妇月康胶囊中阿魏酸含量测定论文

【摘要】目的建立妇月康胶囊中阿魏酸的含量测定方法。方法采用 HPLC 法， uBondapakC18(4.0mm×250mm)柱，甲醇5%冰醋酸溶液（22∶78）为流动相，检测 波长 322nm。结果阿魏酸在 0.0725～0.2900μgg 范围内浓度与峰面积积分值呈良好的线 性关系，r=0.9999(n=5)。平均回收率 99.46%，RSD 为 1.26%。结论该法简便、灵敏、 准确，可用于妇月康胶囊的质量控制。 【关键词】高效液相色谱法妇月康胶囊阿魏酸 DeterminationofFerulicAcidinFuyuekangCapsule Abstract： ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationofferulicacidinFuyuekangCap sules.MethodsHPLCmethodwasusedinthequantitativeanalysisusingauBondapa kC18(4.0mm×250mm)column.Themobilephasewasmethylalcohol5%glacialaceticacid(22∶78)anddetectingwavelengthwas322nm.ResultsThecali brationcurvewaslinearintherangeof0.0725～ 0.2900μggforferulicacid(r=0.9999,n=5).Theaveragerecoverywas99.46%andRS Dwas1.26%.ConclusionThismethodissimple,sensitive,accurateandavailablefort hequalitycontrolofFuyuekangCapsules. Keywords：HPLC；FuyuekangCapsule；Ferulicacid 妇月康胶囊是由当归、川芎、甘草（炙）、干姜（炭）、益母草、等 8 味中药组成， 其主要功能为活血、祛淤、止痛。用于产后恶露不行，少腹疼痛，也可试用上节育环后引 起的阴道流血，月经过多。当归为本方的君药之一，且当归、川芎的有效成分均为阿魏酸。 故选择阿魏酸作为控制该产品质量的定量指标，通过高效液相色谱法建立其含量测定方法。 1 仪器与试药 Model2000 二元高压梯度高效液相色谱系统（美国 SSI 公司），包括 Model500 型 紫外/可见可变波长检测器，LaballianceInstrumentSeriesⅣPump，阿魏酸对照品（中 国药品生物制品检定所，含量测定用批号 07739809），妇月康胶囊（自制），水为重 蒸馏水，甲醇为色谱纯，冰醋酸等均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件色谱柱：uBondapakC18(4.0mm×250mm)；流动相：甲醇5%冰醋 酸溶液（22∶78）；检测波长：322nm；流速：1.0ml/min；柱温：25℃；进样量： 10μgl。 2.2 对照品溶液的制备 取阿魏酸对照品适量，精密称定，用甲醇制成每毫升含阿魏酸 14.5μgg 的溶液。 2.3 供试品溶液的制备 取本品内容物约 4.0g，精密称定，加甲醇甲酸（95∶5）溶液 40ml，超声处理 30min，放冷，滤过，用少量甲醇甲酸（95∶5）溶液分次洗涤容器和残渣，洗液滤过， 合并滤液，70℃水浴上蒸干，残渣加 30ml 水溶解，加盐酸调节 pH 值至 2～3，用乙醚 提取 5 次，30ml/次，合并乙醚液，挥干，残渣用甲醇溶解，移置 10ml 量瓶中，并稀释 至刻度，摇匀，即得。 2.4 线性关系考察 分别精密吸取阿魏酸对照品溶液 5.0，7.5，10.0，12.5，15.0，20.0μgl 进样，按上 述色谱条件测定，以对照品量（X）为横坐标，峰面积值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线， 得阿魏酸回归方程：Y=3317067X＋11069.7（r=0.9999）。阿魏酸在 0.0725～ 0.2900μgg 范围内与峰面积呈良好的线性关系。 