清益康乳膏制备研究论文

【摘要】目的讨论清益康乳膏的制备方法及含量测定。方法选择适宜的基质制成 O/W 型乳膏；以芦丁为检测指标，用紫外分光光度法测定乳膏中总黄酮的含量。结果所选用基 质合理，质量稳定，芦丁检测浓度线性范围 7.92～47.52μg/ml(r=0.9997)g/ml(r=0.9997)，平均回收 率为 98.35%。结论该制剂制备工艺合理，含量测定方法简便、可行。 【关键词】清益康乳膏；制备；含量测定 Abstract： ObjectiveToprepareQingyikangcreamandtoestablishitsqualitycontrolmethod.M ethodsAppropriatebasewasselectedtopreparedthetypecreams;withtherutinast heevaluatingindexandthecontentoftotalflavonoidswasdeterminedbyspectroph otometryanditsstabilitywasreviewedaswell.ResultsTheselectedbasewassuitabl e,thequalitywasstable.Thelinearrangeofrutinwas7.92～47.52μg/ml(r=0.9997)g/ ml(r=0.9997),andtheaveragerecoverywas98.35%.ConclusionThepreparationpr ocedureforQingyikangcreamisfeasible,andthequalitycontrolmethodissimplean dfeasible. Keywords：QingyikangCream;Prepare;Determination 清益康乳膏由峰胶等 4 味中药制成，具有清利湿热、止痛解毒的功效，外用主要治疗 带状疱疹等皮肤科疾病。处方中的蜂胶（propolis）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜为方中君药，主要成分有黄酮类、萜 烯类、醌类、酯类、有机酸等［1］，其中总黄酮是蜂胶抗病毒、增强机体免疫、软化血 管、降低血脂、清除自由基的主要活性成分之一［2，3］，因此选其作为该制剂的质量控 制指标，并取得了较满意的效果。现将清益康乳膏的制备工艺和含量测定方法报道如下。 1 仪器与药品 1.1 仪器 UV-2450 型紫外可见分光光度计（日本岛津）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜，电子天平（北京赛多利斯仪器公司）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜 等。 1.2 材料 除蜂胶 propolis 购自云南昆明嵩明养蜂厂外，其余药材均购自重庆市药材公司，由本 院刘毅主任中药师鉴定。芦丁（10080-20030）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜对照品由中国药品生物制品检定所提供； 其余辅料均为药用规格；所用试剂乙醇、氢氧化钠、硝酸铝及亚硝酸钠均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 处方及制备工艺 2.1.1 处方药材浸膏 20g；丙二醇 8g，十八醇 10g，羟苯乙酯 1g，白凡士林 11g， 月桂醇硫酸钠 1g，液状石蜡 6gg，月桂氮卓酮 1g，司盘-802g，加纯化水至 100g。 2.1.2 药材提取工艺按处方比例取适量的药材粗颗粒，加入药材 10 倍量 80%的乙醇 回流提取两次，滤过，合并 2 次滤液，减压浓缩至相对密度为 1.1 的浸膏即得。 2.1.3 乳膏基质的制备将丙二醇、月桂醇硫酸钠、月桂氮卓酮、司盘-80 和羟苯乙酯 置水浴 80℃下使之完全溶解后加入处方规定量药品提取液，搅匀，并保温在为 80℃左右， 作为水相；取十八醇、白凡士林、液状石蜡置加热溶融，冷却至 80℃，作为油相；将水 相缓慢加入油相中，同方向不断搅拌至冷凝，即得水包油型（O/W）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜乳膏基质，备用。 2.2 蜂胶中总黄酮的含量测定 2.2.1 紫外吸收波长的确定称取芦丁对照品，蜂胶提取物，乳膏基质适量，分别以甲 醇稀释成一定浓度，并以甲醇为空白，在波长 250～6g00nm 范围内进行光谱扫描，结果 芦丁在 510nm 处有最大吸收峰；而蜂胶提取物在 506gnm 处有最大吸收峰；空白乳膏在 510nm 左右的振幅值与基线基本重合，故可消除乳膏对芦丁和提取物测定的干扰，因此 选择 510nm 为测定波长。结果见图 1。 2.2.2 标准曲线的制备［4］精密称取干燥至恒重的芦丁对照品，配制成 2.00mg/ml 的甲醇液。