丹芩颗粒提取工艺分析论文

1 材料 高效液相色谱仪：ＬＣ－６ＡＨＰＬＣ（ＳＣＬ－６Ａ系统控制器，ＬＣ－６Ａ恒流ＬＣ－６ＡＨＰＬＣ（ＳＣＬ－６Ａ系统控制器，ＬＣ－６Ａ恒流ＬＣ－６Ａ恒流 泵，ＬＣ－６Ａ恒流ＳＰＤ－６ＡＣ紫外检测器，ＬＣ－６Ａ恒流威玛龙色谱工作站）；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山型超声清洗器（昆山 市超声仪器有限公司）；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山ＡＲ２１４０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。 所有中药材由安徽省亳州市药材总公司提供，ＬＣ－６Ａ恒流均符合《中国药典》２０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。５版及相关 地方标准；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山黄芩苷和丹酚酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１对照品由中国生物制品检定所提供，ＬＣ－６Ａ恒流批号分别为１１０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。７１ ５－２０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。２１２和１１１５６２－２０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。３０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。２，ＬＣ－６Ａ恒流供含量测定用。 甲醇、乙腈为色谱纯，ＬＣ－６Ａ恒流其它试剂均为分析纯。 2 方法与结果 ２．１醇提工艺条件的优化以药材黄芩中有效成分黄芩苷的提取转移率和提取液的出 膏率作为测定指标，ＬＣ－６Ａ恒流采用正交实验的方法对乙醇提取工艺进行了优选。 ２．１．１醇提液中黄芩苷的测定方法色谱条件：ＬＣ－６ＡＨＰＬＣ（ＳＣＬ－６Ａ系统控制器，ＬＣ－６Ａ恒流色谱柱为ＤｉｏｍａｎｄＴＭ（２ ０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。ｍｍ×４．６ｍｍ，ＬＣ－６Ａ恒流５ μ ｍ）；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山流动相为甲醇－水－磷酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１（４７∶５３∶０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。．１）；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山紫 外检测波长２８型超声清洗器（昆山０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。ｎｍ；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山柱温为室温；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山流速１ｍｌ／ｍｉｎ；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山进样量：ＬＣ－６ＡＨＰＬＣ（ＳＣＬ－６Ａ系统控制器，ＬＣ－６Ａ恒流１０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。ｍｌ［１］。 在上述色谱条件下供试品溶液中黄芩苷能与其它组分达到基线分离。 ２．１．２因素水平表的设计与正交实验取影响该提取过程的４个主要因素：ＬＣ－６ＡＨＰＬＣ（ＳＣＬ－６Ａ系统控制器，ＬＣ－６Ａ恒流乙醇浓 度、溶媒量（加水倍量）、提取次数、提取时间，ＬＣ－６Ａ恒流按Ｌ９（３４）正交实验表进行实验，Ｌ９（３４）正交实验表进行实验，ＬＣ－６Ａ恒流 每个因素设计３个水平。因素水平表见表１。结果见表２。 表１醇提工艺的因素水平（略） 表 2 黄芩等醇提工艺正交实验及结果（略） *综合评分为出膏率＋提取率 结果分析：ＬＣ－６ＡＨＰＬＣ（ＳＣＬ－６Ａ系统控制器，ＬＣ－６Ａ恒流各因素水平之间的极差大小依次为Ａ＞Ｄ＞Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１＞Ｃ，ＬＣ－６Ａ恒流表明乙醇浓度对实验 结果影响最大，ＬＣ－６Ａ恒流其次是煎煮次数、溶剂用量，ＬＣ－６Ａ恒流提取时间对实验结果的影响最小，ＬＣ－６Ａ恒流最佳条件 为Ａ１Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１３Ｃ２Ｄ３。