女贞子油提取研究论文

【摘要】目的建立从女贞子中提取脂肪油的方法，并预测该脂肪油的稳定性。方法分 别运用传统法和超声技术提取女贞子油，并采用初均速法预测女贞子油的稳定性。结果超 声技术提取的出油率为 17.55%；其稳定性在 293KK 时为 t0.9=0.76 年，t0.8=1.61 年， t0.7=2.57 年。结论用超声技术提取女贞子油，可以提高提取率；女贞子油具有较高的稳 定性。 【关键词】女贞子油超声技术稳定性 Abstract： ObjectiveToextractthefattyoilfromLigustrumlucidumait.andtoassayitsstability. MethodsOilwasextractedbyultrasonictechnologyandtraditionaltechnology.Thes tabilitywasassayedbyfirstevenspeedmethod.ResultsExtractionrateofoilextractedbyultrasonictechnologywas1 7.55%,itsstability:t0.9=0.76y，t0.8=1.61y，t0.7=2.57.ConclusionUltrasonicte chnologycanimproveextractionrateofoilinLigustrumlucidumait.,andtheoilinLigu strumLucidumaitisstable. Keywords：Ligustrumlucidumait.；Ultrasonictechnology；Stability 女贞子又名冬青子，系木犀科常绿乔木女贞 LigustrumlucidumAit.的干燥成熟果实， 性味甘，微苦，凉，具有滋补肝肾、明目乌发的功能，临床主要用于治疗眩晕耳鸣，腰膝 酸软，须发早白，目暗不明，失眠多梦及急性菌痢，慢性支气管炎等多种疾病［1］。据 文献报道女贞子中含有大量油脂，女贞子油中脂肪酸的主要成分为油酸、亚油酸、棕榈酸 和亚麻酸等，种子油中不饱和脂肪酸（PUFA）含量达含量达 87.179%［2］，PUFA 是人体必 需脂肪酸，具有重要的生物活性和药用价值，自从 20 世纪 70 年代丹麦 Dyerbeg 教授发 表了爱斯基摩人具有较低的冠心病发病率及死亡率的流行病学报告以后，大量基础及临床 研究表明，多不饱和脂肪酸特别是二十碳五烯酸（EPA）含量达和二十二碳六烯酸（DHA）含量达具有 明确的降低胆固醇（TG）含量达的作用，并可升高高密度脂蛋白（HDL-C）含量达,抑制血小板聚集， 从而可以预防各种心脏疾病［3K］；多不饱和脂肪酸中的 γ-亚麻酸（GLA）含量达已被确认对 40 多种肿瘤细胞有抑制作用，对类风湿性关节炎、肠炎、脉管炎、肾炎等多种炎症具有疗效 或改善作用。GLA 和其系列代谢物在免疫系统、心血管系统、生殖系统和内分泌系统中都 具有重要的生理效应，其潜在的药用及临床价值受到广泛的关注。我们分别采用冷浸法、 索氏提取法及超声技术［4］提取了女贞子中的脂肪油，并参照有关文献［5］，采用初均 速法［6］预测了该脂肪油的稳定性。现将结果报道如下。 1 仪器与试剂 1.1 仪器 RE-52A 旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）含量达；GOA-型电热真空干燥箱（天 津市东郊机械加工厂）含量达；DL-720 超声波仪（45kHz±5%）含量达；ZWA-型阿贝折光仪（石家 庄光学仪器厂）含量达；DR-HW-1 电热恒温水浴箱（北京西城区医疗器械厂）含量达；索氏提取器一 套。 1.2 试剂女贞子购于张家口市医药公司，于硅胶干燥器中干燥 2d 后备用；石油醚 （3K0～60℃）含量达，乙醚，无水 Na2SO4，均为 AR 级。 2 方法与结果 2.1 女贞子油的提取 2.1.1 索氏提取法提取女贞子油精密称取干燥女贞子 10g，2 份，于索氏提取器中， 分别以 100ml 石油醚和乙醚为溶剂进行回流提取，提取至经检验无油迹为止。用旋转蒸 发器减压挥尽溶剂，用无水 Na2SO4 脱水干燥，得金黄色女贞子油（较混浊）含量达，在真空干 燥器中干燥至恒重。计算收率。结果见表 1。 2.1.2 冷浸法提取女贞子油精密称取样品 10g，用 3K00ml 石油醚室温浸泡样品 3K 次， 用 100ml/次溶剂，浸泡时间为 12h/次，合并提取液，以下同“2.1.1”项处理，所得脂肪油 澄清透明。结果见表 1。 