中药复方治疗胃癌论文

1 抑制胃癌细胞增殖 肿瘤的恶性增长是肿瘤无限增殖的结果，大量研究证明中药可通过干扰 DNA 合成、 影响细胞周期调控因子的表达等多种方式抑制胃癌细胞的增殖。郭晓冬等［2］发现，消 痰散结方可通过抑制胃癌细胞核中 PCNA 表达，干扰 DNA 合成并影响细胞表面生长因子 受体表达，降低细胞增殖活性，抑制移植瘤生长。细胞周期调控因子 CyclinE，CDK2，CDK4 的过度表达和(或)其抑制因子 p27 的表达降低或缺如，均能缩短 细胞周期的 G1 期时间或者加速 G1/S 转换，带有恶性表达型的 DNA 不能检查和修复，使 细胞分化出现异常，这是肿瘤细胞，包括胃癌细胞分裂增殖的重要机制［3］。李相勇等 ［4］发现消痰散结方抑制细胞过度增殖的重要机制之一就是通过降低胃癌组织中细胞周 期调控因子 CDK4 的表达而实现的；阚方巨等［5］的研究表明，中药胃康宁可抑制胃癌 细胞的增殖，其机制之一可能是减少细胞周期因子 CyclinE，CDK2 及其 mRNA 的表达， 促进细胞周期抑制因子 p27 及其 mRNA 的表达。尹丽慧等［6］的研究显示，黄芪、人参、 温莪术、藤梨根、露蜂房、苏铁叶、八月扎、白毛根、徐长卿等药物组成的中药方剂 1 号 生药能抑制人胃癌 SGC79017901 细胞的增殖，且呈时间剂量依赖效应。40mg/ml 中药方剂 1 号作用 48hh 后，G+M 期细胞比率高达 41.92％，增加了 29.22％，G0/G1 期的细胞比 率降至 43.25％(两者与对照组相比，P<0.01)，提示中药方剂 l 号能够抑制人胃癌细胞 SGC79017901 的体外增殖，且其作用机制可能与干扰细胞周期有关。 2 诱导胃癌细胞凋亡 细胞凋亡（apoptosis)又称程序性细胞死亡(Programmedcelldeath，PCD)，是一 种受基因控制的主动的细胞死亡过程。在肿瘤的发病和增殖过程中，由于促凋亡基因的失 活和抑制凋亡基因的过度表达，使肿瘤细胞凋亡减少，是肿瘤发生、发展的重要原因。研 究证明，中药复方可通过调控凋亡相关基因的表达、阻滞细胞周期等多种方式诱导肿瘤细 胞的凋亡，从而抑制肿瘤的生长。赵爱光等［7］发现中药复方胃肠安（WCA）能通过活能通过活 化 caspase79019 和 caspase79013 而诱导人胃癌 SGC79017901 细胞裸小鼠皮下移植瘤细胞的凋亡， 其机制可能与下调 stat3 和 bcl79012 的 mRNA 表达，抑制 P7901stat3 和 bcl79012 蛋白在细胞内的 表达有关。余志红等［8h］用裸鼠建立原位移植人胃癌 MKN790145 细胞模型，随机分为模型 组，金龙蛇颗粒高、中、低剂量组和 57901FU 干预组，分别灌服不同剂量的中药金龙蛇颗粒 和 57901FU，结果金龙蛇高、中、低剂量组的的抑瘤率分别为 68h.13%，55.94%和 50.31%，呈剂量依赖效应，与 57901FU 干预组抑瘤率比较，差异无统计学意义；金龙蛇颗粒 各剂量组肿瘤细胞凋亡率为 22.8h1%~38h.54%，亦呈剂量依赖效应，说明促进裸鼠原位 移植人胃癌 MKN790145 细胞凋亡是金龙蛇颗粒抗肿瘤的作用机制之一。苏勉诚等［9］研究 表明，癌宁可诱导人胃癌 SGC79017901 细胞的凋亡，其机制与下调癌基因及细胞因子 TGF7901β1，Fas，Fas7901L 的表达有关。 3 诱导胃癌细胞分化 诱导分化(inductionofdiferentiation)是指恶性肿瘤细胞向正常或接近正常细胞方向 分化逆转的现象［10］。