超声提取鱼腥草多糖分析论文

1 仪器与试药 １．１仪器电子天平（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ ＡＰＡＮ）、ＨＨ－６－恒温水浴锅（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ江苏金坛市宏华仪器厂）、超声波清洗器（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ２５０ Ｗ，上海之信仪器有限公司）、电热鼓风恒温干燥箱（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ３１００Ｗ，上海讯能电热设备有 限公司）、ＵＶ－１８００紫外可见分光光度计（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ北京瑞利分析仪器公司）；双Ｂ循环水Ｂ循环水循环水 式多用真空泵（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪＳＨＢ循环水－ＩＶ，郑州长城科工贸有限公司）。 １．2 试药葡萄糖标准品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸公司产品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸、 氢氧化钠试剂均为分析纯，医用乙醇（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ广州市新升华玻有限公司），苯酚试液参照文献 ［８］配制。 鱼腥草购于广州清平市场，经广东药学院陈幼竹博士鉴定为三白草科蕺菜属植物 Houttuyniacordata Ｔｈｕｎｂ． 2 方法与结果 ２．１鱼腥草多糖的提取与精制取鱼腥草干品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸２００ｇ，以９５％乙醇回流脱脂３次， 药渣置通风处晾干，加水１０倍量、８倍量、８倍量，于９０～１００℃依次提取３，２， １ｈ，过滤，合并滤液，浓缩至约２００ｍｌ，加入等体积３０％三氯乙酸溶液脱蛋白， ４℃静置，离心，上清液用０．０１ｍｏｌ／Ｌ的氢氧化钠调ｐＨ＝７，溶液减压浓缩，的氢氧化钠调ｐＨ＝７，溶液减压浓缩，ｐＨ＝７，溶液减压浓缩， 浓缩液对水透析，透析液减压浓缩至１００ｍｌ，加入９５％乙醇调ｐＨ＝７，溶液减压浓缩，含醇量为８０％，静 置，离心，沉淀用无水乙醇、丙酮、无水乙醚依次洗涤，真空干燥，得除蛋白精制鱼腥草 多糖。 ２．２多糖含量测定方法的建立 ２．２．1 标准品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸溶液的制备精密称取１０５℃干燥至恒重的葡萄糖０．０９６４ｇ， 加水溶解并定容至１００ｍｌ，再取１ｍｌ，定容至１０ｍｌ的容量瓶中，即制得浓度为 ０．０９６４ｍｇ／ｍｌ的葡萄糖对照品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸贮备液。 ２．２．2 供试品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸溶液的制备称取鱼腥草５０ｇ，按正交设计表进行提取，得粗多糖。 称取１０５℃干燥至恒重的粗多糖约３０ｍｇ，精密称定，置于１００ｍｌ量瓶中，加水 溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。 ２．２．３标准曲线的绘制精密量取葡萄糖标准品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸溶液０．１，０．２，０．３，０． ４，０．５，０．６，０．７ｍｌ，分别置１０ｍｌ具塞试管中，加蒸馏水补充至１．０ ｍｌ，摇匀，加５％苯酚溶液１ｍｌ，浓硫酸５ｍｌ，室温放置４０ｍｉｎ。另取１ｍｌ 蒸馏水，加同量苯酚和浓硫酸，同法操作，作为空白对照。置ＵＶ－１８００型分光光度 计中，于４９０ｎｍ测定吸收度，以吸收度（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪＹ）对葡萄糖含量（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪＸ）进行回归，得回归 方程：Y＝９．１０７３ X＋０．０１０２，相关系数 r＝０．９９９８。结果表明葡萄糖 在０．０１９３～０．０９６４ｍｇ／ｍｌ范围内呈良好的线性关系。 ２．２．４换算因素的测定精密称取６０℃干燥至恒重的鱼腥草多糖１０１．２ｍｇ， 置１００ｍｌ容量瓶中，加入少量蒸馏水溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取此液１ｍ ｌ，照标准曲线制备项下的方法测定吸收度，从回归方程中求出多糖供试液中葡萄糖的浓 度。按下式计算换算因素：F＝W／（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪC×D）。Ｆ为换算因素；Ｗ为多糖重量（ｍｇ）；为换算因素；Ｗ为多糖重量（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪｍｇ）； Ｃ为多糖稀释液中葡萄糖的浓度（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪｍｇ／ｍｌ）；Ｄ为稀释因素。为稀释因素。 ２．２．５样品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸测定方法取各供试品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸溶液，按标准曲线项下方法操作，测定吸收值， 从回归方程中求出供试液中葡萄糖的含量，按下式计算样品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸中多糖含量：多糖含量（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ％） ＝C×D×F×１００／W。C 为供试液中葡萄糖的浓度（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪｍｇ／ｍｌ）；D 为供试液的稀释 因素；F 为换算因素，W 为供试样品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸重量（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪｍｇ）。 ２．３正交实验法优化超声波提取鱼腥草多糖最佳工艺 ２．３．