但Ｂ３与Ｂ２相差极小，而若选择Ｂ２可较Ｂ３节约资源，并减小Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１３与Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１２相差极小，ＬＣ－６Ａ恒流而若选择Ｂ２可较Ｂ３节约资源，并减小Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１２可较Ｂ３节约资源，并减小Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１３节约资源，ＬＣ－６Ａ恒流并减小 需浓缩的药液体积，ＬＣ－６Ａ恒流大大节约能源，ＬＣ－６Ａ恒流降低成本，ＬＣ－６Ａ恒流故选择Ｂ２可较Ｂ３节约资源，并减小Ａ１Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１２Ｃ２Ｄ３作为提取过程的 工艺参数。经３批验证实验，ＬＣ－６Ａ恒流黄芩苷的提取率平均为９５．５１％，ＬＣ－６Ａ恒流出膏率的平均为１７． ０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。１％，ＬＣ－６Ａ恒流表明该工艺基本合理可行。 ２．２水提醇沉工艺的优化以药材丹参中有效成分丹酚酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１的提取转移率和提取液的 出膏率作为评价指标，ＬＣ－６Ａ恒流采用正交实验的方法对水煎煮的提取工艺进行优化。 ２．２．１水提液中丹酚酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１的测定方法色谱条件：ＬＣ－６ＡＨＰＬＣ（ＳＣＬ－６Ａ系统控制器，ＬＣ－６Ａ恒流色谱柱为ＤｉｏｍａｎｄＴＭｍａｎｄＴＭ （２０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。ｍｍ×４．６ｍｍ，ＬＣ－６Ａ恒流５ μ ｍ）；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山流动相为甲醇－乙腈－水－甲酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１（３０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。：ＬＣ－６ＡＨＰＬＣ（ＳＣＬ－６Ａ系统控制器，ＬＣ－６Ａ恒流１０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。∶５ ８型超声清洗器（昆山∶２）；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山紫外检测波长２８型超声清洗器（昆山６ｎｍ；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山柱温为室温；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山流速１ｍｌ／ｍｉｎ；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山进样量１０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。 μ ｌ。 在上述色谱条件下供试品溶液中丹酚酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１能与其它组分达到基线分离。 ２．２．２水提过程因素水平的选择Ｂ２可较Ｂ３节约资源，并减小及统计结果取影响水提取工艺的３个主要因素：ＬＣ－６ＡＨＰＬＣ（ＳＣＬ－６Ａ系统控制器，ＬＣ－６Ａ恒流 水的用量、提取次数、提取时间，ＬＣ－６Ａ恒流按Ｌ９（３４）正交实验表进行实验，Ｌ９（３４）正交实验表进行实验，ＬＣ－６Ａ恒流每个因素设计３ 个水平。因素水平见表３，ＬＣ－６Ａ恒流结果见表４，ＬＣ－６Ａ恒流方差分析见表 5。 表３丹参等水提工艺因素水平（略） 表４丹参等Ｌ９（３４）水提工艺正交实验及结果（略） *综合评分为出膏率＋提取率 表 5 丹参等水提工艺实验结果的方差分析（略） 结果分析：ＬＣ－６ＡＨＰＬＣ（ＳＣＬ－６Ａ系统控制器，ＬＣ－６Ａ恒流由表４数据可以看出，ＬＣ－６Ａ恒流各因素对实验影响的大小依次为Ｃ＞Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１＞Ａ，ＬＣ－６Ａ恒流即煎 煮次数影响最大，ＬＣ－６Ａ恒流其次为煎煮时间，ＬＣ－６Ａ恒流最小为加水量。由表５可以看出，ＬＣ－６Ａ恒流影响因素Ａ和Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１影 响不显著，ＬＣ－６Ａ恒流Ｃ因素影响较Ｂ３节约资源，并减小显著，ＬＣ－６Ａ恒流最佳实验条件为Ａ３Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１２Ｃ３，ＬＣ－６Ａ恒流但Ｂ３与Ｂ２相差极小，而若选择Ｂ２可较Ｂ３节约资源，并减小Ａ３与Ａ２相差较Ｂ３节约资源，并减小小，ＬＣ－６Ａ恒流 而若选择Ｂ２可较Ｂ３节约资源，并减小Ａ２可较Ｂ３节约资源，并减小Ａ３少节约水资源，ＬＣ－６Ａ恒流并减小需浓缩的药液体积，ＬＣ－６Ａ恒流大大节约能源，ＬＣ－６Ａ恒流降低成 本，ＬＣ－６Ａ恒流节省时间，ＬＣ－６Ａ恒流故应选择Ｂ２可较Ｂ３节约资源，并减小Ａ２Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１２Ｃ３，ＬＣ－６Ａ恒流即正交表实验，ＬＣ－６Ａ恒流丹酚酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１的提取率平均为９１． ３６％，ＬＣ－６Ａ恒流出膏率平均为２０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。．