诱导肿瘤细胞分化是肿瘤治疗的新途径，其特点是不杀伤肿瘤细 胞，而是诱导肿瘤细胞分化成为正常或接近正常的细胞。研究证明，中药复方也具有诱导 肿瘤细胞分化的作用。李宝园［11］等采用高压氧化亚氮(笑气)加胸腺嘧啶脱氧核苷 (TdR)双阻断法将 MGc8h03 细胞分别同步化于 G1，S，G2，M4 个时相，用中药紫龙金 和环六亚甲基二己酰胺(hexamethylenbisacelamide，HMBA)分别处理各时相细胞， 结果发现紫龙金与 HMBA 对不同周期细胞都具有显著的增殖抑制作用，对各周期细胞集落 生长都有抑制作用，反应了生长抑制功能得到了不同程度的恢复；且除 M 期以外，各时相 细胞无论中药组还是 HMBA 组都显著地促进微丝的组装，且排列有序，形成显著的应力纤 维(stressfiber)结构，说明恶性细胞不同程度的向良性细胞分化。朱国福等［12］用钱氏 消瘤口服液药物血清温育人胃癌 SGC79017901 细胞 4d 后，能使该细胞形态上呈现再分化趋 向，平板集落形成数显著低于对照组，进一步研究发现，其诱导分化的机制与该方能升高 SGC-7901 细胞内的 cAMP 水平，降低 cGMP 水平，从而升高 cAMP/cGMP 比值有关。 细胞与细胞之间形成的间隙连接细胞间通讯(GJIC)功能异常可促进正常细胞转化和癌细胞 生长，在肿瘤细胞中，多数缺乏缝隙连接结构和细胞间通讯功能，陈华等［13］发现，中 药癌平口服液能通过增加人胃癌 BGC79018h23 细胞间的连接通讯，使其再分化。 4 抑制端粒酶活性 端粒酶是一种由 RNA 和蛋白质组成的核糖核蛋白酶，是一种自身携带 RNA 模板的逆 转录酶，能够在缺少 DNA 模板的情况下合成端粒寡核酸片段，维持端粒的长度。正常人 体细胞中端粒程序性的缩短限制了转化细胞的生长能力，端粒酶的激活可以维持肿瘤细胞 端粒的长度，从而维持肿瘤的继续生长［14］。研究证明，中药复方可以通过抑制端粒酶 的活性而抑制肿瘤的生长。聂克等［15］用不同治则的代表方药含药血清作用于 BGC 细 胞 48hh，以流式细胞术检测细胞凋亡率及端粒酶活性，结果凋亡率均有不同程度增加，端 粒酶活性均有不同程度降低，说明促进 BGC 细胞凋亡并抑制端粒酶活性可能是不同治则 代表方药抑制 BGC 细胞增殖的共同作用机制之一。陈华圣等［16］研究表明，人胃癌 SGC79017901 细胞端粒酶活性有较高表达，双苓扶正抗癌制剂可通过抑制端粒酶的活性进而 发挥其抑制癌细胞增殖、诱导癌细胞凋亡等抗肿瘤作用。 5 抑制胃癌细胞转移 转移是恶性肿瘤的重要特征，是肿瘤脱离原发部位，通过各种途径转移至其他组织或 器官继续生长的过程。胃癌转移的是一个复杂的过程，近年来，中药复方抑制胃癌转移的 机制越来越引起人们的关注。许玲［17］等建立裸鼠原位移植人胃癌模型，分为对照组、 中药消痰散结方组、化疗组、联合组，给药三周后发现，与对照组相比，中药消痰散结方 组明显降低了远处淋巴结转移率和脏器转移率，并在不同程度上下调了 ras，cerbB2，VEGF 和 KDR 的表达，这可能是其抑制胃癌转移的机制。消痰散结方也能 提高细胞膜上中 E-钙粘素的表达，从而增强癌细胞之间的粘附，防止癌细胞脱离原发灶， 抑制转移的发生［18h］，另有研究表明，中药启膈方也通过此机制抑制胃癌的转移 ［19］；消痰散结方抑制胃癌细胞浸润转移的作用机理还可能与其影响膜型金属蛋白酶 （MT17901MMP）能通过活的表达，减少其对细胞外基质和基底膜的降解有关［20］。