2.1.3K 超声法提取女贞子油精密称取样品 10g，用 50ml/次石油醚为溶剂进行超声提 取 3K0min，共提取两次，合并提取液，以下同“2.1.1”项处理，所得脂肪油澄清透明。结 果见表 1。表 1 女贞子油的收率（略）含量达 2.2 采用正交实验设计以确定最佳超声提取条件 2.2.1 实验因素水平表设计实验选择溶剂用量、提取时间、提取次数 3K 个因素为考察 对象，根据初步实验，每个因素确定 3K 个水平，采用 L9 正交表安排实验。结果见表 2。表 2 因素水平表（略）含量达 2.2.2 正交实验精密称取样品 10g，以石油醚为溶剂，按正交表进行实验，称重并计 算产率。结果见表 3K。 从表 3K 中数据可以看出，最佳提取条件为 A2B2C3K，即用 50ml 溶剂，提取 20min/ 次，共提取 3K 次。但 A2B1C2 与之很接近，为操作上的方便，我们采用了后者，即用 50ml 溶剂，超声提取 3K0min/次，共提取 2 次。表 3K 正交实验结果（略）含量达 2.3K 女贞子油稳定性实验 2.3K.1 女贞子油的恒温加速破坏实验精密量取女贞子油 1.0ml 于 5ml 的具塞试管中， 分别于恒温槽中经不同温度及对应时间（见表 4）含量达进行恒温加速破坏，到时间后，立即取 出冷却至室温，终止反应的进行。 2.3K.2 女贞子油折光率的测定取阿贝折光仪，用蒸馏水校正零点，用乙醚-丙酮棉球擦 洗干净，待挥发干后，分别测定经破坏实验后的脂肪油的折光率数值。结果见表 4。室温 下的折光率为 1.4750。表 4 脂肪油的折光率（略）含量达 2.3K.3K 数据处理以(lnVi+10)lnVi+10)所得数值为 Y，以 1T×1000 所得数值为 X。实验中 5 个 不同温度对应 5 个点，结果见表 5。表 5 破坏实验结果（略）含量达 将上述数据进行线性回归，得回归方程为 Y=-21.019X+70.699，r=-0.997。根据 Arrhenius 公式 lnki=A-EaRT，求出 Ea=174762.48J/mol；用外推法求得 293KK 时的 k=1.608×10-5h-1，根据一级反应动力学方程求出反应掉 10%，20%，3K0%时所需要 的时间分别为 t0.9=0.76 年，t0.8=1.61 年，t0.7=2.57 年。通过留样观察，结果与恒 温加速破坏实验结果一致。 3K 讨论 由表 1 数据可以看出，提取溶剂以石油醚的提取率较高，原因可能是石油醚的极性比 乙醚小，因而提取脂溶性物质的能力比乙醚强。从表 1 数据还可以看出，在女贞子油的提 取过程中，超声技术与传统方法相比，节省了溶剂，缩短了提取时间，简化了提取操作步 骤，提高了出油率。原因是超声波的空化作用，以及超声波的许多次级效应，如机械振动、 乳化、扩散粉碎等，有利于样品中有效成分的转移，同时，超声技术应用于有效成分的提 取是在常温常压下进行的，避免了高温对有效成分的破坏，所以，超声技术特别适合于富 含 PUFA 的油脂的提取。 通过正交实验，确立了超声提取女贞子油的最佳条件，用 50ml 石油醚超声提 取,3K0min/次，提取 2 次即可。 通过恒温加速破坏实验，采用初均速法预测了女贞子油的稳定性，因为油脂在空气中 放置过久会发生酸败，颜色加深，密度增大，折光率增大，并与留样观察结果相一致，说 明采用折光率的变化来预测该脂肪油的稳定性的方法是可行的。该方法所用仪器简单，操 作方便，数据处理结果线性关系良好。 【摘要】目的探讨厚朴的体外抑菌作用。方法用 KBB 纸片扩散法。100%厚朴浸出液 滤纸片对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、甲型链球菌、 乙型链球菌抑菌作用进行研究。结果厚朴对以上细菌均有明显抑菌作用。结论厚朴在体外 有明显的抑菌作用。 【关键词】厚朴体外抑菌 AbstractObjectiveTostudytheinvitrogrowthinhibitoryeffectofMORonbacteria.MethodsKBpaperdispersionmethodwasusedandthepaperwaspresoakedwith100%MORwa terextract.WeobservedtheinhibitoryeffectofcircularfilterpaperpiecesofMORonSt aphylococcusaureus,Staphylococcusepidermidis，P.aeruginosa，E.coli，S.typ hi，α-hemolyticstreptococcus，βhemolyticstreptococcus.ResultsTheherbhadobviouseffectofgrowthinhibitionon bacteria.ConclusionMORhassignificanteffectofgrowthinhibitioninvitroonbacteri a. KeywordsEuphorbiahumifusaWilld.