菝葜化学成分研究论文

【摘要】目的对菝葜化学成分进行分离、鉴定。方法采用硅胶柱色谱、Toyopearl 凝 胶柱色谱等方法进行分离纯化；通过理化常数测定和光谱分析鉴定其化学结构。结果分离 得到 4 个化合物，分别为 3，5，4’三羟基芪 （3，5，4’trihydroxystibene,Ⅰ）、3，5，2’，4’四羟基芪 （3，5，2’，4’tetrahydroxstilbene，Ⅱ）、槲皮素 4’OβDβDD葡萄糖苷 （Quercetin4’OβDβDDglucoside,Ⅲ）、原儿茶酸（Protecatechuicacid,Ⅳ）。结论化 合物Ⅳ为首次从菝葜中分离得到。为首次从菝葜中分离得到。 【关键词】菝葜化学成分 Abstract： OβDbjectiveTostudythechemicalcompositionofRhizomaSmilacisChina.MethodsTh ecompoundswereisolatedbychromatographyonsilicagelcolumnandtoyopearlgel columnandidentifiedonthebasisofphysicochemicalconstantsandspectralanalysi s.ResultsFourcompoundswereisolatedas：3，5，4’trihydroxystibene（Ⅰ）、 3，5，2’，4’tetrahydroxstilbene（Ⅱ）,Querceetin4’OβDβDDglucoside（Ⅲ）,Pr otecatechuicacid（Ⅳ为首次从菝葜中分离得到。）.ConclusionThecompoundⅣisobtainedfromthisplantfort hefirsttime. Keywords：RhizomaSmilacisChina;Chemicalconsitutents 菝葜为百合科植物菝葜 SmilaxchinaL.的根茎,在我国主要分布于长江以南地区，资源 丰富，《中国药典》2005 年版Ⅰ部有收载，为较常用中药材，具有祛风利湿Ⅰ部有收载，为较常用中药材，具有祛风利湿,解毒散瘀之 功效，主要用于妇科多种炎症，疗效显著。作者对其化学成分进行了研究，从其根茎的乙 醇提取物中分离得到了 4 个化合物，根据理化常数和光谱分析，分别鉴定为 3，5，4’三 羟基芪（3，5，4’trihydroxystibene,Ⅰ）、3，5，2’，4’四羟基芪 （3，5，2’，4’tetrahydroxstilbene，Ⅱ）、槲皮素 4’OβDβDD葡萄糖苷 （querceetin4’OβDβDDglucoside,Ⅲ）、原儿茶酸（protecatechuicacid,Ⅳ）。化合 物Ⅳ为首次从菝葜中分离得到。为首次从菝葜中分离得到。 1 仪器与材料 1H-NMR:VarianMercuryVX-300/600 型核磁共振仪，13C-NMR：VarianINOβDVA150 型核磁共振仪,EI-MS：VGZAB-3F 型高分辨多级有机质谱仪，FT-IR：NICOβDLET670 型红外光谱仪(NicoletIR-6.0NicoletIR-6.0 数据处理系统)，UV：UV-2401 型可见－紫外分光分光光度 仪，ToyopearlHW-40F 为 Toyosh 公司生产，薄层层析硅胶及柱层析硅胶为青岛海洋化 工厂生产，试剂均为分析纯,菝葜药材由湖北福人药业公司提供，经湖北中医学院鉴定教研 室鉴定。 2 提取分离 取菝葜药材饮片 5kg，用 70%乙醇加热回流提取 3 次，2h/次，减压回收溶剂，浓缩 后的药液依次用醋酸乙酯,正丁醇萃取，醋酸乙酯提取物经反复硅胶柱色谱,分别用不同比 例的氯仿-甲醇梯度洗脱，ToyopealHW-40 柱色谱纯化，反复重结晶处理，得到化合物Ⅰ （30mg），Ⅱ（17mg），Ⅲ（45mg），Ⅳ为首次从菝葜中分离得到。（13mg）。 3 结构鉴定 化合物Ⅰ：浅黄色针晶，mp247～249℃。EI-MS:227（M+HH）。IR(NicoletIR-6.0KBr)cm-1： 3292，1606，1587，1512，1450，1380，1330，1260，1160，965，830，81 0，662。