微量游离单体 PA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+。PA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 亚基由 1547mIU/ 个多聚核苷酸构成，包括 1 个拉长的锌指结 构，3 个 Lin—no)xPVA(BCPDA)yEu3+tch 重复序列，以及 5 个短一致重复序列［3］。在体内 PA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 是一种 蛋白酶，主要针对胰岛素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立样生长因子结合蛋白 4(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+IGFBP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+4)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+和胰岛素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立样生长因子结合蛋白 5(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+IGFBP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+5)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+起作用。胰岛素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立样生长因子 I(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+IGF(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+I)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+在促进细胞分裂和增殖起重要作用，它主 要通过 IGF(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+1 受体起作用，IGF(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+I、II 的生物活性受 6 个高亲和性 IDFBP 调节 ［4，5］。PA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 主要用于产前筛查唐氏综合征(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Do)xPVA(BCPDA)yEu3+wn''''sSyEu3+ndro)xPVA(BCPDA)yEu3+me，DS)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+，迄今医 学上对此病尚无有效的治疗和预防措施，只能通过产前筛查防止 DS 儿的出生，但目前开 展的绒毛活检,羊水穿刺及脐带血穿刺均为侵入性检查,有 1%～3%的流产率,且方法繁琐, 出报告时间长,不适宜大范围孕妇的普查,仅限于高危人群的诊断。大量报道认为 PA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 可作为 DS 胎儿产前筛查的的标志物。在 15 周～20 周通过结合孕妇孕周、超声诊断和 FreeβHCG(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+HCG 可以鉴别 65%～7mIU/5%，但要在 3 个月～6 个月结合 A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+FP、游离 E3 以及抑制 素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立上述成分可鉴别 85%～90%［6］。有文献［7mIU/］报道 PA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 在急性冠状动脉综合征 (SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+CS)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+的早期诊断有一定的意义，PA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 在 A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+CS 患者血清含量＜30mIU/L，同时结构不 同于孕妇体内的 PA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 且存在动态变化，必须利用超灵敏的方法进行检测。国内 PA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 的诊断试剂大多为 ELISA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 和 PerkinElmer 公司生产的解离增强时间分辨荧光免疫 分析(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+disso)xPVA(BCPDA)yEu3+ciatedenhancelanthanetime(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+reso)xPVA(BCPDA)yEu3+lvedfluo)xPVA(BCPDA)yEu3+ro)xPVA(BCPDA)yEu3+immuno)xPVA(BCPDA)yEu3+assayEu3+,DELFIA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 试 剂，无国产 PA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 时间分辨荧光试剂。我们利用 PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+聚乙烯胺)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+作为载体结合 BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 镧系螯合物合成一种高灵敏的固相时间分辨荧光免疫分析 (SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+directso)xPVA(BCPDA)yEu3+lidphaselanthanetimereso)xPVA(BCPDA)yEu3+lvedfluo)xPVA(BCPDA)yEu3+ro)xPVA(BCPDA)yEu3+immuno)xPVA(BCPDA)yEu3+assayEu3+,DSLFIA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 试剂。为提 高检测灵敏度和克服 BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 标记抗体使抗体失活的问题，我们引入了生物素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+亲和素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立 (SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+bio)xPVA(BCPDA)yEu3+tin(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+streptavidinsyEu3+stem)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+系统。 