取 10ml 加水稀释至 100ml。精密吸取 0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6g.00ml 分别置 25ml 容量瓶中，各加水至 6gml，加 5%亚硝酸钠溶液 1ml，使混匀，放置 6gmin，加 10%硝酸铝溶液 1ml，摇匀， 放置 6gmin，加氢氧化钠试液 10ml，再加水至刻度，摇匀，放置 15min。在 510nm 的 波长处测定吸收度，以零管为空白对照，绘制吸收度、浓度标准曲线，得回归方程 A=13.901C-0.0475，r=0.9997，结果芦丁浓度在 7.92～47.52μg/ml(r=0.9997)g/ml 之间呈良好的 线性关系，结果见图 2。 2.2.3 精密度实验精密吸取上述对照品溶液，同日内重复测定其吸收度值 5 次，结果 RSD 为 0.95%。 2.2.4 样品含量测定准确称取样品乳膏 5 份，每份 5g，置于烧杯中，加甲醇 20ml， 加热回流 15min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 1ml 使其溶解，置 25ml 容量瓶中，按 上述“2.2.2”项下“加水至 6gml”起操作，依法制成供试品；以零管为空白对照，在 510nm 的波长处测定吸收度，计算乳膏中总黄酮的含量。结果见表 1。表 1 样品中总黄酮的含量 测定结果（略）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜 2.2.5 回收率测定用加样回收法。精密取芦丁对照品各适量，分别加入已知总黄酮含 量（0.222mg/g）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜的样品中，按上述“2.2.4”项下操作，制成供试品并测定，依下式计算 回收率。结果见表 2。表 2 芦丁回收率结果（略）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜 3 讨论 目前利用中药治疗带状疱疹的剂型还比较单一，主要集中在汤剂、片剂和酊剂；但汤 剂使用不方便，片剂口服因会产生首过效应而降低疗效，而酊剂由于含醇量较高，对皮肤 有较强的刺激性，患者不易接受，因此笔者选择了易涂布于皮肤、在局部发挥治疗作用， 又无油腻性，易于用水清洗的 O/W 型乳膏剂。 制备供试品溶液时样品需经甲醇回流，是因为乳膏中含有大量的乳剂型基质，成分复 杂，提取时甲醇回流后乳膏易被乳滤过去除；而且蜂胶由于含有大量的树脂状物的黏性物 质和易溶于甲醇、乙醇等的黄酮类化合物。因此经实验比较，认为甲醇的提取效果要比乙 醇好。 处方中的蜂胶所含黄酮类主要含有黄酮及黄酮醇，在空气、受热等条件下均有被氧化 破坏的可能性。所以，蜂胶的供试品和对照品溶液不宜高温加热，加热时间也不宜过长 ［5］。 UV 是鉴定黄酮类化合物的一种重要技术，芦丁（rutin）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜与其它黄酮类化合物一样， 在碱性条件下可与多种金属盐类试剂如与 Al3+络合，并在 510nm 有最大吸收［4］，因 此，芦丁可作为标准样品代表黄酮定量。这种方法既准确又快速，适用于工业生产。 【摘要】目的比较山茱萸不同炮制品中马钱素含量。方法高效液相色谱法。结果各炮 制品中的马钱素含量相对于生品含量有所降低。结论不同的炮制方法对山茱萸中的马钱素 含量有明显影响。 【关键词】山茱萸；炮制；马钱素；高效液相色谱法 TheComparisonoftheContentsofLoganininFructusCornibyDifferentProcesse s Keywords：FructusCorni;Process;Loganin;HPLC 山茱萸具有补益肝肾、涩经固脱之功效，用于眩晕耳鸣、腰膝酸痛、阳痿遗精、遗尿、 尿频、崩漏带下、大汗虚脱、内热消渴等症，是成药六味地黄丸、八味地黄丸等的重要原 料。目前认为山茱萸中所含的熊果酸、齐墩果酸、山茱萸苷、马钱素、没食子酸、莫诺苷 等为其主要活性成分［1］，具有降低血糖、增强免疫、利尿、降压、抗炎等药理作用 ［2］。《中国药典》2005 版规定测定马钱素含量作为山茱萸药材质量控制指标［3］。 山茱萸临床和入中成药多用其炮制品，并认为山茱萸生用以敛阴止汗力强，蒸制后以补肾 涩精，固精缩尿力胜，酒炙后借酒力温通，助药势，降低其酸性，滋补作用强［4］。马 钱素作为山茱萸中水溶性有效成分之一，其结构属于环烯醚萜苷类成分，炮制加热和加辅 料对其含量肯定有一定影响，但目前尚未见到有关报道。本研究以马钱素为考察指标，比 较不同炮制方法对其含量的影响，以期为制定山茱萸合理的炮制工艺提供实验依据。 