山香圆属药学研讨

近年来，随着对山香圆属研究的深入，其药学价值也受到了更多关注。山香圆属 (TurpiniaVentTurpiniaVent．)植物属于省沽油科，约 30 种，分布于亚洲和美洲的热带地区，我国约 有 13 种，分别为心叶山香圆(TurpiniaVentT．subsessilifoliaC．Y．Wu)、锐尖山香圆 (TurpiniaVentT．arguta(TurpiniaVentlindl．)Seem、台湾山香圆(TurpiniaVentT．formosanaNakai)、亮叶山香圆 (TurpiniaVentT．simplicifoliaMerr)、疏脉山香圆(TurpiniaVentT．indochinen-sisMerr)、硬毛山香圆 (TurpiniaVentT．affinisMerr．etPerry))、三叶山香圆(TurpiniaVentT．ternataNakai)、大果山香圆 (TurpiniaVentT．pomifera(TurpiniaVentRoxb)DC、卵叶山香圆(TurpiniaVentT．ovalifoliaElmer)、大籽山香圆 (TurpiniaVentT．macrospermaC．C．Huang)、粗壮山香圆(TurpiniaVentT．robustaCraib)、山香圆 (TurpiniaVentT．montana(TurpiniaVentBL)Kurz))和越南山香圆(TurpiniaVentT．cochinchinensis(TurpiniaVentLour)Merr);主产于我国西 南部至台湾［1］。 1 成分研究 1．1 黄酮类 章光文从山香圆叶中分离得到 4 个黄酮类化合物，分别鉴定为金丝桃苷、槲皮素－3 －O－洋槐糖苷、野漆树苷和女贞苷［2］。赖闻玲选用山香圆为材料，使用常规回流法、 微波法和超声法提取其中的黄酮，用分光光度法对其黄酮含量进行了测定，发现黄酮类成 分是山香圆的主要成分［3］。罗宪堂从山香圆口服液中提取出黄酮，并利用紫外可见分 光光度计测定山香圆口服液中黄酮类成分含量［4］。 1．2 熊果酸类 朱建华采用高效液相色谱测定了山香圆中熊果酸的含量。郑佳嘉使用双波长薄层扫描 仪测定了山香圆片的熊果酸的含量［5］。毛友昌以山香圆叶为材料，以熊果酸标准品为 对照，应用薄层扫描法成功测定山香圆中的熊果酸成分［6］。魏福有采用薄层色谱法对 山香圆叶和山香圆含片中熊果酸含量进行定量分析［7］。 1．3 齐墩果酸、对香豆酸、肉豆蔻类 方乍浦通过对山香圆叶中物质成分进行提取和测定，发现其叶中含有齐墩果酸、对香 豆酸和肉豆蔻类成分，这些物质均具有生物活性［8－10］。 1．4 苷类 章光文从山香圆中提取出了女贞苷和野漆树苷，采用反相高效液相色谱法同时测定山 香圆片中女贞苷和野漆树苷的含量［2］。ChemphannBull 从省沽油科植物三叶山香圆 叶中分离出多种苷类，并分别命名为山香圆苷 A、山香圆苷 B、山香圆苷 C 和山香圆苷 D 等。 1．5 酚酸类成分 李云秋综合运用多种现代分离方法和技术，从锐尖山香圆叶的水提取物中分离得到 5 个酚酸类化合物，综合运用现代波谱技术分析其结构，分别鉴定为香草酸、对羟基肉桂酸、 焦没食子酸、没食子酸、2－4’－羟基－苄基－2－羟基－丁二酸、α－呋喃甲酸和丁二酸 酐;上述化合物全部为在该科中首次发现［11］。Matthew 从三叶山香圆的茎中提取出了 鞣花酸以及其衍生物成分［12］。 1．6 生物碱类 WuMin 从锐尖山香圆中发现了生物碱类成分，其中包括 turpiniside 和 11－ methoxy)javaniside 两种新成分［13］。 1．7megastigmane 类化合物 Yu，Q 从山香圆的叶中分离出了 megastigmane 类化合物［14］。 2 药理研究 2．1 抗炎作用 许哲洪比较发现，山香圆颗粒治疗上呼吸道感染的疗效较好［15］。Zhang，L 通过 向患有关节炎的大鼠注射山香圆提取液成分，发现有很好的抑制作用［16］。郑标通过试 验发现，山香圆片治疗急性咽部炎症疗效较好，尤其以重度患者疗效更好［17］。楼正才 通过观察中药山香圆片治疗急性单纯咽炎的疗效，发现该药具有良好的抗炎、抑菌和化痰 作用，且安全可靠［18］。