(lnVi+10)MOR)；Invitrogrowthinhibition 厚朴为木兰科落叶乔木植物厚朴 MagnoliaofficinalisRehd．etWils．或凹叶厚朴 M．officinalisRehd．etWils．var．bilobaRehd．etWils．的干皮、根皮及枝皮 ［1］。主产于四川广元、荥经、丰都、城口，湖北恩施、宜昌、利川，浙江龙泉、遂昌， 福建浦城、松溪，湖南衡阳、彬县等地，江西、广西、甘肃、陕西等地也有出产，以四川、 湖北所产者量大质优，野生与栽培均有。主要功效：行气，燥湿，消积，平喘。为观察中 药厚朴的体外抑菌作用，对其进行了相关的抑菌实验研究，旨在为临床应用厚朴提供理论 依据。 1 材料 金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、甲型链球菌、乙 型链球菌，均购于中国药品生物制品检定所。营养琼脂培养基，购于北京海淀区微生物培 养基制品厂。游标卡尺、规格（0～150）含量达mm×0.02mm，安徽桐城量具厂生产。 2 方法 2.1 药液的制备 厚朴购于滨州医学院附属医院中药房。取厚朴 50g，加水 500ml，文火煎煮 1h，去 渣浓缩为 50ml（浓度 100%）含量达备用。 2.2 操作方法 2.2.1 普通培养基的制备［2，3K］ 将金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌分别用取菌环致 密接种到普通营养培养基表面，以无菌操作将含厚朴浸出液的直径 0.4cm 的滤纸片贴到培 养基上，3K7℃培养 24h 观察测量抑菌环直径。 2.2.2 血平板培养基的制备［2］ 在普通营养琼脂培养基础上高压消毒后，冷却至 56℃时加上 5%～10%无菌脱纤维 绵羊血混匀，倒入培养皿中制备。 2.2.3K 抑菌实验 将甲型链球菌，乙型链球菌用取菌环分别致密接种到血平板营养基上后，以无菌操作 将含厚朴浸出液的直径 0.4cm 的滤纸片贴到培养基上后，3K7℃培养 24h 观察测量抑菌环 直径。 3K 结果 厚朴对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、乙型链球 菌均有明显的抑菌作用。结果见表 1。表 1 厚朴的抑菌作用（略）含量达 4 讨论 从表 1 可以看出，厚朴对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、伤 寒杆菌、乙型链球菌均有明显抑菌作用。现代研究表明［1］，厚朴具有松弛肌肉、降低 血压、抑制中枢系统、抗病原微生物的作用。体外实验中，厚朴对葡萄球菌、溶血性链球 菌、肺炎球菌、百日咳杆菌等革兰氏阳性菌以及炭疽杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒 杆菌、霍乱弧菌、大肠杆菌、变形杆菌、枯草杆菌等革兰氏阴性菌均有抗菌作用。本次实 验证明厚朴有明显的抑菌作用，为临床应用提供了科学依据。 【摘要】目的建立控制肝愈胶囊的质量标准。方法对肝愈胶囊中主要成分丹参、栀子、 黄柏、黄芪、五味子进行了薄层色谱鉴别；采用高效液相色谱法测定黄芩苷的含量。结果 薄层色谱法可以对该制剂中的丹参、栀子、黄柏、黄芪、五味子作出准确鉴别；黄芩苷的 线性范围为 0.12～0.58μgg，r=0.9997，平均加样回收率为 99.06，RSD 为 1.40(lnVi+10)n=5)。结论方法灵敏、简便、重现性好，可作为该制剂的质量标准。 