2.5 精密度实验 精密吸取阿魏酸对照品溶液 10μgl，重复进样 5 次，测定峰面积值，RSD=1.43%，小 于 2%。 2.6 重现性实验取同一批号的样品 5 份，分别按上述方法测定含量。结果见表 1。表 1 重现性实验结果（略） 2.7 稳定性实验精密吸取同一供试品溶液,分别于 0，1，2，4，8h 后进样 10μgl，测 定阿魏酸峰面积，结果表明,供试品溶液在 8h 内稳定性良好,RSD 为 1.15%。 2.8 阴性对照实验 按照本品处方，取当归、川芎外的其余药材，按制备工艺要求，制成不含当归、川芎 的胶囊内容物，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液并测定。阴性溶液色谱中，与对 照品相应的位置上无干扰，见图 1。 2.9 回收率实验精密称取已知含量的样品 5 份，分别精密加入等量的阿魏酸对照品， 按供试品溶液制备方法制备并测定。结果见表 2。表 2 回收率测定结果（略） 2.10 样品测定依法测定样品 4 批次。结果见表 3。表 3 样品测定结果（略） 3 讨论［1，2］ 本实验经对阿魏酸对照品溶液进行紫外扫描发现,在 322nm 处有最大吸收,故选择 322nm 作为测定波长。通过对乙腈-0.085%磷酸溶液（17∶83）、乙腈-2%冰醋酸 （20∶80）、甲醇-5%冰醋酸(25∶85)等多种流动相进行比较实验,发现甲醇-5%冰醋酸溶 液(22∶78)的系统分离效果最好,且柱效高,故选择本系统为流动相。制备供试品溶液选择提 取溶媒时，曾对甲醇、甲醇-甲酸（95∶5）、醋酸乙酯和水进行了比较，其中用水提取，在 乙醚萃取时乳化现象严重，干扰测定。其余三种则以甲醇-甲酸（95∶5）提取效率最高,故 提取溶剂选择甲醇-甲酸（95∶5）溶液。但甲醇-甲酸（95∶5）提取液颜色较深干扰测定， 故本研究在此基础上，结合阿魏酸的理化性质，又进行初步纯化，用乙醚萃取。对萃取次 数及超声提取 20～40min 的结果进行比较,结果表明,超声 30min,萃取 5 次，阿魏酸即可 提取完全。 【摘要】目的确定高良姜配方颗粒的最佳制备工艺，建立高良姜配方颗粒中桉油精的 含量测定方法。方法采用水蒸气蒸馏法提取高良姜药材中的挥发油，设计 L9（34）正交 实验确定最佳挥发油包合工艺，将水提液浓缩干燥与包合物制成配方颗粒，采用气相色谱 法，FID 检测器测定配方颗粒中桉油精的含量。结果将药材加水 10 倍量提取 5h，收集提 取液和挥发油。挥发油最佳包合工艺：挥发油与 β-环糊精比例为 1∶9，包合温度为 45℃， 包合时间为 1h。含量测定中回归方程为 y=26354x-0.0404，r=0.9998，平均回收率为 100.72%，RSD 为 2.58%(n=5)。结论高良姜配方颗粒的制备工艺稳定可行，评价指标 可靠、合理。 【关键词】高良姜配方颗粒；桉油精；挥发油；气相色谱法 Abstract： ObjectiveTooptimizethepreparationprocessofAlpiniaofficiarumformulagranules andestablishadeterminationmethodofeucalyptolintheformulagranules.Methods Thevolatileoilwasextractedwithsteamdistillationmethodandincludedwithβ cycl odextrintoavoiditsvolatilization.Thegranulewaspreparedbymixingthewaterextr acts,volatileoilandstarch.Thecontentofeucalyptolinthegranulewasdeterminedw iththeGCmethod.ResultsTheoptimumextractionconditionwasasfollows:thecrud edrugwasextractedwith10timesamountofwaterfor5hourstocollectthevolatileoil. TheoptimalinclusionconditionselectedbytheL9（34）orthogonaldesignwasasfol lows,theratioofvolatileoiltoβcyclodextrinwas1:9（ml/ g）,theinclusiontimewas1handthetemperatureoftheinclusionwas45℃.Theregr essionequationwasy=26354x0.0404，r=0.9998.Theaveragerecoverywas100. 