张磊采用二甲苯诱导的小鼠耳肿胀、角叉菜胶诱导的大鼠足爪 肿胀、棉球诱导的大鼠肉芽肿和福氏完全佐剂诱导的大鼠佐剂性关节炎模型，研究了山香 圆总黄酮(TurpiniaVentTFS)的抗炎作用，发现其对大鼠佐剂性关节炎具有抑制作用［19］。周嵘通过 对山香圆片治疗急性扁桃体炎 80 例疗效观察，发现疗效较好［20］。周秦秦应用随机对 照的方法评价了中药山香圆含片治疗急性咽炎患者 30 例的疗效和安全性。结果表明，其 总有效率和显效率分别为 86．7%和 60．0%［21］。 2．2 抗菌作用 詹怡飞通过对山香圆片的抑菌试验，观察灌胃给药山香圆片小鼠体内感染金黄色葡萄 球菌后死亡率，发现山香圆含片对小鼠腹腔感染金黄色葡萄球菌有较好的保护作用，提示 该药具有抗菌作用［22］。杨义方体外抑菌试验结果表明，山香圆对金黄色葡萄球菌有较 强的抑菌作用［23］。 2．3 镇痛作用和调节免疫作用 张磊通过观察山香圆总黄酮体外对佐剂性关节炎大鼠免疫功能的影响，发现山香圆总 黄酮对大鼠的异常免疫功能具有调节作用［24］。金涌发现 TFS 能明显改善 cy) 致免疫功 能低下小鼠的免疫功能，其免疫调节作用与调节 T 细胞亚群有关［25］。詹怡飞通过试验 研究发现，山香圆含片能明显降低醋酸所致小鼠扭体反应次数，提高热板所致小鼠痛阈， 对二甲苯所致小鼠耳肿胀、蛋清性大鼠足趾肿胀所致小鼠腹腔毛细血管通透性提高均具明 显的抑制作用，表明山香圆片具有镇痛作用［26］。 3 临床应用 黄倬英考查发现江西安远县民间用山香圆的叶来治疗咽喉炎等疾病，效果明显 ［27］。杨国泉研究发现，山香圆属植物具有较好的抗菌消炎作用，其主要成分为山香圆 叶，临床用于治疗扁桃体炎、咽喉炎和扁桃体脓肿［28］。传统的方剂有:① 治泄泻、痢 疾:山香圆一至二两，水煎服。②治妇女血崩:山香圆四两，桂圆一两，水煎服。③治外伤 肿痛:鲜山香圆和酒捣烂，烘热敷患处。④治产褥热:山香圆、白英各三钱，梵天花五钱， 羊耳菊、蛇莓各二钱。用酒、水各半煎，加红糖一两冲服。⑤治风湿腰痛，产后伤风:山香 圆一至三两。水煎调酒服。⑥治偏头痛:山香圆、鸡儿肠、金银花根、单叶铁线莲各五钱， 黄酒煎服。⑦治关节或肌肉风痛:山香圆三两，煎服。⑧治跌打损伤、筋骨痛:山香圆五钱， 水煎服。 3．1 治疗炎症刘立生通过观察山香圆片对扁桃体炎的治疗疗效，发现山香圆片能很好 地治疗急性扁桃体炎(TurpiniaVent急乳蛾)、咽炎等口腔和咽喉疾病。曾国华发现山香圆片能很好的治 疗咽炎。 3．2 清热解毒，消肿止痛据全国中草药汇编记载，山香圆具有清热解毒和消肿止痛的 临床功效。詹怡飞研究发现，山香圆片能有效抑制炎症如咽喉炎和扁桃体炎产生的疼痛 ［24］。 3．3 毒蛇咬伤据中国科学植物研究所的研究发现，山香圆植物在治疗毒蛇咬伤具较好 疗效。 4 制剂工艺研究 为了控制山香圆片的质量，常采用现代分析仪器来检测其有效成分的含量。章光文采 用反相高效液相色谱法同时测定山香圆片中女贞苷和野漆树苷的含量，该法简便、准确， 重复性好，可为山香圆片的质量控制提供试验依据［13］。罗宪堂运用紫外－可见分光法 (TurpiniaVentUV 法)以对照品芦丁的黄酮类含量，测定山香圆叶中黄酮类成分含量［29］。罗宪堂研 究了山香圆含片的最佳制备工艺［30］。罗四莲设计了对山香圆植物的总油脂提取工艺 ［31］。 5 小结与展望 通过对相关文献的查阅发现，目前对山香圆抗菌抗炎方面的研究比较透彻，临床用药 效果良好，但在治泄泻、痢疾，偏头痛和毒蛇咬伤方面还需深入研究其机理，尤其在分子 水平上对山香圆属植物的作用机制研究几乎处于空白阶段，为此需要加强相关研究，以更 深入地发掘山香圆属植物的药学价值。 他克莫司(TurpiniaVenttacrolimus,FK506)是一种新型强效免疫抑制剂,是链霉菌属中分离出来的 发酵产物,常温下呈白色结晶状粉末,分子式为 CH60N2HO,分子量为 822.05[1]。由于对 T 细胞有选择抑制作用,主要用于抗器官排斥性疾病肝、肾移植的急性排斥反应或是免疫性 疾病类风湿性关节炎、红斑狼疮等疾病,药物本身和其代谢产物都具有一定的毒性,所以进 行血药浓度监测是其使用的一个必备前提。