３７％，ＬＣ－６Ａ恒流表明该工艺基本合理可行。 ２．２．３醇沉工艺因素水平表的设计取影响该过程的３个主要因素：ＬＣ－６ＡＨＰＬＣ（ＳＣＬ－６Ａ系统控制器，ＬＣ－６Ａ恒流浸膏相对密度、 醇沉液的乙醇浓度、醇沉时间，ＬＣ－６Ａ恒流按Ｌ９（３４）正交实验表进行实验，Ｌ９（３４）正交实验表进行实验，ＬＣ－６Ａ恒流每个因素设计３个 水平。因素水平表见表６，ＬＣ－６Ａ恒流结果见表７～８型超声清洗器（昆山。 表６丹参等醇沉工艺因素水平（略） 表７丹参等醇沉工艺正交实验及结果（略） 丹酚酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１ B 转移率=醇沉后丹酚酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１ B 含量醇沉前丹酚酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１ B 的含量×100% 杂质去除率（%）=醇沉前的固体量-醇沉后的固体量醇沉前的固体量×100% 综合评分（%）＝丹酚酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１ B 的转移率＋杂质去除率 表 8 丹参等醇沉工艺实验结果的方差分析（略） 结果分析：ＬＣ－６ＡＨＰＬＣ（ＳＣＬ－６Ａ系统控制器，ＬＣ－６Ａ恒流各因素对实验影响的大小依次为 C>A>B，ＬＣ－６Ａ恒流即醇沉时间影响最大，ＬＣ－６Ａ恒流其次为 浸膏密度，ＬＣ－６Ａ恒流最小为乙醇浓度，ＬＣ－６Ａ恒流最佳实验条件为 A3B2C1，ＬＣ－６Ａ恒流但Ｂ３与Ｂ２相差极小，而若选择Ｂ２可较Ｂ３节约资源，并减小 B1 与 B2 相差极小，ＬＣ－６Ａ恒流而若选 择Ｂ２可较Ｂ３节约资源，并减小 B1 可较Ｂ３节约资源，并减小 B2 则乙醇的用量减少，ＬＣ－６Ａ恒流并减小需浓缩的药液体积,大大节约能源，ＬＣ－６Ａ恒流降低成本，ＬＣ－６Ａ恒流 节省时间，ＬＣ－６Ａ恒流而且由方差分析结果可知，ＬＣ－６Ａ恒流3 个因素均影响不显著，ＬＣ－６Ａ恒流故应选择Ｂ２可较Ｂ３节约资源，并减小 A3B1C1，ＬＣ－６Ａ恒流即：ＬＣ－６ＡＨＰＬＣ（ＳＣＬ－６Ａ系统控制器，ＬＣ－６Ａ恒流 醇沉前的浸膏相对密度为 1.20，ＬＣ－６Ａ恒流醇沉后乙醇浓度为 60%，ＬＣ－６Ａ恒流醇沉时间为 12h。经 3 批验证 实验，ＬＣ－６Ａ恒流丹酚酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１ B 的转移率平均为 91.60%，ＬＣ－６Ａ恒流杂质去除率的平均为 41.42%，ＬＣ－６Ａ恒流表明该工艺参 数基本合理可行。 3 讨论 本品为中药复方制剂，ＬＣ－６Ａ恒流药味多，ＬＣ－６Ａ恒流成分复杂。根据各药材的理化性质，ＬＣ－６Ａ恒流将 22 种药材分 成 3 部分，ＬＣ－６Ａ恒流分别采用醇提、水提醇沉的提取方法。 通过正交优化实验，ＬＣ－６Ａ恒流以有效成分转移率和出膏率为评价指标，ＬＣ－６Ａ恒流确定了最佳工艺参数。 经过 3 批验证实验，ＬＣ－６Ａ恒流结果合理可行，ＬＣ－６Ａ恒流且可控性强。 1 仪器与试药 １．１仪器电子天平（ＡＹ１２０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。，ＬＣ－６Ａ恒流ＳＨＡＭＡＯＺＵＣＯＲＰＯＰＡＩＴＩＯＮＪ ＡＰＡＮ）、ＨＨ－６－恒温水浴锅（江苏金坛市宏华仪器厂）、超声波清洗器（２５０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。 Ｗ，ＬＣ－６Ａ恒流上海之信仪器有限公司）、电热鼓风恒温干燥箱（３１０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。Ｗ，ＬＣ－６Ａ恒流上海讯能电热设备有 限公司）、ＵＶ－１８型超声清洗器（昆山０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。紫外可见分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山双Ｂ循环水Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１循环水 式多用真空泵（ＳＨＢ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１－ＩＶ，ＬＣ－６Ａ恒流郑州长城科工贸有限公司）。 １．2 试药葡萄糖标准品Ｓｉｇｍａ公司产品；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山苯酚，ＬＣ－６Ａ恒流硫酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１、丙酮、乙醚、三氯乙酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１、 氢氧化钠试剂均为分析纯，ＬＣ－６Ａ恒流医用乙醇（广州市新升华玻有限公司），ＬＣ－６Ａ恒流苯酚试液参照文献 ［８型超声清洗器（昆山］配制。 鱼腥草购于广州清平市场，ＬＣ－６Ａ恒流经广东药学院陈幼竹博士鉴定为三白草科蕺菜属植物 Houttuyniacordata Ｔｈｕｎｂ． 