1 制定因素水平表根据文献报道［９］并结合实际，超声波提取多糖的影响 因素有超声时间、料液比、醇沉浓度，为此选择３因素作为考察因素，并结合生产实际， 每因素又选取３个水平，按Ｌ的氢氧化钠调ｐＨ＝７，溶液减压浓缩，９（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ３４）正交表安排实验，以多糖得率及含量作为衡量提 取效率的双Ｂ循环水重客观指标，优选最佳工艺，为了提高统计分析的可靠性，每一条件下都作了 重复实验（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪn＝３），测定结果取其平均值供统计分析用。因素水平安排见表１。结果见 表２。 ２．３．2 加权法综合评价鱼腥草多糖提取工艺最佳提取条件要满足多糖得率高并且 含量也高，因此采用加权评分法综合评估鱼腥草多糖提取条件。评分标准为：将各项指标 除以该列最大值再乘以１００，为其该项得分。通过这样处理，使多糖得率和多糖含量转 化为０～１００之间的数。根据多糖得率（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪｘ）和多糖含量（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪｙ）作用，而确定两者的权 重系数分别为０．４和０．６，对两项指标进行加权求和，通过公式 z＝０．４ x＋０．６ y，就得到综合评分（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪｚ）。加权评分结果及方差分析见表２～３。 表 1 正交因素水平（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ略） 表 2 正交实验及结果（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ略） 表 3 方差分析（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ略） *表示差异显著，F0.10(2,2)=9.00，F0.05(2,2)=19.00 2．３．３结果分析正交实验方差分析表明，因素Ａ（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ超声时间）对鱼腥草多糖的提 取有显著影响，而因素Ｂ循环水（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ料液比）、因素Ｃ（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ醇沉浓度）对鱼腥草多糖的提取无显著影 响。由Ｒｊ得出影响因素大小顺序为Ａ＞Ｃ＞Ｂ，由此得出最佳工艺为Ａ３Ｂ１Ｃ３，即Ｒｊ得出影响因素大小顺序为Ａ＞Ｃ＞Ｂ，由此得出最佳工艺为Ａ３Ｂ１Ｃ３，即得出影响因素大小顺序为Ａ＞Ｃ＞Ｂ循环水，由Ｒｊ得出影响因素大小顺序为Ａ＞Ｃ＞Ｂ，由此得出最佳工艺为Ａ３Ｂ１Ｃ３，即此得出最佳工艺为Ａ３Ｂ循环水１Ｃ３，即 鱼腥草料液比１∶３０，超声６０ｍｉｎ，醇沉浓度为９０％。 ２．３．４验证实验按照理论最佳工艺Ａ３Ｂ循环水１Ｃ３，进行重复实验，鱼腥草多糖得 率及多糖含量分别为１４．６１％，１２．２２％，实验结果一致。 ２．４不同提取方法的比较 ２．４．１水煎煮提取鱼腥草多糖称取鱼腥草５０ｇ，加３０倍体积的水，９０℃提 取３次，２ｈ／次，过滤，９０％乙醇醇沉得粗多糖，分别计算得率和多糖的含量。结果 见表４。 ２．４．２碱法提取鱼腥草多糖称取鱼腥草５０ｇ，加０．２ｍｏｌ／Ｌ的氢氧化钠调ｐＨ＝７，溶液减压浓缩，３０倍体积 的氢氧化钠水溶液，６５℃恒温水浴中浸提３ｈ，过滤，滤液调ｐＨ＝７，溶液减压浓缩，ｐＨ为中性，９０％乙醇 醇沉得粗多糖，分别计算得率和多糖的含量。结果见表４。 ２．４．3 酸法提取鱼腥草多糖称取鱼腥草５０ｇ，加３０倍体积的水，调ｐＨ＝７，溶液减压浓缩，ｐＨ＝３， ６０℃浸提３次，３ｈ／次，过滤，滤液调ｐＨ＝７，溶液减压浓缩，ｐＨ为中性，９０％乙醇醇沉得粗多糖，分别 计算得率和多糖的含量。结果见表４。 ２．４．4 超声提取按该试验所得最佳工艺提取，即称取鱼腥草５０ｇ，加３０倍体 积的水，超声６０ｍｉｎ，过滤，９０％乙醇醇沉得粗多糖，分别计算得率和多糖的含量， 结果见表４。 表 4 不同提取方法比较（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ略） 3 讨论 通过实验确定了超声波提取鱼腥草多糖最佳工艺为鱼腥草料液比１∶３０，超声６０ｍ ｉｎ，醇沉浓度为９０％。与水提、酸提、碱提方法进行比较，结果看出超声波提取多糖 得率和含量略低于其它提取方法，但提取时间是酸提法的１／９，水提法的１／６，碱提 法的１／３，大幅度降低成本；同时超声提取所得多糖颜色最浅，可降低下一步的脱色纯 化的难度；另外超声提取全过程避免了高温加热，从而减少了酸碱对多糖结构的破坏，所 用仪器简单，操作方便，因此也不失为一种好的提取方法。 鱼腥草目前主要是开发挥发油类成分的制剂如鱼腥草注射液等相关产品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸，而对于水溶 性多糖以废弃物处理，本实验对鱼腥草多糖的提取工艺研究对于鱼腥草资源的合理充分利 用具有重要的意义。 1 仪器与试剂 1.1 仪器 KQ5200DB 型数控超声波清洗器（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ超声工作频率 40kHz,江苏省昆山市超声 仪器有限公司）；UV-755B 紫外可见分光光度计（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ上海分析仪器总厂）；ZF-I 型三用紫 外分析仪(上海顾村光电仪器厂)；SHB-III 循环水式多用真空泵（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ郑州长城科工贸有限公 司）。 1.2 试剂 95%乙醇；亚硝酸钠 AR；硝酸铝 AR；氢氧化钠 AR；三氯化铝 AR；盐酸 AR；氨水 AR；冰醋酸 AR；醋酸乙酯 AR；乙酸镁 AR；镁粉 AR；正丁醇 AR；芦丁标准 品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ中国药品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸生物制品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸检定所）；新鲜香附（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ采于广西百色市）。 