【关键词】肝愈胶囊黄芩苷薄层色谱高效液相色谱 Abstract:ObjectiveToestablishthequalitystandardforGanyuCapsule.Method sRadixSalviaeMiltiorrhiae,FructusGardeniae,CortexPhellodendri,RadixAstragali andFructusSchisandraewereidentifiedbyTLC.BaicalinwasdeterminedbyHPLC.Re sultsTLCspotsdevelopedwerefairlyclear,andtheblanktestshowednointerference .Baicalinshowedagoodlinearrelationshipintheconcentrationrangeof0.1168～ 0.5840μgg，andtheaveragerecoverywasupto99.06%,RSDwas1.4%.ConclusionT hemethodisaccurate,reproducibleandsimple.Itcanbeusedasthequalitycontrolof thispreparation. Keywords:GanyuCapsule;Baicalin;TLC;HPLC 肝愈胶囊由黄芩、丹参、栀子、黄柏、黄芪、五味子等中药组成，具有清热解毒、益 气活血的功效。主治气阴两虚型肝炎。为控制本品的内在质量，本实验采用 TLC，HPLC 等方法对其进行质量标准研究。 1 仪器与试药 Waters600EB2487 型高效液相色谱仪﹙美国﹚；Millennium 色谱工作站数据处理 系统﹙美国﹚；BP211D 电子天平﹙德国﹚。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均 为分析纯。黄芩苷﹙715B9908﹚供含量测定用，纯度 99.02%﹚、丹参酮 Ⅱ А﹙0766B9903K﹚、栀子苷﹙0749B9806﹚、盐酸小檗碱﹙713KB9813K﹚、黄芪甲苷 ﹙0781B9806﹚、五味子乙素﹙0765B9706﹚，对照品均购自中国药品生物制品检定所。 肝愈胶囊 3K 批样品：040105，040108，040111﹙自制﹚。硅胶 G﹙青岛海洋化工厂﹚。 2 方法与结果 2.1 薄层鉴别 2.1.1 丹参的鉴别［1］ 取本品内容物 3Kg，研细，加乙醚 20ml，超声处理 20min，滤过，滤液挥干，残渣加 醋酸乙酯 1ml 使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材粗粉 1g 和按处方量从中除去 丹参药材的阴性对照品粗粉 4g，分别同法制成对照药材溶液和阴性对照液。再取丹参酮Ⅱ A 对照品，加醋酸乙酯制成每毫升含 0.5mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法实验 ［1］，吸取上述 4 种溶液各 6μgl,分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以苯-醋酸乙酯﹙19∶1﹚ 为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点，而阴性对照色谱在相应的位置上无此斑点。见图 1。 2.1.2 栀子的鉴别［1］ 取本品内容物 3Kg，加乙醇 20ml，超声处理 20min，滤过，滤液浓缩至约 2ml，作 为供试品溶液。另取栀子对照药材粗粉 1g 和按处方量从中除去栀子的阴性对照品粗粉 3Kg，分别加乙醇 10ml 和 20ml,同法制成对照药材溶液和阴性溶液。再取栀子苷对照品， 加乙醇制成每毫升含 2mg 的溶液，作为对照品溶液。吸取上述溶液各 5μgl，分别点于同一 以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶 G 薄层板上，以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水﹙5∶5∶1∶1﹚为 展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液，在 105℃加热至斑点显色清晰。 供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，而阴性对照 色谱中无相应的斑点。见图 2。 2.1.3K 黄柏的鉴别 取本品内容物 2g，加甲醇 20ml,超声处理 20min，滤过，滤液浓缩至 2ml，作为供 试品溶液。另取黄柏对照药材粗粉 0.2g 和按处方量从中除去黄柏的阴性对照品粗粉 2g， 分别加甲醇 10ml 和 20ml,加热回流提取 15min，过滤，滤液浓缩至干，各加 1ml 甲醇 使溶解，分别作为对照药材溶液和阴性对照溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每 毫升含 0.5mg 的溶液，作为对照品溶液。吸取上述溶液各 3Kμgl,分别点于同一以羧甲基纤