72%andRSDwas2.58%.ConclusionThepreparationprocessofAlpiniaofficiarumfor mulagranulesisstableandfeasible.TheGCmethodforqualitycontrolisaccurateand suitable. Keywords：Alpiniaofficiarum;Formulagranules;Eucalyptol;Volatileoil;GC 高良姜是姜科山姜属植物高良姜 AlpiniaofficiarumHance 的干燥根茎，主产于福建、 台湾、广东、广西、海南、云南等地，具有温胃散寒、消食止痛的功效，临床常用于治疗 脘腹冷痛、胃寒呕吐、嗳气吞酸等病症［1］。现代药理研究表明高良姜具有较强的镇痛 止呕［2］、抗溃疡、利胆、抗腹泻［3］、抗菌［4］、抗氧化［5］、抗癌［6］等作用。 高良姜配方颗粒是高良姜饮片经提取、浓缩、干燥、制粒等工序制成的单味中药配方 颗粒剂。将传统的高良姜饮片改变为颗粒剂，可以有效地去除植物纤维等无活性成分，增 加稳定性，易储存，服用方便。配方颗粒以其生产自动化，生产条件恒定，人为因素小等 优势被广泛应用于临床。如黄连配方颗粒，无论批号是否相同，其盐酸小檗碱的含量都在 测定要求范围之内［7］。目前，关于高良姜配方颗粒的制备工艺和含量测定未见报道， 本文采用气相色谱法控制颗粒中的桉油精的含量。现报道如下。 1 仪器与试药 Agilent6820 气相色谱仪（美国安捷伦公司）；KQ218 型超声清洗器昆山市超声仪 器有限公司；DZG401 电热真空干燥箱天津天宇实验仪器公司；SartoriusBS210S 型电 子天平天津奥特赛恩斯仪器有限公司。 高良姜饮片（由天津中药饮片厂提供），符合《中国药典》2005 年版要求；桉油精 对照品（批号 110748200507）购于中国药品生物制品检定所。正己烷，环已酮为色谱 纯，乙醇、β环糊精，淀粉等其它试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 高良姜配方颗粒挥发油提取工艺取高良姜 200g，加 10 倍量水提取，用挥发油测 定器收集（轻油法）挥发油，每隔 1h 量取挥发油的体积，考察提取时间与出油率的关系， 结果见表 1。从表 1 中可知，前 5h 出油已达总量的 95.1%。因此提取时间为 5h。表 1 提 取时间的考察（略） 2.2 高良姜挥发油的 β环糊精的包合 2.2.1 挥发油包合工艺正交实验设计预实验结果表明，挥发油与 β环糊精的比例 （A）、包合温度（B）、包合时间（C）是影响包合结果的主要因素。在此基础上设计 L9(34)正交实验，以包合物的产率和挥发油的包合率为指标，对包合工艺的各参数进行考 察，因素水平设计见表 2。表 2 因素水平（略） 2.2.2 挥发油包合物产率的考察称取一定量的 β环糊精，按照正交实验的各因素水平 搭配顺序加入一定量的蒸馏水，加热使溶解制成 2%的溶液，于恒温磁力搅拌器上搅拌至 规定的温度，缓缓滴加挥发油乙醇溶液，边加边搅拌至规定时间，放冷，置冰箱冷藏 24h，抽滤，继用 10ml 石油醚(30～60℃)洗涤，40℃干燥 3h，研碎得包合物，计算包 合物产率。实验结果见表 3。 由表 4 方差分析可知，挥发油与 β环糊精的比例对包合物产率的显著性影响因素，而 包合温度和包合时间对包合物产率无显著影响。 2.2.3 挥发油包合率的考察为了考察不同条件下包合效果的优劣，以挥发油包合率为 指标，分析包合产物中所含有的挥发油量。 挥发油包合率＝(V1+V2)/V×100%；V1－从包合物中回收得到的挥发油量（从包合物中回收得到的挥发油量（ml）； V2－从包合物中回收得到的挥发油量（空白回收实验中挥发油的损失量（ml）；V－从包合物中回收得到的挥发油量（挥发油投料量（本实验中为 1ml）。 