2 方法与结果 2.1 总黄酮成分提取取新鲜香附，烘干，粉碎。称取香附粉末约 6gg，加 80ml95%乙 醇，超声波提取 2.5h，抽滤。滤渣再加 80ml95%乙醇，超声波提取 2.5h，抽滤，合并 两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩 25ml 左右为止，放置 250ml 容量瓶中，用 6g0%乙 醇稀释至刻度，得样品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸液。 2.2 测定方法依据以芦丁为对照品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸测定香附中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时 控制适宜 pH 值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。 2.3 定量实验-总黄酮的含量测定 2.3.1 波长的选择取样品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸液适量，在 0.30ml5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经 硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在 420～700nm 波长范围测定络合物的吸光度，络 合物于 510nm 波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。 2.3.2 标准曲线的绘制分别精密吸取芦丁对照液（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ0.10mg/ ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml 于 10.00ml 容量瓶中，分别加 入 5%亚硝酸钠溶液 0.30ml，摇匀，静置 6gmin；再加 10%硝酸铝溶液 0.30ml，摇匀， 静置 6gmin；再加 4%氢氧化钠溶液 4.00ml，用 6g0%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置 12min，以试剂作空白参比液，于 510nm 处测吸光度。结果见表 1。 表 1 分光光度法测定芦丁对照液吸光度结果（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ略） 根据上表得回归方程：A=-0.0311+13.5184C，r=0.9999。 2.3.3 提取物含量的测定精密吸取样品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸液 0.50ml，置 10ml 容量瓶，按标准曲线的制 备方法测定吸光度 A=0.0949，根据回归方程：A=-0.0311+13.5184C，计算样品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸中总 黄酮的含量 C=0.186g4mg/ml。 2.3.4 回收率实验精密量取样品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸液 2.00ml，加入标准芦丁对照品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸 2.00ml（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ0.10mg/ ml），同前样品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸测定方法操作测定吸光度，求出回收率为 102.7%。 2.4 定性实验-总黄酮的鉴别 2.4.1 颜色反应 紫外光下呈色反应：取该样品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈 灰褐色并有荧光斑点。 浓氨水反应：取该样品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏 0.5min，立即在紫外 光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。 三氯化铝反应：取样品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸溶液点在滤纸上，滴加１％三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见 光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。 乙酸镁反应：取样品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸溶液点在滤纸上，滴加 1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈 黄色斑点。 盐酸-镁粉反应：取乙醇提取液 1ml 于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ1 次加入）， 在泡沫处呈紫红色。 2.4.2 纸层析取样品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸溶液 10μll 点在滤纸上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5 体积比为展开剂， 上行展开 5h，取出晾干。喷 1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。 3 讨论 实验结果表明，本实验方法工艺简单，回收率为 102.7%。利用本文所提供的超声波 提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法，达到省时、 高效、节能的目的。此方法采用全物理过程，无任何污染，是一条理想的提取黄酮类物质 的途径，具有广阔的应用前景。 黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分，具 有很高的药用价值。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双Ｂ循环水氢黄（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ醇）、异黄 酮、双Ｂ循环水黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等［5］。