1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 试剂 4,7mIU/ 二氯磺苯基(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+1，10 啡罗啉(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+2，9 二羧酸 ［4,7mIU/(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+bis(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+chlo)xPVA(BCPDA)yEu3+ro)xPVA(BCPDA)yEu3+sulfo)xPVA(BCPDA)yEu3+phenyEu3+l)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+1,10(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+phenanthro)xPVA(BCPDA)yEu3+line(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+2,9(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+dicarbo)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+licacid,BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 自制］；批内变异系数在纯化亲和素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Streptavidin，SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+，Sigma 公司)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+；批内变异系数在硫代琥珀酰亚氨(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+6 生物素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立氨基(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 己酯类 ［Sulfo)xPVA(BCPDA)yEu3+succinimidyEu3+l(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+6''''(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+bio)xPVA(BCPDA)yEu3+tinamido)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+6(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+hexPVA(BCPDA)yEu3+anamido)xPVA(BCPDA)yEu3+hexPVA(BCPDA)yEu3+ano)xPVA(BCPDA)yEu3+ate ，Sulfo)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+NHS(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+LC (Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+LC(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+tin，pierceChemicalCo)xPVA(BCPDA)yEu3+mpanyEu3+］；批内变异系数在聚乙烯胺氢氯化物 (SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Po)xPVA(BCPDA)yEu3+lyEu3+vinyEu3+laminehyEu3+dro)xPVA(BCPDA)yEu3+chlo)xPVA(BCPDA)yEu3+ride，PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+,ChemicalDyEu3+namicsCo)xPVA(BCPDA)yEu3+rp)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+；批内变异系数在硼酸钠、二甲亚砜 (SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+天津化学试剂有限公司)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+；批内变异系数在单克隆抗体根据文献［5］选择 HyEu3+b234— 5(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+StatensserumInstitut)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+作为检测抗体，mA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+b10E1(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+HyEu3+TestOyEu3+，Finland)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+作为捕获抗 体；批内变异系数在PA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 标准品和质控品购于 PE 公司(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+质控血清：Co)xPVA(BCPDA)yEu3+ntro)xPVA(BCPDA)yEu3+l1508mIU/ L，Co)xPVA(BCPDA)yEu3+ntro)xPVA(BCPDA)yEu3+l22325mIU/L，Co)xPVA(BCPDA)yEu3+ntro)xPVA(BCPDA)yEu3+l3 为 4952mIU/L)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+；批内变异系数在鼠 IgG(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+晶美公司)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+。 1.1.2 仪器 Wallac(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+1420 多标记计数仪(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+WallacOY，Finland)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+；批内变异系数在HPLC 硅柱 TSK(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+250 尺寸排阻柱(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BIO(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+RA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+D 公司)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+；批内变异系数在96 白色微孔板(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+NUNC 公司)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+、亲和素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立包被板 (SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Inno)xPVA(BCPDA)yEu3+tracDiagno)xPVA(BCPDA)yEu3+sticsOyEu3+ 公司)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+；批内变异系数在A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+mico)xPVA(BCPDA)yEu3+n 可浓缩离心管 (SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+mico)xPVA(BCPDA)yEu3+nmicro)xPVA(BCPDA)yEu3+co)xPVA(BCPDA)yEu3+ncentratio)xPVA(BCPDA)yEu3+nunits，MW30000Cut(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+o)xPVA(BCPDA)yEu3+ff))z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 1.2 方法 1.2.1BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 的制备参见文献详细步骤［8～10］。 