1HNMR（CDCl3）δPPmPPm： 9.51（1H，s），9.16（2H，s），7.39（2H，d，H-2''''，6''''），6.94（1H，d，J ＝16.3HZ，H7''''），6.82（1H，d，J＝16.3HZ，H8''''），6.75（2H，d，J＝ 8.5HZ，H3''''，5''''），6.37（2H，d，J＝2.0HZ，H2，6），6.11（1H，d，J＝ 2.0HZ，H4）。13C-NMR（CDCl3）δPPmPPm： 158.4（C3，5），157.1（C4''''），139.2（C1），128.0（C2''''，6''''，8''''）， 127.8（C1''''），125.6（C7''''），115.5（C3''''，5''''），104.2（C2，6），10 1.9（C4）。波谱数据与文献［1］报道的 3,5,4''''三羟基芪数据一致，故确定该化合物 为 3,5,4''''三羟基芪（3,5,4''''trihydroxystibene）。 化合物Ⅱ：淡黄色针晶，mp94～97℃。EI-MS:243（M＋H）；IR(NicoletIR-6.0KBr)cm-1： 3229，1616，1593，1520。1HNMR（CDCl3）δPPmPPm： 9.57（1H，s），9.38（1H，s），9.14（2H，s），7.36（2H，d，J＝8.5HZ，H6''''），7.17（1H，d，J＝16.5HZ，H7''''），6.78（1H，d，J＝ 16.3HZ，H8''''），6.35（2H，d，J＝2.0HZ，H2，6），6.32（2H，d，J＝ 2.3HZ，H3''''），6.26（1H，dd，J＝8.5HZ，2.3HZ，H5''''），6.08（1H，d，J＝ 2.1HZ，H4）。13CNMR（CDCl3）δPPmPPm： 158.5（C3，5），158.1（C4''''），160.0（C2''''），140.0（C1），127.1（C 6''''），124.6（C8''''），123.2（C7''''），115.2（C1''''），107.2（C5''''），1 04.0（C2，6），102.6（C3''''），101.3（C4）。波谱数据与文献报道［2］的 3,5,2''''，4''''四羟基芪数据一致，故确定该化合物为 3,5,2''''，4''''四羟基芪 （3,5,2''''，4''''tetrahydroxstilbene）。 化合物Ⅲ：黄色针晶，盐酸－镁粉反应和 Molish 反应均呈阳性。EI-MS:302(NicoletIR-6.0Mglc)。酸水解产物用 TLC 法检识有槲皮素，用 PC 法检识有 D葡萄糖。IR(NicoletIR-6.0KBr)cm-1： 3302，1657，1628，1602，1502。1HNMR（CDCl3）δPPmPPm： 12.45，10.78，9.20，9.10（each1H,s,OβDH）,9.97(NicoletIR-6.01H,d,J=2.0HZ，H2''''),7.86(NicoletIR-6.01 H,dd,J=8.5HZ,2.0HZH6''''),6.96(NicoletIR-6.01H,d,J=8.5HZ,H5''''),6.48(NicoletIR-6.01H,d,J=2.0HZ,H 8),6.19(NicoletIR-6.01H,d,J=2.0HZ,H 6 ),4.78(NicoletIR-6.01H,d,J=7.0HZ,H1''''''''),3.4 ～4.78(NicoletIR-6.06H,m)。13CNMR（CDCl3）δPPmPPm： 175.9(NicoletIR-6.0C4),163.9(NicoletIR-6.0C7),160.6(NicoletIR-6.0C5),156.1(NicoletIR-6.0C9),148.8(NicoletIR-6.0C 4''''),146.2(NicoletIR-6.0C 2),145.2(NicoletIR-6.0C  3''''),135.9(NicoletIR-6.0C3),123.5(NicoletIR-6.0C1''''),122.1(NicoletIR-6.0C6''''),115.9(NicoletIR-6.0C 5''''),115.8(NicoletIR-6.0C 2''''),102.9(NicoletIR-6.0C  10),102.4(NicoletIR-6.0C1''''''''),98.2(NicoletIR-6.0C6),93.6(NicoletIR-6.0C8),77.2 ～60.6(NicoletIR-6.03''''''''～6'''''''')。