由方差分析表 4，可看出挥发油与 β环糊精的比例是影响挥发油包合率的显著性因素， 包合温度和包合时间对挥发油包合率则无显著性影响。 表 3 正交实验 L9(34)方案和数据处理% 表 4 方差分析 由包合物的产率和挥发油的包合率两项分析指标可以看出，设定适当的挥发油与 β环 糊精的比例是包合产物质量优劣的重要因素。根据包合率的直观分析可见 A3 均值远高于 A2 和 A1，根据包合物收得率的直观分析可见 A2 均值高于 A3 和 A1，综合考虑，选择挥 发油与 β环糊精比例为 1∶9 最为合适。包合温度和包合时间都是非显著性影响因素，结合 直观分析和成本选择 B2C1。因此，最佳包合工艺为 A3B2C1。 为验证最佳工艺，重复 3 次实验，得到平均包合率为 89.9%，平均挥发油包合率为 88.8%，证明上述包合工艺可靠。 2.3 高良姜配方颗粒的制备以高良姜配方颗粒优选后的工艺，即取高良姜饮片 500g， 加 10 倍量水，微沸提取 5h，同时收集提取液和挥发油。对挥发油按照最佳包合工艺包合、 干燥、研碎，备用。将提取液减压浓缩得干浸膏，真空干燥，按照干浸膏和淀粉质量比为 1∶1 的比例加入辅料，混匀，加入 75%乙醇适量制成软材，软材过 14 号筛制成颗粒， 60℃下真空干燥 24h。然后再按照药材中原有的比例添加挥发油包合物，混匀，即得高良 姜配方颗粒。 2.4 高良姜配方颗粒的定性鉴别 2.4.1 供试品溶液的制备取高良姜配方颗粒约 0.5g，精密称定，置挥发油提取器中加 水 200ml，并在挥发油提取器内水液面上加约 2ml 正己烷提取 2h，得到含油正已烷定容 至 5ml，得供试品溶液。 2.4.2 对照药材溶液的制备取高良姜对照药材 5g，按 2.5.4 项下“供试品溶液的制备” 方法，同法制成对照药材溶液。 2.4.3 阴性对照溶液的制备按照配方颗粒处方比例取淀粉、β环糊精和药材的水提物 浸膏，按供试品溶液制备方法进行制备，作为阴性对照溶液。 2.4.4 薄层层析鉴别按照薄层色谱法（附录ⅥⅥ B）试验，吸取阴性对照品溶液，挥发 油，上述供试品溶液和对照药材溶液各 10μgl，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以甲苯醋醋 酸乙酯（19∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 5%香草醛硫酸溶液，在 105℃加热 至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应得位置上，显相同颜色的斑点。 2.5 高良姜配方颗粒的含量测定 2.5.1 气相色谱条件 色谱柱：HP5 弹性石英毛细管(30m×0.32mm，0.25μgm)；程序升温条件：初始温 度 50℃，保持 1min，以 10℃·minmin 升至 180℃，再以 20℃·minmin 升至 210℃，保持 1min；载气 N2；进样口温度为 220℃，FID 检测器温度 250℃，进样 1.4μgl。 2.5.2 对照品溶液制备 精密称定桉油精对照品，用正己烷溶解，制成 14.096mg/ml 的溶液。 2.5.3 内标溶液的制备 精密称定环已酮，用正己烷溶解，制成 15.654mg/ml 的溶液。 2.5.4 供试品溶液的制备 取高良姜配方颗粒约 0.5g，精密称定，置挥发油提取器中加水 200ml，并在挥发油 提取器内水液面上加约 2ml 正已烷提取 2h，置含油正已烷溶液于容量瓶中，精密加内标 溶液 1.10ml，定容至 10ml，摇匀，作为供试品溶液。 2.5.5 线性关系考察 分别取对照品溶液 100,140,180,220,260μgl，各加内标液 150μgl，定容至 5ml，进 行气相测定。以桉油精量为横坐标，以桉油精峰面积/内标物蜂面积为纵坐标，绘制标准曲 线，得到标准曲线方程为 y=26354x-0.0404，r=0.9998。 2.5.6 精密度实验 取线性关系中的第 5 份样品连续进样 5 次，测得 RSD 为 0.76%(n=5)。校正因子平 均值为 0.8280。 2.5.7 重现性实验