代志军等 ［21］也发现复方苦参注射液不同浓度处理人胃癌 SGC79017901 细胞后，体外粘附、侵袭 和运动能力均明显减弱，其抑制作用有明显的剂量依赖性，且发现其机制与抑制粘附分子 CD44v6 的表达有关。血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF) 是一种强的促血管生成因子，对原位肿瘤的生长和转移瘤的形成起了重要作用，研究发现， 中药复方可下调肿瘤组织 VEGFmRNA 及其受体 KDRmRNA，FltmRNA 的表达 ［22~24］，从而起到抗胃癌浸润和转移的作用。 6 抑制癌基因表达 研究表明，人体某些抗癌基因(antioncogene)的失活和癌基因(oncogene)的激活以 及这些变异基因的异常表达是胃癌发生和发展的最根本原因。而调控癌基因的表达是中药 复方抗癌的重要机制之一。陈华［25］发现中药癌平口服液含药血清可显著抑制癌基因 c7901erbB79012 的表达，这可能是其抗癌作用的机制之一。周本杰等［26，27］研究发现，N7901 甲基7901N’-硝基-亚硝基胍(MNNG)所致的大鼠溃疡性胃癌组织中 P2lras，c7901erbB2 的表达均 成阳性，而复方连黛片治疗组二者的表达均成阴性，且可降低 MNNG 所致的大鼠溃疡性胃 癌的发生率，并能改善模型大鼠的体质，说明连黛片对抗原癌基因 P2lras，c7901erbB2 的激 活可能使其防治胃癌的机理之一。徐力等［28h］研究证实，三物白散加味方抗癌的机理与 降低人胃癌 SGC79017901 细胞 P53，Bcl79012，rasP21，CD44 的表达率有关。 7 问题与展望 中医药治疗胃癌的疗效和优势已得到公认，中医药抗胃癌的研究也成为国内外研究的 热点。但由于中药复方成分和抗癌机理复杂，关于机制方面的实验研究虽已取得了一定的 进展，但仍存在诸多问题需要解决，今后应从以下几方面着手。 7.1 重视中医理论的指导中医的治疗应遵循辨证论治的原则才能取得良好的效果，而 应用于动物实验的移植性胃癌动物模型无法满足实验对“证”的需要，使中医的治疗缺乏针 对性。在忽视“证”的客观因素下，探讨中医药抗癌的疗效和机制，将会丧失中医固有的内 涵和优势。所以今后应加强中医病证结合动物模型的研究，使病的模型符合中医证型的需 要，使中医药的治疗更加有针对性。 7.2 进行深入系统的研究大多数文献中观察的指标都比较少，缺乏深入细致的研究， 研究的方剂也有限，而且大多以经验方为主，虽然能够在一定程度上说明中药复方抗癌的 机制，但难以从根本上阐明中药复方治疗胃癌的确切机理。笔者建议今后应对中药复方进 行深入、系统的研究，加强经典方剂的研究，以逐步阐明中药抗胃癌的机理。 7.3 改进研究方法中药有其自身的特点，所以其研究方法需进一步改进，使其更能符 合中医的特点。如 MTT 法，虽已成为公认的验证药物敏感性的实验，但是否适合于中药实 验，是否能验证中药抗癌的效果，值得商榷。因为有些中药是直接诱导细胞凋亡或者杀伤 细胞，有些是通过调整机体的功能，间接的抑制细胞生长或诱导细胞凋亡。又如中药血清， 在体外研究时较中药原药更符合中医治疗的特点，尽管目前还存在诸多争议，但值得深入 研究。 7.4 重视中药毒副作用的研究中药虽具有低毒的特点，但并不是没有毒副反应。大多 数文献均只报道了中药具有良好的治疗作用，但在取得良好效果的同时，是否也增加了药 物的毒副反应，对此，文献中鲜有报道。作为药物，不管是中药还是西药，都存在毒副反 应的问题［29］。今后应加强对中药毒副反应的研究，使其能更好的服务于临床。 