目前监控其血药浓度的方法有许多,但是高效液 相色谱法尚未成体系。本文采用反相高效液相色谱法测定他克莫司血药浓度[2],方法准确、 可靠、简单,适用于临床上监测他克莫司的血药浓度的广泛推广。2011 年 2 月～2011 年 6 月,我们研究了使用反相高效液相色谱法测定他克莫司血药浓度的可行性。 1 材料与方法 1.1 材料 仪器与药品仪器:3200Qtrap 型液相色谱一串联质谱仪;药品:他克莫司胶囊(TurpiniaVent规格为 1mg/粒,浙江海正药业股份有限公司,批号:20100412);他克莫司对照品(TurpiniaVent上海同田生物技 术有限公司批号:084120L);乙腈为色谱纯,其它试剂为分析纯。 1.2 方法 1.2.1 色谱条件:色谱柱:DiamonsilC18 柱(TurpiniaVent250mm×4.6mm×5μm);m);流动相:乙 腈:0.2%磷酸:四氢呋喃(TurpiniaVent55:40:5);流速:1.2ml/min;柱温:30℃;进样量:20。 1.2.2 样品溶液的配制:精密称取他克莫司 10mg,全部转移至 100ml 容量瓶中,加入乙 腈至刻度摇匀,制成 0.1mg/ml 的溶液,放入冰箱保存。 1.2.3 标准溶液的配制:精密称取他克莫司对照品 10mg,全部转移至 l00ml 容量瓶中, 加入乙腈至刻度,摇匀,即得浓度为 0.1mg/ml 的标准品对照液。分别取标准品 2、4、6、8、10ml,用乙晴稀释至 20ml,做成标准曲线。 1.2.4 全血样品处理:取血清 0.5ml,加入 5ml 乙醚,振荡 3min,3000r/min 离心机处理 10min,将上清液转移至另一管中,留待进样。 1.2.5 配制好的液体每次进样 20μm);l,每一浓度进样三次,如结果无太大偏差,取其平均值。 以峰面积(TurpiniaVentA)对浓度(TurpiniaVentC)进行回归,他克莫司的浓度在 1.32~16.0μm);g/ml 范围内线性关系良 好。 2 结果 2.1 回收率 取空白血浆 1ml,加入他克莫司标准液,配成 2.0、4.0、6.0 三种梯度浓度的血浆样品, 按“1.2.4”项方法操作,测定样品峰面积,根据标准曲线计算相对回收率。根据各浓度血浆样 品峰面积和相应浓度的标准液直接进样,测得的峰面积比较,通过计算得到绝对回收率。结 果见表 1。从表 1 可以看出:2.0、4.0、6.0(TurpiniaVentμm);g/ml)三种梯度浓度的血浆样品,相对回收率 分别为 104.1%、102.7%、102.8%;绝对回收率分别为 93.8%、95.5%、93.0%。平 均相对回收率为 103.2%,平均绝对回收率为 94.1%。研究结果显示:反相高效液相色谱法 能够较好测定他克莫司血药不同浓度的相对和绝对回收率。 2.2 精密度 配制 2.0、4.0、6.0 三种浓度的血浆样品,在同 1d 的不同时间和 5d 中每一天,按 “1.2.4”项方法操作,测定样品峰面积,得出日内和日间精密度,见表 2。从表 2 可以看 出:.0、4.0、6.0(TurpiniaVentμm);g/ml)三种梯度浓度的血浆样品,日内精密度分别为 104.1%、102.7%、102.8%;日间精密度分别为 93.8%、95.5%、93.0%。平均日内精 密度为 103.2%,平均日间精密度为 94.1%。研究结果显示:反相高效液相色谱法能够较好 测定他克莫司血药不同浓度的日内和日间精密度。 3 讨论 作为第二代免疫抑制药的代表性药物,他克莫司临床大量应用于肝肾等器官移埴的抗排 斥反应及免疫缺陷性疾病,具有药效强、剂量低、提高器官存活率、急性排斥反应低等优点。 但是他克莫司治疗范围限制在一定的剂量,毒副作用较大,关键是毒副作用与血药浓度呈量 效正相关性,再加上其药动学指标患者个体差异较大,无法用服药量来判断血药浓度的范围 [3]。因此,临床使用他克莫司治疗病症时,为提高免疫抑制效果的同时将不良反应的发生率 降到最低,需要监测药物在休内的血药浓度,根据测量到的血药浓度来确定给药剂量和方案。 