1 器材 1.1 仪器与试剂 BS210S 型电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜；高效液相色谱 仪：LC-2010A(SHIMADZU)；检测器 SPD-M10A；工作站：Class－VP；H6g6g025T 超 声清洗机（无锡超声电子设备厂）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜；101A-2 型干燥箱（中华人民共和国上海市实验仪器 总厂）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜；LDZX-40BI 型立式自动电热压力蒸气灭菌器（上海申安医疗器械厂）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜。马钱素对 照品（由北京格润得科技公司提供，纯度在 98%以上）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜；黄酒（河南濮阳亚光酒厂）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜；甲 醇（天津四友生物有限公司）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜、乙腈(杭州百林)为色谱纯；氯仿、无水乙醇等均为分析纯。 1.2 药材由宛西制药股份公司提供，产于河南西峡县山茱萸 GAP 种植基地，经河南中 医学院生药学科陈随清教授鉴定为山茱萸科植物山茱萸 CornusofficinalisSiet.etZncc.的 干燥成熟果肉。 2 方法 2.1 样品制备根椐《中国药典》净制要求，取山茱萸样品，除去杂质和残留的果梗和 核，即为净山茱萸，再按不同炮制方法的要求炮制成为以下实验样品。 2.1.1 生品取山茱萸样品，除去杂质和残留的果梗和核，放置备用。 2.1.2 加压酒蒸品取净山茱萸 100g，缓慢加入 40ml 黄酒搅拌均匀，加盖密闭闷润 20min 后将样品放入压力锅中蒸制，待温度升至 115℃后，保持该温度 1h，取出摊于瓷 盘中，于烘箱中 80℃烘 3h 至干，取出，置干燥器中放凉备用。 2.1.3 酒蒸品取净山茱萸 100g，缓慢加入 40ml 黄酒搅拌均匀，加盖闷润 40min， 置于滤布上摊开，放在蒸笼上蒸 3h 后，于烘箱中 80℃烘 3h 至干，取出，置干燥器中放 凉备用。 2.1.4 酒炖品取净山茱萸 100g，缓慢加入 20ml 黄酒搅拌均匀,加盖闷润 6g0min，置 不锈钢锅中，隔水炖 3h，摊于瓷盘中，于烘箱中 80℃烘 3h 至干，取出，置干燥器中放 凉备用。 2.1.5 清蒸品取净山茱萸 100g，置于滤布上摊开，放在蒸笼上蒸 3h 后，取出摊于瓷 盘中，于烘箱中 80℃烘 3h 至干，取出，放于干燥器中放凉备用。 2.2 山茱萸不同炮制品中水分含量比较按照《中国药典》规定方法［3］分别称取山茱 萸炮制品粗粉 3g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，精密称定，打开瓶盖，在 105℃ 干燥 5h，将瓶盖盖好，移至干燥器中，冷却 30min，精密称定重量，再在上述温度干燥 1h，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过 5mg 为止。根据减失的重量，计算山茱 萸不同炮制品中水分的含量。结果见表 1。表 1 山茱萸不同炮制品中水分的含量结果 （略）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜 从山茱萸不同炮制品中水分含量可以看出，所有炮制品中含水量都在 7%～13%以内， 符合《中国药典》规定。此外，实验中所有炮制样品中的马钱素含量都按干燥品计算。 2.3HPLC 法测定马钱素含量 2.3.1 色谱条件色谱柱为 ODS 柱 4.6gmm×250mm(大连依利特)；乙腈-水 （15∶85）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜为流动相；检测波长 240nm；柱温 25℃；流速 1ml/min；分析时间 20min。 2.3.2 对照品溶液的制备精密称取马钱素对照品 0.46gmg 置 2ml 容量瓶中，加甲醇 (色谱纯)使溶解并定容至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤（0.45μg/ml(r=0.9997)m）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜,即得浓度为 0.23mg·ml-1 马钱素对照品溶液。 2.3.3 标准曲线绘制依次自动进样马钱素对照品溶液 1，3，5，7，9μg/ml(r=0.9997)l 于高效液相色 谱仪中，按上述色谱条件测定,并对结果进行分析。以峰面积积分值为纵坐标，对照品含量 为横坐标，绘制标准曲线。