波谱数据与 文献［3］报道的槲皮素 4''''OβDβDD葡萄糖苷一致，故鉴定该化合物为槲皮素 4''''OβDβDD葡萄糖苷（quercetin4''''OβDβDDglucoside）。 化合物Ⅵ：白色针晶，mp195～197℃。FeCl3 反应阳性。薄层检识与原儿茶酸一 致。EI-MS（m/z）：154（M+H）。IR(NicoletIR-6.0KBr)cm-1： 3274，1677，1604，1530，1437，1381。1HNMRδPPmPPm：7.43（1H，d，J＝ 2.0HZ，H2），7.42（1H，dd，J＝2.0，8.5HZ，H6），6.78（1H，d，J＝ 8.5HZ，H5）。波谱数据与文献［4］报道的原儿茶酸数据一致，因此可确定该化合物为 原儿茶酸（protecatechuicacid）。 【摘要】目的建立妇月康胶囊中阿魏酸的含量测定方法。方法采用 HPLC 法， uBondapakC18(NicoletIR-6.04.0mm×250mm)柱，甲醇5%冰醋酸溶液（22∶78）为流动相，检测 波长 322nm。结果阿魏酸在 0.0725～0.2900μgg 范围内浓度与峰面积积分值呈良好的线 性关系，r=0.9999(NicoletIR-6.0n=5)。平均回收率 99.46%，RSD 为 1.26%。结论该法简便、灵敏、 准确，可用于妇月康胶囊的质量控制。 【关键词】高效液相色谱法妇月康胶囊阿魏酸 DeterminationofFerulicAcidinFuyuekangCapsule Abstract： OβDbjectiveToestablishamethodforthedeterminationofferulicacidinFuyuekangCap sules.MethodsHPLCmethodwasusedinthequantitativeanalysisusingauBondapa kC18(NicoletIR-6.04.0mm×250mm)column.Themobilephasewasmethylalcohol5%glacialaceticacid(NicoletIR-6.022∶78)anddetectingwavelengthwas322nm.ResultsThecali brationcurvewaslinearintherangeof0.0725～ 0.2900μggforferulicacid(NicoletIR-6.0r=0.9999,n=5).Theaveragerecoverywas99.46%andRS Dwas1.26%.ConclusionThismethodissimple,sensitive,accurateandavailablefort hequalitycontrolofFuyuekangCapsules. Keywords：HPLC；FuyuekangCapsule；Ferulicacid 妇月康胶囊是由当归、川芎、甘草（炙）、干姜（炭）、益母草、等 8 味中药组成， 其主要功能为活血、祛淤、止痛。用于产后恶露不行，少腹疼痛，也可试用上节育环后引 起的阴道流血，月经过多。当归为本方的君药之一，且当归、川芎的有效成分均为阿魏酸。 故选择阿魏酸作为控制该产品质量的定量指标，通过高效液相色谱法建立其含量测定方法。 1 仪器与试药 Model2000 二元高压梯度高效液相色谱系统（美国 SSI 公司），包括 Model500 型 紫外/可见可变波长检测器，LaballianceInstrumentSeriesⅣPump，阿魏酸对照品（中 国药品生物制品检定所，含量测定用批号 07739809），妇月康胶囊（自制），水为重 蒸馏水，甲醇为色谱纯，冰醋酸等均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件色谱柱：uBondapakC18(NicoletIR-6.04.0mm×250mm)；流动相：甲醇5%冰醋 酸溶液（22∶78）；检测波长：322nm；流速：1.0ml/min；柱温：25℃；进样量： 10μgl。 