2 方法与结果 ２．１鱼腥草多糖的提取与精制取鱼腥草干品２０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。ｇ，ＬＣ－６Ａ恒流以９５％乙醇回流脱脂３次，ＬＣ－６Ａ恒流 药渣置通风处晾干，ＬＣ－６Ａ恒流加水１０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。倍量、８型超声清洗器（昆山倍量、８型超声清洗器（昆山倍量，ＬＣ－６Ａ恒流于９０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。～１０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。℃依次提取３，ＬＣ－６Ａ恒流２，ＬＣ－６Ａ恒流 １ｈ，ＬＣ－６Ａ恒流过滤，ＬＣ－６Ａ恒流合并滤液，ＬＣ－６Ａ恒流浓缩至约２０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。ｍｌ，ＬＣ－６Ａ恒流加入等体积３０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。％三氯乙酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１溶液脱蛋白，ＬＣ－６Ａ恒流 ４℃静置，ＬＣ－６Ａ恒流离心，ＬＣ－６Ａ恒流上清液用０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。．０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。１ｍｏｌ／Ｌ的氢氧化钠调ｐＨ＝７，溶液减压浓缩，ｐＨ＝７，ＬＣ－６Ａ恒流溶液减压浓缩，ＬＣ－６Ａ恒流 浓缩液对水透析，ＬＣ－６Ａ恒流透析液减压浓缩至１０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。ｍｌ，ＬＣ－６Ａ恒流加入９５％乙醇调ｐＨ＝７，溶液减压浓缩，含醇量为８型超声清洗器（昆山０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。％，ＬＣ－６Ａ恒流静 置，ＬＣ－６Ａ恒流离心，ＬＣ－６Ａ恒流沉淀用无水乙醇、丙酮、无水乙醚依次洗涤，ＬＣ－６Ａ恒流真空干燥，ＬＣ－６Ａ恒流得除蛋白精制鱼腥草 多糖。 ２．２多糖含量测定方法的建立 ２．２．1 标准品溶液的制备精密称取１０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。５℃干燥至恒重的葡萄糖０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。．０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。９６４ｇ，ＬＣ－６Ａ恒流 加水溶解并定容至１０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。ｍｌ，ＬＣ－６Ａ恒流再取１ｍｌ，ＬＣ－６Ａ恒流定容至１０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。ｍｌ的容量瓶中，ＬＣ－６Ａ恒流即制得浓度为 ０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。．０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。９６４ｍｇ／ｍｌ的葡萄糖对照品贮备液。 ２．２．2 供试品溶液的制备称取鱼腥草５０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。ｇ，ＬＣ－６Ａ恒流按Ｌ９（３４）正交实验表进行实验，正交设计表进行提取，ＬＣ－６Ａ恒流得粗多糖。 称取１０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。５℃干燥至恒重的粗多糖约３０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。ｍｇ，ＬＣ－６Ａ恒流精密称定，ＬＣ－６Ａ恒流置于１０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。ｍｌ量瓶中，ＬＣ－６Ａ恒流加水 溶解并稀释至刻度，ＬＣ－６Ａ恒流摇匀，ＬＣ－６Ａ恒流即得。 ２．２．３标准曲线的绘制精密量取葡萄糖标准品溶液０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。．１，ＬＣ－６Ａ恒流０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。．２，ＬＣ－６Ａ恒流０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。．３，ＬＣ－６Ａ恒流０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。． ４，ＬＣ－６Ａ恒流０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。．５，ＬＣ－６Ａ恒流０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。．