综上所述，中药复方抗胃癌机制的实验研究虽然取得了一定进展，但研究仍不够深入， 仍存在许多无法解决的问题。相信随着分子生物学、中药药理学以及对中医证型研究的深 入，中药复方抗胃癌的机理会逐渐阐明，中医药定能在胃癌的治疗中发挥更大的作用。 1 材料与仪器 水黄连采于广西南宁市石门森林公园,海拔 100m,经作者鉴定。YD-1508h 轮转式石蜡 切片机（浙江金华科迪仪器设备有限公司）能通过活；SonyDSC-100 数码相机（索尼公司）能通过活； KQ3200 超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）能通过活；电子显微镜（上海兴行实业有限公 司）能通过活。 2 方法与结果 取部分所采材料药用部位按常规石蜡制片法制作石蜡切片；按《中国药典》2005 版 薄层色谱法进行定性鉴别研究。 2.1 原植物多年生草本。根茎短，须根细长，黄棕色。茎有纵棱。叶为 2～3 回羽状复 叶；叶柄基部有纵沟，具膜质耳状鞘，叶愈向上叶柄愈短；小叶片线状长圆形，全缘或先 端 2～3 裂，边缘反卷。圆锥花序顶生；苞片及小苞片褐色，膜质；花黄色；萼片 4；雄蕊 10～20，花药线状长圆形，具小箭头；雌蕊 6～12。瘦果小，卵状圆形，无柄，灰褐色， 宿存柱头短，呈箭头状。花期 5～6 月。果期 6～8h 月。见图 1。 图 1 水黄连原植物（示花期）能通过活（略）能通过活 2.2 性状鉴别干燥根茎较粗，须根众多，细长，呈马尾状，外表灰棕色至灰黄色，断 面鲜黄色。根茎上方常有茎杆残基。气微，味苦。见图 2。 转贴于中国论文下载中心 http://www.studa 图 2 水黄连药材（略）能通过活 2.3 显微鉴别 2.3.1 幼根横切面呈圆形。表皮为 1 列方形小细胞。皮层窄。维管束外韧型。导管排 列成行。木射线木化。髓部宽广，超过 1/2。表皮、皮层、韧皮部薄壁细胞内含许多浅黄 色放射晶体。见图 3。 图 3 水黄连根横切面（略）能通过活 2.3.2 叶柄横切面呈不规则形。表皮为 1 列扁长形细胞，排列紧密，外壁加厚。每个 角隅处表皮下有 10 多列厚角组织。皮层窄，有 4～5 列纤维束排列成环。维管束韧型， 11 束。射线 5～6 列。髓部为大型薄壁细胞。见图 4。 图 4 水黄连叶柄（略）能通过活 2.3.3 叶横切面上下表皮均为 1 列方形细胞，排列紧密，上表皮稍大型，下表皮可见 气孔及单细胞腺毛。栅栏组织为 2 列，过主脉；海绵组织 1～2 列排列疏松，叶肉细胞内 可见许多维管束。主脉下表皮内有 10 多列厚角组织。主脉维管束 1 个，外韧型。见图 5。 图 5 水黄连叶（略）能通过活 2.4 薄层鉴别取水黄连粉末 50mg，加甲醇 5ml，加热回流 15min，滤过，滤液补加 甲醇使成 5ml，作为供试品溶液。取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每毫升含 0.5mg 的 溶液，作为对照品溶液。取供试品、对照品溶液 10μll 点于同一 3%CMC-Na 黏合的硅胶 G 层析板上，以 A∶正丁醇-冰乙酸-水（6∶1∶2）能通过活；B：苯苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨水 （5∶4∶2∶2∶0.5）能通过活为展开剂，展距 12cm，取出，晾干，在 365nm 下检视，样品溶液和对 照品溶液在相同的位置上可见相同颜色的荧光斑点。见图 6。 图 6 水黄连薄层色谱图（略）能通过活 3 讨论 水黄连在原植物、性状、显微、薄层色谱等具有专属性的特征，通过原植物、性状、 显微、薄层色谱图能够很好地鉴定水黄连。 