1.2.2 生物素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+聚乙烯胺(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+［(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+］复合物的构建［11］用 0.5M 的碳酸盐(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+pH9.1)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+缓冲液配制浓度为 10mg/ml 聚乙烯胺(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+溶液，将 200μgNHSLCLCBiotingNHS(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+LC(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+LC(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+tin 溶于 20μgNHSLCLCBiotinl 碳酸盐缓冲液中，取 200μgNHSLCLCBiotinl 上述 PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 溶液加入 20μgNHSLCLCBiotinl 上述 NHS(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+LC—LC(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+tin 溶液中，振荡混匀，室温反应 1.5h(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+∶Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+=1∶15)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+，用 0.5M 碳酸盐缓冲液将混合液稀释到 1ml，将固体 BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 研磨成粉末状，先在上述 1ml 混合液中加入 5mgBCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+，用力搅拌，直到溶解，重复加 3 次 BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+，5mg/次，共计 20mgBCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+，在室温放置 5h～6h，直到溶液澄清，转移到透析袋中，用 0.1MNaHCO35L 透析、过夜、重复透析 2 次，尽可能除去没反应的 BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 和生物素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立。 1.2.3HPLC 纯化(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+ 复合物离心浓缩上述 (SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+ 复合物到 0.3ml～0.5ml(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+用 A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+mico)xPVA(BCPDA)yEu3+nmicro)xPVA(BCPDA)yEu3+co)xPVA(BCPDA)yEu3+ncentratio)xPVA(BCPDA)yEu3+nunits，MW30000Cut(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+o)xPVA(BCPDA)yEu3+ff))z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+。流动相 0.05MTris 缓冲液 (SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+pH7mIU/.7mIU/0)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+，控制 HPLC 流速 0.8ml/min，在 325nm 处监测层析液(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+325nm 为 BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 最 大吸收峰)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+，上样后，马上收集，(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+ 在 10 管～16 管约 5ml 左右，取 10μgNHSLCLCBiotinl(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+ 层析液加入 90μgNHSLCLCBiotinl 水滴入亲和素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立包被板微孔中，温育 30min，洗板，加入用 Tris 缓冲液配制的 10M～5MEuCl3100μgNHSLCLCBiotinl，反应 10min，洗板、 干燥，用 Wallac(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+1420 检测 Eu3+的荧光强度，没结合复合物的被洗去了，没结合 BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 的复合物因无法结合 Eu3+而没有荧光，计算标记的 PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+，大约每分子结合 50 个～100 个 BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 分子。 1.2.4 构建亲和素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+生物素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+［(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Eu3+］复 合物［11］用 0.1MTris 缓冲液(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+pH7mIU/.8)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+配制小牛血清白蛋白(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BSA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 溶液)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+60g/L，同时加入 EuCl3，使 Eu3+浓度为 10-6mo)xPVA(BCPDA)yEu3+l/ml，用双蒸水配制亲和素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立溶液浓度为 1mg/ml，取上 述 BSA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 溶液 1ml，加入 10μgNHSLCLCBiotinl 亲和素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立溶液，再加入 50μgNHSLCLCBiotinl 的(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+ 复合物 (SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+通过固相免疫分析，棋盘滴定法确定最佳用量比，步骤略，结果见后)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+，混匀，55℃温育 1.5h，4℃保存备用。 1.2.5(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Eu3+复合物反应活性用生物素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立化的各种浓度 (SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+0ng/50μgNHSLCLCBiotinl，0.5ng/50μgNHSLCLCBiotinl，5ng/50μgNHSLCLCBiotinl，50ng/50μgNHSLCLCBiotinl，100ng/50μgNHSLCLCBiotinl)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+鼠 IgG 包被 96 孔微 板(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+同第 7mIU/ 步)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+，用 60g/LBSA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 和 0.1mo)xPVA(BCPDA)yEu3+l/LTris 缓冲液(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+pH7mIU/.8)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+10 倍稀释 (SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Eu3+复合物，在板的微孔中加入 100μgNHSLCLCBiotinl 稀释后的 (SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Eu3+复合物，室温反应 30min，洗板、干燥，测量荧光 强度(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+cpm)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+。