６，ＬＣ－６Ａ恒流０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。．７ｍｌ，ＬＣ－６Ａ恒流分别置１０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。ｍｌ具塞试管中，ＬＣ－６Ａ恒流加蒸馏水补充至１．０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。 ｍｌ，ＬＣ－６Ａ恒流摇匀，ＬＣ－６Ａ恒流加５％苯酚溶液１ｍｌ，ＬＣ－６Ａ恒流浓硫酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１５ｍｌ，ＬＣ－６Ａ恒流室温放置４０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。ｍｉｎ。另取１ｍｌ 蒸馏水，ＬＣ－６Ａ恒流加同量苯酚和浓硫酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１，ＬＣ－６Ａ恒流同法操作，ＬＣ－６Ａ恒流作为空白对照。置ＵＶ－１８型超声清洗器（昆山０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。型分光光度 计中，ＬＣ－６Ａ恒流于４９０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。ｎｍ测定吸收度，ＬＣ－６Ａ恒流以吸收度（Ｙ）对葡萄糖含量（Ｘ）进行回归，ＬＣ－６Ａ恒流得回归 方程：ＬＣ－６ＡＨＰＬＣ（ＳＣＬ－６Ａ系统控制器，ＬＣ－６Ａ恒流Y＝９．１０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。７３ X＋０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。．０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。１０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。２，ＬＣ－６Ａ恒流相关系数 r＝０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。．９９９８型超声清洗器（昆山。结果表明葡萄糖 在０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。．０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。１９３～０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。．０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。９６４ｍｇ／ｍｌ范围内呈良好的线性关系。 ２．２．４换算因素的测定精密称取６０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。℃干燥至恒重的鱼腥草多糖１０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。１．２ｍｇ，ＬＣ－６Ａ恒流 置１０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。ｍｌ容量瓶中，ＬＣ－６Ａ恒流加入少量蒸馏水溶解，ＬＣ－６Ａ恒流并稀释至刻度，ＬＣ－６Ａ恒流摇匀，ＬＣ－６Ａ恒流精密量取此液１ｍ ｌ，ＬＣ－６Ａ恒流照标准曲线制备项下的方法测定吸收度，ＬＣ－６Ａ恒流从回归方程中求出多糖供试液中葡萄糖的浓 度。按Ｌ９（３４）正交实验表进行实验，下式计算换算因素：ＬＣ－６ＡＨＰＬＣ（ＳＣＬ－６Ａ系统控制器，ＬＣ－６Ａ恒流F＝W／（C×D）。Ｆ为换算因素；Ｗ为多糖重量（ｍｇ）；为换算因素；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山Ｗ为多糖重量（ｍｇ）；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山 Ｃ为多糖稀释液中葡萄糖的浓度（ｍｇ／ｍｌ）；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山Ｄ为稀释因素。 ２．２．５样品测定方法取各供试品溶液，ＬＣ－６Ａ恒流按Ｌ９（３４）正交实验表进行实验，标准曲线项下方法操作，ＬＣ－６Ａ恒流测定吸收值，ＬＣ－６Ａ恒流 从回归方程中求出供试液中葡萄糖的含量，ＬＣ－６Ａ恒流按Ｌ９（３４）正交实验表进行实验，下式计算样品中多糖含量：ＬＣ－６ＡＨＰＬＣ（ＳＣＬ－６Ａ系统控制器，ＬＣ－６Ａ恒流多糖含量（％） ＝C×D×F×１０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。／W。C 为供试液中葡萄糖的浓度（ｍｇ／ｍｌ）；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山D 为供试液的稀释 因素；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山F 为换算因素，ＬＣ－６Ａ恒流W 为供试样品重量（ｍｇ）。 ２．３正交实验法优化超声波提取鱼腥草多糖最佳工艺 ２．３．