检测他克莫司血药浓度时,通常采用全血来做为检测标本,这是因为:① 全血/血浆中他克莫司 浓度的分布为 20:1,全血中药物浓度较高,更易达到检测灵敏度要求;② 血浆浓度稳定性关, 比全血浓度变异性大;③ 他克莫司血药浓度监测为全血谷值浓度,所以一般不用血浆。而且 患者个体差异较大,血药达峰时间并不一致,所以临床检测一般以全血为主[4,5]。 有研究表明,许多因素能影响他克莫司的血药浓度[6～8],例如性别,女性的血药浓度要 高于男性,体重和身高也对他克莫司的血药浓度有影响,给药时间也对他克莫司的血药浓度 有很大影响,例如早晨服药,血药浓度明显高于一天的其它时间段,而服用取它的药物对他克 莫司的血药浓度也有影响,例如大环内酯类药物、氯霉素、林霉素、抗真菌类药物、抗病毒 药、钙拮抗剂等药物的联合用药,均会影响到他克莫司的血药浓度,所以临床上对他克莫司 血药浓度的监控非常重要[9]。 近年来他莫西司的血药浓度的测定方法,主要有串联质(TurpiniaVentHPLC-MS/MS)、酶联免疫吸附 法(TurpiniaVentELISA)、酶免法(TurpiniaVentEIA)及微粒子酶免分析法(TurpiniaVentMEIA)[10]。本研究采用反相高效液相色谱 法测定他克莫司血药浓度,准确度高,易于操作,适于临床推广[11,12]。 我们的研究结果表明:反相高效液相色谱法能够较好测定他克莫司血药不同浓度的相对 和绝对回收率,也能较好测定他克莫司血药不同浓度的日内和日间精密度。他克莫司血药浓 度在 1.32～16.0mg/ml 范围内线性关系良好,平均加样回收率为 103.2%。本研究探讨了, 他莫西司的临床反相高相色谱检测法,但是对于检测他莫西司血药浓度的质控方法,并没有 做探讨,质控系统的建立对于评价方法的准确及考虑其它影响检测的因素的控制十分重要。 现在质控方法主要有两种,一个是定期测定样本,根据质控结果是否符合要求来确定,质控方 法的正确性。另一种方法即是绘制质控图,即已测定结果为纵坐标,测定时间或者批次为横 坐标,绘制标准图谱,限定有效范围。本研究的下一步即为探讨反相高相液相检测法的质控。 临床用药类型的丰富性和复杂性，使得药物治疗质量的不可控性相对更高。据国家药 品不良反应监测中心(TurpiniaVent简称为“国家 ADR 中心”)的报道，2010 年国家 ADR 中心共收到药品 不良反应/事件报告超过 69 万份，比 2009 年增长 8．4%;其中，新的和严重的药品不良 反应/事件报告 109，991 份，比 2009 年增长 16．2%。截至到 2010 年末，国家 ADR 中心已累计收到药品不良反应/事件报告 315 万余份。因此，人们不禁要问:“我们怎样才能 获得负责任的药物治疗呢?”1975 年，Mikeal 等［1］最早提出药学服务的概念 (TurpiniaVentPharmaceuticalCare，PC)，界定为满足患者获得安全与合理用药需要的服务;1980 年， Brodie 等［2］强调:为了保证患者获得最优的安全性与有效性治疗，PC 包括用药决策和 提供患者所需药品与治疗前、治疗中、治疗后 3 个阶段必要服务的内容;1989 年，Hepler 等［3］认为，PC 是为提高患者的生活质量，保证患者获得预期的用药结果，而为患者提 供的负责任的药物治疗服务，侧重于服务质量。之后，学者 Granada-II 则认为，PC 应关 注患者的需要，药物治疗的临床结果应与患者的需要相关。学者 PCNE 指出，PC 应以循 证医学和循证药学基础来为患者提供最优药物治疗结果的服务活动。Apoteket 侧重于说 明 PC 是确认、解决、随访和记录的药物治疗问题的服务活动［4］。开展药学服务是改善 患者用药质量的重要措施。 1 材料和方法 以我国的“中国期刊网、维普中文科技期刊数据库和中国生物医学文献数据库”为检索 资源，以 1995－2011 年 10 月 31 日为年限检索，将“药学服务”、“药学监护”和“药学保 健”作为篇名进行期刊精确检索，剔除重复发表和少部分实际内容离题的论文，获得药学服 务相关有效文献 1840 篇。对检索出的每篇文献按照论文年度发表量、发表文献出处的区 域分布和研究内容、覆盖的疾病种类及药品类型等项目进行统计分析。 2 结果与分析