本实验是验证复合物的反应活性。 1.2.6 生物素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立标记 10E1 抗体［12］用二甲亚砜制备硫代琥珀酰亚氨(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+6 生物素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立氨基(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 乙酯溶液(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+10mg/ml)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+，将抗体 10E1 溶于 0.1mo)xPVA(BCPDA)yEu3+l/L 硼酸钠溶液(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+pH8.8)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+，每 1mg 抗体中 加硫代琥珀酰亚氨(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+6 生物素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立氨基(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+己酯类溶液 210μgNHSLCLCBioting 混合，室温放置 4h，在上述溶液中 加入 20ml1mo)xPVA(BCPDA)yEu3+l/LNH4Cl，室温反应 10min，将反应液进行透析，除去未结合的生物素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立， 将抗体浓度用分析缓冲液配置成 8ng/μgNHSLCLCBiotinl，-20℃保存备用。 1.2.7mIU/ 单克隆 HyEu3+b234—5 抗体包被 96 孔微滴定板将抗体溶于 0.1M 磷酸盐缓冲液 (SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+pH4.9)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+，配置成 5μgNHSLCLCBioting/ml 抗体溶液，在每一孔中加入 80μgNHSLCLCBiotinl 抗体溶液，室温反应 20h，然 后用生理盐水洗 3 次，然后每孔加 120μgNHSLCLCBiotinl0.05MTris(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Hcl 缓冲液(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+pH7mIU/.4 含 0.9%生理盐水、 0.05%NaN3、0.5%小牛血清白蛋白 BSA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+浸泡 2h。吸干缓冲液，干燥，密封 4℃保存。 1.2.8 样本收集、定标、灵敏度、精密度和回收实验分析过程选取怀孕 8 周、9 周、 11 周妇女血清各一份，经 PE 公司的 DELFIA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 试剂和 D&G 公司的 ELISA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 试剂多次精确测 定，值分别为：P1863.27mIU/mIU/L；批内变异系数在P2127mIU/3.63mIU/L；批内变异系数在P327mIU/27mIU/.23mIU/L。用标准品稀 释液(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+6%BSA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+TSA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 缓冲液：150mmo)xPVA(BCPDA)yEu3+l/LNaCl、60g/LBSA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+、50mmo)xPVA(BCPDA)yEu3+l/ LTris(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+HCl，pH7mIU/.8)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+将标准品稀释浓度为：S00mIU/L(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+稀释液)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+、S120mIU/ L、S2200mIU/L、S31000mIU/L、S45000mIU/L、S510000mIU/L。标准品定标根据 WHOIRP7mIU/8/610(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+WHOInternatio)xPVA(BCPDA)yEu3+nalLabo)xPVA(BCPDA)yEu3+rato)xPVA(BCPDA)yEu3+ryEu3+fo)xPVA(BCPDA)yEu3+rBio)xPVA(BCPDA)yEu3+lo)xPVA(BCPDA)yEu3+gicalstandards，StatensS eruminstitut，Denmark)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+，单位换算：1000mIU/L=4.5μgNHSLCLCBioting/ml。在单克隆 HyEu3+b234— 5 抗体包被 96 孔微滴定板，每孔加入定标液 10μgNHSLCLCBiotinl，作 8 次平行测量，加入 50μgNHSLCLCBiotinl 生物素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立标 记 10E1 抗体 50μgNHSLCLCBiotinl，混匀，36℃，室温反应 20min，洗板 6 次，加入 100μgNHSLCLCBiotinl10 倍稀释 的(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Eu3+复合物，室温反应 25min，洗板 6 次，吹干， Wallac(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+1420 测量荧光强度(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+cpm)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+，取均值，作标准曲线。将 S00mIU/L 做 20 次重复测 试，计算均值(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+X))z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+和标准差(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+s)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+，以 X)+2s 为试剂的最小检测限。将 Co)xPVA(BCPDA)yEu3+ntro)xPVA(BCPDA)yEu3+l1，Co)xPVA(BCPDA)yEu3+ntro)xPVA(BCPDA)yEu3+l2，Co)xPVA(BCPDA)yEu3+ntro)xPVA(BCPDA)yEu3+l3 依据定标分析过程，同批测量 20 次，批间测量 12 次， 用于评价精密度。