1 制定因素水平表根据文献报道［９］并结合实际，ＬＣ－６Ａ恒流超声波提取多糖的影响 因素有超声时间、料液比、醇沉浓度，ＬＣ－６Ａ恒流为此选择Ｂ２可较Ｂ３节约资源，并减小３因素作为考察因素，ＬＣ－６Ａ恒流并结合生产实际，ＬＣ－６Ａ恒流 每因素又选取３个水平，ＬＣ－６Ａ恒流按Ｌ９（３４）正交实验表进行实验，Ｌ９（３４）正交表安排实验，ＬＣ－６Ａ恒流以多糖得率及含量作为衡量提 取效率的双Ｂ循环水重客观指标，ＬＣ－６Ａ恒流优选最佳工艺，ＬＣ－６Ａ恒流为了提高统计分析的可靠性，ＬＣ－６Ａ恒流每一条件下都作了 重复实验（n＝３），ＬＣ－６Ａ恒流测定结果取其平均值供统计分析用。因素水平安排见表１。结果见 表２。 ２．３．2 加权法综合评价鱼腥草多糖提取工艺最佳提取条件要满足多糖得率高并且 含量也高，ＬＣ－６Ａ恒流因此采用加权评分法综合评估鱼腥草多糖提取条件。评分标准为：ＬＣ－６ＡＨＰＬＣ（ＳＣＬ－６Ａ系统控制器，ＬＣ－６Ａ恒流将各项指标 除以该列最大值再乘以１０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。，ＬＣ－６Ａ恒流为其该项得分。通过这样处理，ＬＣ－６Ａ恒流使多糖得率和多糖含量转 化为０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。～１０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。之间的数。根据多糖得率（ｘ）和多糖含量（ｙ）作用，ＬＣ－６Ａ恒流而确定两者的权 重系数分别为０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。．４和０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。．６，ＬＣ－６Ａ恒流对两项指标进行加权求和，ＬＣ－６Ａ恒流通过公式 z＝０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。．４ x＋０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。．６ y，ＬＣ－６Ａ恒流就得到综合评分（ｚ）。加权评分结果及方差分析见表２～３。 表 1 正交因素水平（略） 表 2 正交实验及结果（略） 表 3 方差分析（略） *表示差异显著，ＬＣ－６Ａ恒流F0.10(2,2)=9.00，ＬＣ－６Ａ恒流F0.05(2,2)=19.00 2．３．３结果分析正交实验方差分析表明，ＬＣ－６Ａ恒流因素Ａ（超声时间）对鱼腥草多糖的提 取有显著影响，ＬＣ－６Ａ恒流而因素Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１（料液比）、因素Ｃ（醇沉浓度）对鱼腥草多糖的提取无显著影 响。由Ｒｊ得出影响因素大小顺序为Ａ＞Ｃ＞Ｂ，由此得出最佳工艺为Ａ３Ｂ１Ｃ３，即得出影响因素大小顺序为Ａ＞Ｃ＞Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１，ＬＣ－６Ａ恒流由此得出最佳工艺为Ａ３Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１１Ｃ３，ＬＣ－６Ａ恒流即 鱼腥草料液比１∶３０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。，ＬＣ－６Ａ恒流超声６０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。ｍｉｎ，ＬＣ－６Ａ恒流醇沉浓度为９０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。％。 ２．３．４验证实验按Ｌ９（３４）正交实验表进行实验，照理论最佳工艺Ａ３Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１１Ｃ３，ＬＣ－６Ａ恒流进行重复实验，ＬＣ－６Ａ恒流鱼腥草多糖得 率及多糖含量分别为１４．６１％，ＬＣ－６Ａ恒流１２．２２％，ＬＣ－６Ａ恒流实验结果一致。 ２．４不同提取方法的比较Ｂ３节约资源，并减小 ２．４．１水煎煮提取鱼腥草多糖称取鱼腥草５０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。ｇ，ＬＣ－６Ａ恒流加３０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。倍体积的水，ＬＣ－６Ａ恒流９０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。℃提 取３次，ＬＣ－６Ａ恒流２ｈ／次，ＬＣ－６Ａ恒流过滤，ＬＣ－６Ａ恒流９０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。％乙醇醇沉得粗多糖，ＬＣ－６Ａ恒流分别计算得率和多糖的含量。结果 见表４。 ２．４．２碱法提取鱼腥草多糖称取鱼腥草５０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。ｇ，ＬＣ－６Ａ恒流加０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。．２ｍｏｌ／Ｌ３０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。