2.2 对照品溶液的制备 取阿魏酸对照品适量，精密称定，用甲醇制成每毫升含阿魏酸 14.5μgg 的溶液。 2.3 供试品溶液的制备 取本品内容物约 4.0g，精密称定，加甲醇甲酸（95∶5）溶液 40ml，超声处理 30min，放冷，滤过，用少量甲醇甲酸（95∶5）溶液分次洗涤容器和残渣，洗液滤过， 合并滤液，70℃水浴上蒸干，残渣加 30ml 水溶解，加盐酸调节 pH 值至 2～3，用乙醚 提取 5 次，30ml/次，合并乙醚液，挥干，残渣用甲醇溶解，移置 10ml 量瓶中，并稀释 至刻度，摇匀，即得。 2.4 线性关系考察 分别精密吸取阿魏酸对照品溶液 5.0，7.5，10.0，12.5，15.0，20.0μgl 进样，按上 述色谱条件测定，以对照品量（X）为横坐标，峰面积值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线， 得阿魏酸回归方程：Y=3317067X＋11069.7（r=0.9999）。阿魏酸在 0.0725～ 0.2900μgg 范围内与峰面积呈良好的线性关系。 2.5 精密度实验 精密吸取阿魏酸对照品溶液 10μgl，重复进样 5 次，测定峰面积值，RSD=1.43%，小 于 2%。 2.6 重现性实验取同一批号的样品 5 份，分别按上述方法测定含量。结果见表 1。表 1 重现性实验结果（略） 2.7 稳定性实验精密吸取同一供试品溶液,分别于 0，1，2，4，8h 后进样 10μgl，测 定阿魏酸峰面积，结果表明,供试品溶液在 8h 内稳定性良好,RSD 为 1.15%。 2.8 阴性对照实验 按照本品处方，取当归、川芎外的其余药材，按制备工艺要求，制成不含当归、川芎 的胶囊内容物，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液并测定。阴性溶液色谱中，与对 照品相应的位置上无干扰，见图 1。 2.9 回收率实验精密称取已知含量的样品 5 份，分别精密加入等量的阿魏酸对照品， 按供试品溶液制备方法制备并测定。结果见表 2。表 2 回收率测定结果（略） 2.10 样品测定依法测定样品 4 批次。结果见表 3。表 3 样品测定结果（略） 3 讨论［1，2］ 本实验经对阿魏酸对照品溶液进行紫外扫描发现,在 322nm 处有最大吸收,故选择 322nm 作为测定波长。通过对乙腈-0.085%磷酸溶液（17∶83）、乙腈-2%冰醋酸 （20∶80）、甲醇-5%冰醋酸(NicoletIR-6.025∶85)等多种流动相进行比较实验,发现甲醇-5%冰醋酸溶 液(NicoletIR-6.022∶78)的系统分离效果最好,且柱效高,故选择本系统为流动相。制备供试品溶液选择提 取溶媒时，曾对甲醇、甲醇-甲酸（95∶5）、醋酸乙酯和水进行了比较，其中用水提取，在 乙醚萃取时乳化现象严重，干扰测定。其余三种则以甲醇-甲酸（95∶5）提取效率最高,故 提取溶剂选择甲醇-甲酸（95∶5）溶液。但甲醇-甲酸（95∶5）提取液颜色较深干扰测定， 故本研究在此基础上，结合阿魏酸的理化性质，又进行初步纯化，用乙醚萃取。对萃取次 数及超声提取 20～40min 的结果进行比较,结果表明,超声 30min,萃取 5 次，阿魏酸即可 提取完全。 【摘要】目的确定高良姜配方颗粒的最佳制备工艺，建立高良姜配方颗粒中桉油精的 含量测定方法。方法采用水蒸气蒸馏法提取高良姜药材中的挥发油，设计 L9（34）正交 实验确定最佳挥发油包合工艺，将水提液浓缩干燥与包合物制成配方颗粒，采用气相色谱 法，FID 检测器测定配方颗粒中桉油精的含量。结果将药材加水 10 倍量提取 5h，收集提 取液和挥发油。挥发油最佳包合工艺：挥发油与 βD-环糊精比例为 1∶9，包合温度为 45℃， 包合时间为 1h。