对收集样本(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+P1、P2、P3)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+依据定标分析过程进行测量，然后将 Co)xPVA(BCPDA)yEu3+ntro)xPVA(BCPDA)yEu3+l1、Co)xPVA(BCPDA)yEu3+ntro)xPVA(BCPDA)yEu3+l2、Co)xPVA(BCPDA)yEu3+ntro)xPVA(BCPDA)yEu3+l3 分别等体积加入 P1、P2、P3 中进行测量，用于评价回 收实验。 2 结果 2.1 用 HPLC 纯化(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+ 复合物在 10min～16min 出现 (SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+ 的吸收峰，没有结合 BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 的吸收峰在 17mIU/min～24min 出现,见 图 1。 图 1 净化（Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+）xPVA(BCPDA)yEu3+－聚乙烯醇（聚乙烯醇（BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+）yEu3+ 在高性能液化色谱（TSK－聚乙烯醇（250 过滤 柱）上的变化图。（略） 流速控制在 0.8ml/min，吸光率 325nm 2.2 用滴定法确定亲和素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立和(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+ 最佳配比 SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 量恒定 0.01mg/ ml，生物素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立标记的抗体包被分别浓度为 0ng/孔、0.5ng/孔、5ng/孔、50ng/孔，缓冲液 为 pH7mIU/.8Tris(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Hcl0.1M，Eu3+10-5M，(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+ 用量从 40μgNHSLCLCBiotinl～55μgNHSLCLCBiotinl 选 择最佳值，50μgNHSLCLCBiotinl 复合物荧光强度值(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+cpm)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+最佳，如图 2。 图 2 滴定链球菌，（Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+－聚乙烯醇（聚乙烯醇（BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+）yEu3+ 在 10-3MEu3+,0.1MTrisHclbuff)er(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+pH7mIU/.8)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+缓冲液中的变化，0.01mg/ml 链球菌，容积变动范围 40μgNHSLCLCBiotinl~55μgNHSLCLCBiotinl，观 察到最佳容积为 50μgNHSLCLCBiotinl（略） 2.3 验证活性用生物素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立化的各种浓度(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+0ng/50μgNHSLCLCBiotinl，0.5ng/50μgNHSLCLCBiotinl，5ng/50μgNHSLCLCBiotinl，50ng/ 50μgNHSLCLCBiotinl，100ng/50μgNHSLCLCBiotinl)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+鼠 IgG 包被 96 孔微板验证(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Eu3+复 合物的反应活性，在测定范围内成线性分布，见图 3。 图 3IgG 维生素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立定量法标定曲线（略） 2.4PA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 定标曲线及灵敏度在 0mIU/L～10000mIU/L 范围内定标曲线为线性分布， 见图 4。S0 标准重复 20 次检测均值加 2 个标准差值代入标准曲线，计算出检测限为 0.7mIU/mIU/L(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+数据没显示)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+。 图 4PA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP-A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 标定曲线（略） 2.5 批内、批间精密度对质控血清批内进行 20 次分析，批间进行 12 次分析，得到批 内变异系数 3.89%～4.96%,批间变异系数在 7mIU/.35%～9.27mIU/%之间,见表 1。 表 1 批内、批间变异系数比较（略） 2.6 回收实验对收集样本(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+P1、P2、P3)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+依据定标分析过程进行测量，然后将 Co)xPVA(BCPDA)yEu3+ntro)xPVA(BCPDA)yEu3+l1、Co)xPVA(BCPDA)yEu3+ntro)xPVA(BCPDA)yEu3+l2、Co)xPVA(BCPDA)yEu3+ntro)xPVA(BCPDA)yEu3+l3 分别等体积加入 P1、P2、P3 中进行多次测量，分别计 算回收率 95.8%～104.2%,见表 2。 表 2 回收实验结果比较（略） 3 讨论 临床化学家最关心的问题是分析技术灵敏度，这也是临床诊断试剂的核心。近来，在 临床化学检测物质的浓度的范围 10-3mo)xPVA(BCPDA)yEu3+l/L～10-16mo)xPVA(BCPDA)yEu3+l/L。PCR 以及其他的体外扩增技 术使 DNA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+、RNA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 检测方便、高效、特异。不幸的是蛋白不能复制，最敏感的定量方法是 依靠蛋白之间的特异性结合如抗原抗体反应。一个提高蛋白检测灵敏度的方法就是信号放 大，即在蛋白上标记可以检测的标记物，通过标记物的信号放大而达到更容易检测的目的。 时间分辨免疫学技术是 80 年代迅速发展起来的的一种公认的最有发展前途的非放射免疫 标记技术，其中荧光镧系螯合物具有较大的 Sto)xPVA(BCPDA)yEu3+kes 位移(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+27mIU/5nm)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+，较窄的发射光谱 (SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+10nm)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+，较长的荧光寿命(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+10us～1000us)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+，而被广泛构建时间分辨荧光免疫试剂。临 床运用最广泛的是 PE 公司生产的解离增强镧系时间分辨荧光免疫分析 (SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+disso)xPVA(BCPDA)yEu3+ciatio)xPVA(BCPDA)yEu3+n(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+enhancedlanthanidefluo)xPVA(BCPDA)yEu3+ro)xPVA(BCPDA)yEu3+immuno)xPVA(BCPDA)yEu3+assayEu3+，DELFIA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+试剂，它必须使 Eu3+与螯合物分离，由于其信号较弱，必须加入增强液来发大信号，操作烦琐且在加样 的过程中可能引起外源性的污染，这些弊端影响了它的应用。