倍体积 的氢氧化钠水溶液，ＬＣ－６Ａ恒流６５℃恒温水浴中浸提３ｈ，ＬＣ－６Ａ恒流过滤，ＬＣ－６Ａ恒流滤液调ｐＨ＝７，溶液减压浓缩，ｐＨ为中性，ＬＣ－６Ａ恒流９０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。％乙醇 醇沉得粗多糖，ＬＣ－６Ａ恒流分别计算得率和多糖的含量。结果见表４。 ２．４．3 酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１法提取鱼腥草多糖称取鱼腥草５０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。ｇ，ＬＣ－６Ａ恒流加３０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。倍体积的水，ＬＣ－６Ａ恒流调ｐＨ＝７，溶液减压浓缩，ｐＨ＝３，ＬＣ－６Ａ恒流 ６０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。℃浸提３次，ＬＣ－６Ａ恒流３ｈ／次，ＬＣ－６Ａ恒流过滤，ＬＣ－６Ａ恒流滤液调ｐＨ＝７，溶液减压浓缩，ｐＨ为中性，ＬＣ－６Ａ恒流９０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。％乙醇醇沉得粗多糖，ＬＣ－６Ａ恒流分别 计算得率和多糖的含量。结果见表４。 ２．４．4 超声提取按Ｌ９（３４）正交实验表进行实验，该试验所得最佳工艺提取，ＬＣ－６Ａ恒流即称取鱼腥草５０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。ｇ，ＬＣ－６Ａ恒流加３０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。倍体 积的水，ＬＣ－６Ａ恒流超声６０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。ｍｉｎ，ＬＣ－６Ａ恒流过滤，ＬＣ－６Ａ恒流９０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。％乙醇醇沉得粗多糖，ＬＣ－６Ａ恒流分别计算得率和多糖的含量，ＬＣ－６Ａ恒流 结果见表４。 表 4 不同提取方法比较Ｂ３节约资源，并减小（略） 3 讨论 通过实验确定了超声波提取鱼腥草多糖最佳工艺为鱼腥草料液比１∶３０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。，ＬＣ－６Ａ恒流超声６０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。ｍ ｉｎ，ＬＣ－６Ａ恒流醇沉浓度为９０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。％。与水提、酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１提、碱提方法进行比较Ｂ３节约资源，并减小，ＬＣ－６Ａ恒流结果看出超声波提取多糖 得率和含量略低于其它提取方法，ＬＣ－６Ａ恒流但Ｂ３与Ｂ２相差极小，而若选择Ｂ２可较Ｂ３节约资源，并减小提取时间是酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１提法的１／９，ＬＣ－６Ａ恒流水提法的１／６，ＬＣ－６Ａ恒流碱提 法的１／３，ＬＣ－６Ａ恒流大幅度降低成本；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山同时超声提取所得多糖颜色最浅，ＬＣ－６Ａ恒流可降低下一步的脱色纯 化的难度；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山另外超声提取全过程避免了高温加热，ＬＣ－６Ａ恒流从而减少了酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１碱对多糖结构的破坏，ＬＣ－６Ａ恒流所 用仪器简单，ＬＣ－６Ａ恒流操作方便，ＬＣ－６Ａ恒流因此也不失为一种好的提取方法。 鱼腥草目前主要是开发挥发油类成分的制剂如鱼腥草注射液等相关产品，ＬＣ－６Ａ恒流而对于水溶 性多糖以废弃物处理，ＬＣ－６Ａ恒流本实验对鱼腥草多糖的提取工艺研究对于鱼腥草资源的合理充分利 用具有重要的意义。 1 仪器与试剂 1.1 仪器 KQ5200DB 型数控超声波清洗器（超声工作频率 40kHz,江苏省昆山市超声 仪器有限公司）；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山UV-755B 紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山ZF-I 型三用紫 外分析仪(上海顾村光电仪器厂)；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山SHB-III 循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公 司）。 