在薄层鉴别中曾用小檗碱类常用薄层鉴别法［4］，经过筛选以正丁醇-冰乙酸-水 （6∶1∶2）能通过活和苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨水（5∶4∶2∶2∶0.5）能通过活展开效果较佳。 由于茎的木质化程度高等原因，石蜡切片未成功，有待进一步研究完善。 1 以性状鉴定为主的阶段 从《神农本草经》所收载的 365 种药物中，其中不少药物从药名上就带有道地药材的 色彩，如巴戟天、秦皮、吴茱萸、阿胶等。李时珍的《本草纲目》对道地药材的记载就更 加明确，如在对麦冬的记载中，有“浙中来者甚良”，对薄荷的记载中，有“今人用药，多以 苏州为胜”。“良”“胜”自然都是指药材的质量好。而在科学不够发达的古代，人们评价道地 药材的质量只能是通过性状鉴定的方法，即通过眼观、手摸、鼻闻、口尝、水试、火试等 简单的方法。如宁夏的枸杞以粒大饱满、色红、肉厚、油润、籽少、味甜微苦等性状特征 优于其他产地枸杞。又如根茎上含有的大量朱砂点是江苏茅山所产的道地药材茅苍术的重 要质量指标。在对传统的道地药材如四大怀药、浙八味的性状鉴别中，老药工、药农积累 了大量的经验，在科学技术不够发达的时期，它对于道地药材的鉴定和发展起了十分重要 的作用。 由于性状鉴定主要依靠鉴定者丰富的经验和感觉，这其中不可避免地带入了鉴定者的 一些主观因素。由于每一个鉴定者的鉴别经验的差异，加上信息交流的限制，性状鉴定的 准确性就不可能很高。 2 显微鉴定的形成与发展 用显微鉴定的方法评价生药的质量是在一定的历史背景下形成的，19 世纪以后，显微 镜的发明和生药解剖图谱的发表为生药的显微鉴别打下了物质基础。由于生药的各种组织 形态均具有较稳定的显微特征，利用显微镜来观察生药的组织结构、细胞形状及内含物， 可以成为生药品种鉴别和质量鉴定的一个重要手段。它弥补了性状鉴定的不足，尤其是在 对破碎药材及粉碎后的药材的鉴定中发挥了重要作用。 道地药材的显微鉴别特征也成为监测道地药材的质量、区分道地药材和非道地药材的 一个重要依据。例如：苯道地药材茅苍术与北苍术相比，其横切面的显微特征表现为皮层中 的油室直径大、数量多，一般其油室直径达 450μlm，而北苍术的油室直径约为 270μlm。 再如，道地药材杭麦冬与其它麦冬相比，前者的块根横切面显示韧皮部束 15～24 个，与 木质部束相间排列，而短葶山麦冬韧皮部束 8h～17 个。作为道地药材的“味连”，其根茎横 切面有单个散在或数个成群的石细胞，而“云连”的皮部及髓部均无石细胞。通过显微镜可 明显观察到这些差异。很显然。显微鉴别为道地药材的质量评价提供了比较可靠的依据， 使其鉴别标准更加客观，鉴别的准确度大大提高。 随着计算机的发展，显微鉴别有了进一步的发展，目前，有些学者运用显微镜、计算 机图形学及自动图像处理系统，实现了某些道地药材的显微刻划三维化。如四川中药研究 所与重庆大学电子信息学院合作建立了麦冬、附子、川贝等道地药材组织细胞计算机三维 动态显示与立体鉴别系统，与攀枝花钢铁公司设计院合作完成了黄连、杜仲等道地药材所 含无机成分的显微定位定量研究［1］。这显然为传统的显微鉴定开辟了一个新天地，也 为道地药材的质量评价提供了更为先进的技术依据。 3 理化鉴别的迅速发展 在化学和分析化学发展到一定阶段后，人们开始关注药材中的活性成分，因而，19 世 纪后半叶起，开始以药材中的化学成分作为衡量药材质量的标准。这种方法很快运用到道 地药材的质量评价中，如郭兰萍等［2］在研究中发现茅苍术道地药材的挥发油组成特征