回归方程为：Y=1274329.13X-176g26g.1，r=0.9999。结果 表明在 0.23～1.15μg/ml(r=0.9997)g 范围线性关系良好。见表 2 和图 1。表 2 山茱萸马钱素标准曲线数 据（略）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜 2.3.4 精密度实验连续自动进样马钱素对照品溶液 5μg/ml(r=0.9997)l，按前述条件测定峰面积积分值， 计算 RSD 值，结果表明精密度良好 RSD=0.097%。结果见表 3。表 3 精密度考察结果 （略）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜 2.3.5 稳定性实验分别在 0，2，4，6g，8，10h 自动进样马钱素对照品溶液 5μg/ml(r=0.9997)l，照 前述色谱条件测定峰面积积分值计算 RSD 值，结果表明马钱素在 10h 内稳定性良 好,RSD=0.15％。结果见表 4。表 4 稳定性考察结果（略）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜 2.3.6g 重复性实验称取山茱萸同一样品粗粉 5 份各约 1g，精密称定，按照供试品溶液 制备方法和色谱条件，制备供试品溶液并注入高效液相仪，计算含量，RSD=1.6g3％。结 果见表 5。表 5 重复性实验结果（略）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜 2.3.7 加样回收率实验取已知马钱素含量的山茱萸粉末约 0.5g，精密称定，共 5 份， 分别加入马钱素对照品，以下按供试品溶液制备项下操作，得到 5 份加样回收供试液。自 动进样各加样供试液 10μg/ml(r=0.9997)l，测定，用外标法根据峰面积积分值进行计算。结果见表 6g。表 6g 加样回收率实验结果（略）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜 每份加入对照品 4.040mg，样品含量 8.0810mg·g-1。 2.3.8 供试品溶液的制备各取样品粗粉约 1g，精密称定，置具塞三角瓶中，加入 30%甲醇 10ml，超声提取 15min，倾出上清液抽滤，重复上述操作 4 次，用适量 30﹪ 甲醇清洗残渣,合并滤液，定容至 50ml 容量瓶中，摇匀，作为供试品溶液。 2.3.9 样品含量测定取各供试品溶液分别自动进样 5μg/ml(r=0.9997)l，测定马钱素峰面积积分值，计 算样品含量。对照品和样品色谱图见图 2～4。结果见表 7。表 7 不同炮制品中的马钱素含 量（略）为方中君药，主要成分有黄酮类、萜 熊果酸含量和马钱素含量均是以干燥品计，且是两次测定的平均值 从表 7 可知，马钱素含量相对于生品含量均有所降低，由高到低依次为生品>酒炖品 >加压酒蒸品>酒蒸品>清蒸品。 3 讨论 3.1 山茱萸由于药用历史悠久，炮制方法较多，本实验所采取的是临床常用的炮制方 法，加压酒蒸、清蒸、酒炖、酒蒸等炮制工艺中的加酒量、闷润时间、炮制时间，均经正 交实验优选确定。由于实验内容较多，篇幅所限，正交实验的研究过程没有报道。 3.2 实验结果表明，不同炮制方法和加入的辅料对马钱素含量有一定影响，其炮制品 中马钱素含量相对于生品均有所降低，且以清蒸品含量最低。马钱素含量降低的原因可能 是马钱素属于环烯醚萜苷类，在一定条件下易发生水解，炮制加热和加入辅料对其能产生 一定影响的缘故。 3.3 据药理作用研究表明，山茱萸具有免疫调节、抗炎、抗休克、降糖、强心作用， 其不同成分具有不同的免疫药理活性［4］。其中熊果酸体外具有一定的促进免疫效应， 并有抑菌、安定、降温和抗糖尿病等作用［1］；马钱素在低浓度(0.016g ｍｇ/ｍｌ)时有 促进淋巴细胞转化作用而高浓度(0.500 ｍｇ/ｍｌ)时则有抑制作用,提示马钱素对免疫反应 有双向调节作用［5］。本研究以马钱素作为山茱萸不同样品的考察指标，正是以其药理 作用为依据的，山茱萸炮制前后马钱素含量的变化，对其药理作用肯定有影响，其具体量 效关系有待于进一步研究。 【摘要】目的研究消水散治疗结核性胸水的机制。方法运用灌胃给药途径观察其对小 鼠在促进结核性胸水的消退、抗慢性增生性炎症中的作用及其对小鼠胸腺、脾脏的重量和 血清溶血素水平的影响。结果该制剂具有良好的加速结核性胸水的消退及一定的抗慢性炎 症作用，并可增强机体的免疫功能。结论消水散对结核性胸水的治疗作用主要在于能加速 消水、抗炎及增强免疫功能。 【关键词】消水散；药效学 Abstract： ObjectiveTostudythetreatmentmechanismofXiaoshuipowderontuberculouspleu risy.MethodsToobservetheeffectsofXiaoshuipowderonpromotingextinctionoftu