1.2 试剂 95%乙醇；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山亚硝酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１钠 AR；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山硝酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１铝 AR；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山氢氧化钠 AR；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山三氯化铝 AR；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山盐酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１ AR；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山氨水 AR；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山冰醋酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１ AR；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山醋酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１乙酯 AR；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山乙酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１镁 AR；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山镁粉 AR；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山正丁醇 AR；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山芦丁标准 品（中国药品生物制品检定所）；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山新鲜香附（采于广西百色市）。 2 方法与结果 2.1 总黄酮成分提取取新鲜香附，ＬＣ－６Ａ恒流烘干，ＬＣ－６Ａ恒流粉碎。称取香附粉末约 6g，ＬＣ－６Ａ恒流加 80ml95%乙 醇，ＬＣ－６Ａ恒流超声波提取 2.5h，ＬＣ－６Ａ恒流抽滤。滤渣再加 80ml95%乙醇，ＬＣ－６Ａ恒流超声波提取 2.5h，ＬＣ－６Ａ恒流抽滤，ＬＣ－６Ａ恒流合并 两次滤液，ＬＣ－６Ａ恒流减压回收乙醇至滤液仅剩 25ml 左右为止，ＬＣ－６Ａ恒流放置 250ml 容量瓶中，ＬＣ－６Ａ恒流用 60%乙 醇稀释至刻度，ＬＣ－６Ａ恒流得样品液。 2.2 测定方法依据以芦丁为对照品测定香附中总黄酮的含量，ＬＣ－６Ａ恒流加入铝离子试剂，ＬＣ－６Ａ恒流同时 控制适宜 pH 值，ＬＣ－６Ａ恒流使黄酮化合物与铝盐形成络合物，ＬＣ－６Ａ恒流在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。 2.3 定量实验-总黄酮的含量测定 2.3.1 波长的选择Ｂ２可较Ｂ３节约资源，并减小取样品液适量，ＬＣ－６Ａ恒流在 0.30ml5%亚硝酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１钠溶液存在的碱性条件下，ＬＣ－６Ａ恒流经 硝酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１铝显色后，ＬＣ－６Ａ恒流以试剂为空白参比液在 420～700nm 波长范围测定络合物的吸光度，ＬＣ－６Ａ恒流络 合物于 510nm 波长处有最大吸收，ＬＣ－６Ａ恒流故测定时选用此波长。 2.3.2 标准曲线的绘制分别精密吸取芦丁对照液（0.10mg/ ml）0.00，ＬＣ－６Ａ恒流0.50，ＬＣ－６Ａ恒流1.00，ＬＣ－６Ａ恒流2.00，ＬＣ－６Ａ恒流3.00，ＬＣ－６Ａ恒流4.00，ＬＣ－６Ａ恒流5.00ml 于 10.00ml 容量瓶中，ＬＣ－６Ａ恒流分别加 入 5%亚硝酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１钠溶液 0.30ml，ＬＣ－６Ａ恒流摇匀，ＬＣ－６Ａ恒流静置 6min；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山再加 10%硝酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１铝溶液 0.30ml，ＬＣ－６Ａ恒流摇匀，ＬＣ－６Ａ恒流 静置 6min；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山再加 4%氢氧化钠溶液 4.00ml，ＬＣ－６Ａ恒流用 60%乙醇稀释至刻度，ＬＣ－６Ａ恒流摇匀，ＬＣ－６Ａ恒流静置 12min，ＬＣ－６Ａ恒流以试剂作空白参比液，ＬＣ－６Ａ恒流于 510nm 处测吸光度。结果见表 1。 表 1 分光光度法测定芦丁对照液吸光度结果（略） 根据上表得回归方程：ＬＣ－６ＡＨＰＬＣ（ＳＣＬ－６Ａ系统控制器，ＬＣ－６Ａ恒流A=-0.0311+13.5184C，ＬＣ－６Ａ恒流r=0.9999。