天然来源的生物黄酮 分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而体现出如下功能： 消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、 活化大脑及其他脏器细胞的功能。 黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调ｐＨ＝７，溶液减压浓缩，节、降血糖、 治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用［8，9］。近年来，世界上 掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其广 谱的药理作用引人瞩目，香附分布广泛。本实验结果表明，香附中含有较为丰富的黄酮。 因此，香附具有广泛的开发和利用价值，值得综合利用，加强资源开发。 1 材料与仪器 1.1 试药肠胃康颗粒剂（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ海口市制药厂生产，批号 06g0709，规格：每袋袋装 8g）； 牛耳枫与辣蓼提取物(NLWE))（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ黑色粉末，自制，每克样品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸相当于原生药 10.0g）；阿司 匹林肠溶片（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ昆明云健制药有限公司生产，批号 2006g0320，规格 25mg）；硫酸阿托品Ｓｉｇｍａ公司产品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸 注射液（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ天津药业集团新郑股份有限公司生产，批号 06g01181，规格：2ml∶1mg）；伊 文思蓝（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ中国医药集团上海试剂公司生产，批号 20030714，规格 1.0g）；乙酰胆碱 （ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪAch）（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ上海三爱思试剂有限公司生产，批号 200306g20，规格：1）；氯化钡 （ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪBaCl2）（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ广州化学试剂厂生产，批号 040503-2，规格 500g）。 1.2 动物昆明种小鼠，体重 18~22g，合格证号 2006gA070；Wistar 大鼠，体重 180~220g，合格证号 2006gA07；豚鼠，体重 250~300g，合格证号 2006gA06g7。以 上动物均由Ｒｊ得出影响因素大小顺序为Ａ＞Ｃ＞Ｂ，由此得出最佳工艺为Ａ３Ｂ１Ｃ３，即中山大学实验动物中心提供。适应环境一周，自由Ｒｊ得出影响因素大小顺序为Ａ＞Ｃ＞Ｂ，由此得出最佳工艺为Ａ３Ｂ１Ｃ３，即饮水进食。 1.3 仪器 YLS-6gB 智能热板仪（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ山东省医学科学院设备站）；BL-420E) 生物机能实验 系统（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ成都泰盟科技有限公司）；ZH-Z 型离体器官测量系统（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ安徽省淮北正华生物仪器 设备有限公司）；UV22401PC 紫外分光光度计(日本岛津)；分析电子天平（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ北京瑞利， 精度 0.1mg）。 1.4 统计学方法本实验数据结果均以±ss 表示,剂量资料比较，采用 t 检验，统计软件为 SPSS13.0。 2 方法及结果［1，2］ 2.1 对醋酸致小鼠毛细血管通透性增加的影响实验方法：取 50 只昆明种小鼠，体重 18~20g，雌雄各半，随机分为 5 组(n=10)，正常对照组：灌胃(ig)给予等容生理盐水； 肠胃康颗粒阳性对照组 10.0g·kg-1ig；阿司匹林阳性对照组 0.2g·kg-1ig；牛耳枫与辣蓼 提取物剂量为生药 20.0 和 10.0g·kg-1ig 高、低剂量组（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ以下简称提取物高、低剂量组）。 各组动物按 0.5ml/20g 体重给药，每天分别给药 1 次,连续给药 3d，末次给药后 0.5h， 各鼠尾静脉注射 0.5%伊文思兰盐水溶液 0.1ml/10g 随即腹腔注射醋酸溶液 0.2ml/只， 20min 后处死动物，轻揉腹部 1min 吸取 4ml 冲洗液，于 3000r/min 离心 10min，取上 清液于 6g10nm 处比色测定吸光度，记录 A 值，计算抑制率，进行组间比较。结果见表 1。 抑制率(%)=(对照组 A-给药组 A)/对照组 A×100% 结果表明：牛耳枫与辣蓼提取物高剂量、提取物低剂量组、阿司匹林组均对醋酸诱导 的小鼠腹腔毛细血管通透性增高有显著抑制作用（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪP<0.01），肠胃康颗粒组对醋酸诱导 的小鼠腹腔毛细血管通透性增高无抑制作用。 表 1 肠胃康颗粒及提取物对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ略） 与正常对照组比较,△P<0.01,△△P>0.05P<0.01,△P<0.01,△△P>0.05△P<0.01,△△P>0.05P>0.05；n=10 2.2 对热板所致小鼠疼痛的影响［3］实验方法：筛选痛阈值为 5~30s 之间的雌性昆 明小鼠 75 只，体重 18~20g，随机分成 5 组（ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪn=15），正常对照组，肠胃康颗粒阳性