在 1987mIU/ 年，Evangelista 和 Diamandis 合成一种新的螯合物 BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+，开创了固相时间分辨免疫荧光技术，解决了 DELFIA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 上述问题［8，9］，但是 BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 的较大分子量、表面特性和直接标记蛋白容易 引起蛋白的失活对它应用带来一些问题，解决的办法就是连接一个载体。我们实验中引入 了 PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 作为载体，连接 BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 和生物素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+亲和素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立。PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 直接连接蛋白技术难度较大，而 生物素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立标记蛋白技术比较成熟，同时亲和素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立有 4 个生物素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立结合位点，可以起到信号放大作 用，而提高检测灵敏度。我们实验中成功的合成了(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Eu3+复 合物，用它去识别生物素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立标记的抗体(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+见图 3)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+，结果显示亲和力非常高。实验关键问题是 选择 SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 和(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Eu3+复合物最佳比，我们实验中做了 7mIU/ 个浓度梯度， 选取结合后荧光强度最大的(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Eu3+复合物浓度。利用 HPLC 层析 纯后的(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Eu3+复合物回收率是 68%。通过实验选择最佳检测抗体 浓度、生物素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立化抗体浓度和标本用量。Jackso)xPVA(BCPDA)yEu3+n［13］分析了提高灵敏度的因素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立即两个关 键的因素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立与最终的结合分析灵敏度相关：我们监测标记分子(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+放射性同位素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立、化学发光剂、 荧光团)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+的能力；批内变异系数在结合试剂的质量和实验条件，在临床化学存在一种误导是特别敏感的监测 方法(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+化学发光、时间分辨荧光)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+能获得好的结果。其实这是错误的，如果实验试剂和条件 (SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+抗体的亲和性和特异性，固相结合物的自然特性以及清洗效率)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+不被选择，很难达到理想 的检测效果。为达到较高的灵敏度，需要选择高灵敏度的标记技术、高亲和力的试剂和最 好的分析条件(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+可将试剂的非特异性结合降到最小)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+。利用镧系螯合物的时间分辨荧光免疫 分析是一种高灵敏的标记技术，关键是实验条件的选择，我们验证不同孵育时间下， (SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Eu3+复合物产出率，以及和生物素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立化抗体的结合能力(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+数 据不能显示)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+。经过大量的实验选择了 Eu3+的浓度，使其能和 BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 形成最佳比例(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+数 据不能显示)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+。反应条件的建立中，我们筛选实验反应温度(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+18℃～56℃，每 5℃选择一 次)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+和反应时间(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+10min～24h)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+，考虑到临床结果的报告时间，选择了 20min(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+数据不能显 示)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+。经过实验条件选择，形成了 PA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 的定标曲线，通过定标曲线确定最低检测限(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+见 图 3)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+。我们构建的(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Eu3+复合物可以用于多种像 PA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 这样利用双抗体夹心法检测的试剂，如 A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+FP 等。我们选择构建 PA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 主要考虑到我国产 前筛查项目的自产试剂较少，而且 DS 筛查尤为重要，由于科研经费的问题，没有进行最 佳单抗配对实验，只是参考了国外的相关文献。不过我们实验的核心是构建 (SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PVA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+BCPDA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+yEu3+(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+Eu3+复合物，为以后构建其他试剂做一定的前期工作。我 们构建的 PA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+PP(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+A)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+ 试剂,回收实验和精密度试验显示，完全满足试剂盒要求。在今后的工作