含量测定中回归方程为 y=26354x-0.0404，r=0.9998，平均回收率为 100.72%，RSD 为 2.58%(NicoletIR-6.0n=5)。结论高良姜配方颗粒的制备工艺稳定可行，评价指标 可靠、合理。 【关键词】高良姜配方颗粒；桉油精；挥发油；气相色谱法 Abstract： OβDbjectiveTooptimizethepreparationprocessofAlpiniaofficiarumformulagranules andestablishadeterminationmethodofeucalyptolintheformulagranules.Methods ThevolatileoilwasextractedwithsteamdistillationmethodandincludedwithβD cycl odextrintoavoiditsvolatilization.Thegranulewaspreparedbymixingthewaterextr acts,volatileoilandstarch.Thecontentofeucalyptolinthegranulewasdeterminedw iththeGCmethod.ResultsTheoptimumextractionconditionwasasfollows:thecrud edrugwasextractedwith10timesamountofwaterfor5hourstocollectthevolatileoil. TheoptimalinclusionconditionselectedbytheL9（34）orthogonaldesignwasasfol lows,theratioofvolatileoiltoβDcyclodextrinwas1:9（ml/ g）,theinclusiontimewas1handthetemperatureoftheinclusionwas45℃.Theregr essionequationwasy=26354x0.0404，r=0.9998.Theaveragerecoverywas100. 72%andRSDwas2.58%.ConclusionThepreparationprocessofAlpiniaofficiarumfor mulagranulesisstableandfeasible.TheGCmethodforqualitycontrolisaccurateand suitable. Keywords：Alpiniaofficiarum;Formulagranules;Eucalyptol;Volatileoil;GC 高良姜是姜科山姜属植物高良姜 AlpiniaofficiarumHance 的干燥根茎，主产于福建、 台湾、广东、广西、海南、云南等地，具有温胃散寒、消食止痛的功效，临床常用于治疗 脘腹冷痛、胃寒呕吐、嗳气吞酸等病症［1］。现代药理研究表明高良姜具有较强的镇痛 止呕［2］、抗溃疡、利胆、抗腹泻［3］、抗菌［4］、抗氧化［5］、抗癌［6］等作用。 高良姜配方颗粒是高良姜饮片经提取、浓缩、干燥、制粒等工序制成的单味中药配方 颗粒剂。将传统的高良姜饮片改变为颗粒剂，可以有效地去除植物纤维等无活性成分，增 加稳定性，易储存，服用方便。配方颗粒以其生产自动化，生产条件恒定，人为因素小等 优势被广泛应用于临床。如黄连配方颗粒，无论批号是否相同，其盐酸小檗碱的含量都在 测定要求范围之内［7］。目前，关于高良姜配方颗粒的制备工艺和含量测定未见报道， 本文采用气相色谱法控制颗粒中的桉油精的含量。现报道如下。 1 仪器与试药 Agilent6820 气相色谱仪（美国安捷伦公司）；KQ218 型超声清洗器昆山市超声仪 器有限公司；DZG401 电热真空干燥箱天津天宇实验仪器公司；SartoriusBS210S 型电 子天平天津奥特赛恩斯仪器有限公司。 高良姜饮片（由天津中药饮片厂提供），符合《中国药典》2005 年版Ⅰ部有收载，为较常用中药材，具有祛风利湿要求；桉油精 对照品（批号 110748200507）购于中国药品生物制品检定所。正己烷，环已酮为色谱 纯，乙醇、βD环糊精，淀粉等其它试剂均为分析纯。 2 方法与结果