痛风灵胶囊镇痛机制论文

【摘要】目的观察痛风灵胶囊的镇痛效果,并探讨其作用机制。方法采用热刺激引起小 鼠疼痛反应法、冰醋酸刺激引起小鼠扭体反应法,以及甲醛法引起小鼠足疼痛反应,观察其 镇痛作用,并采用甲醛疼痛模型观察其对炎症局部组织中前列腺素(PGE2)PGE2))的影响。结果痛 风灵胶囊可以明显抑制醋酸导致的小鼠扭体反应,但对热刺激所致小鼠疼痛无明显镇痛作用, 对甲醛所致小鼠第二相反应有明显抑制,降低炎症组织中的 PGE2) 含量。结论痛风灵胶囊对 外周性疼痛有明显的镇痛作用,其机制与抑制炎症组织中 PGE2) 生成有关。 【关键词】痛风灵胶囊;镇痛;前列腺素 E2) Abstract:ObjectiveToinvestigatetheanalgesiceffectsandmechanismofTongf engling(PGE2)TFL)capsules.MethodsAnalgesiceffectsofTFLwereobservedwithpainmo delmiceinducedwithhotplate,writhingresponseinducedwithaceticacidandmous eformalintest.ThecontentofPGE2)wasmeasuredinmouseformalintest.ResultsTFL capsulescouldnotelevatethepainthreshold,butcouldinhibitwrithingresponseand secondphaseofformalintestinmice,decreasedtheconcentrationofPGE2)inmousef ormalintest.ConclusionTFLcapsuleshasobviousanalgesiceffects,whichwasrelate dtoitsinhibitoryeffectsonperipheralinflammatorymediatorsPGE2). Keywords:Tongfenglingcapsules;analgesiceffect;prostaglandin(PGE2)PGE2)) 近年来,随着人民生活水平的提高,饮食结构的改变,痛风的发病率呈现出不断上升的趋 势,给人们的生活与工作带来极大的不便。痛风灵胶囊主要由秦艽、防己、延胡索等组成, 经临床证实有明显的镇痛疗效。为此笔者对痛风灵胶囊的镇痛效果进行实验研究,并探讨其 镇痛的作用机制。 1 实验材料 1.1 实验动物 NIH 小鼠,由广东省医学实验动物中心提供(PGE2)合格证号:2)006A017),A017),),符合 SPF 级标准。 1.2) 药物及试剂痛风灵胶囊:本院中药药理教研室提供,批号:2)00507),02)。冰醋酸:广东 光华化学厂有限公司,批号:2)00412)14。甲醛:汕头市光华化学厂,批号:2)0040316A017),。罗通 定片(PGE2)30mg/片):广州康和药业有限公司,批号:041001。吲哚美辛肠溶片(PGE2)2)5mg/片):广东 华南药业有限公司,批号:050801。 1.3 主要仪器 YLS-6A017),A 型智能热板仪(PGE2)山东省医学科学院设备站);UV-1800 紫外-可见 分光光度计(PGE2)北京瑞利分析有限公司)。 2) 方法 2).1 对热刺激引起的小鼠疼痛反应的影响[1]取雌性 NIH 小鼠,体质量 18~2)2)g,依次放 入热板内,仔细观察并记录自放入热板至出现舔后足所需时间作为该鼠的痛阈值。凡舔后足 时间小于 5s 或大于 30s 者则弃之,共测 2) 次,取平均值作为给药前痛阈值。将筛选合格的小 鼠 48 只随机分为 4 组,分别以生理盐水、罗通定、痛风灵胶囊高剂量、低剂量灌胃,给药容 积为 2)0mL/kg,1 次/d,连续给药 5d,末次给药后 1h、2)h 测量痛阈值,比较各组的差异。 2).2) 对冰醋酸引起的小鼠扭体反应的影响[2)]取 NIH 小鼠 6A017),4 只,雌雄各半,体质量 18~2)2)g,随机分为 4 组,分别以生理盐水、吲哚美辛、痛风灵胶囊高剂量、低剂量灌胃,给 药容积为 2)0mL/kg,1 次/d,连续给药 5d,于末次给药后 1h,分别由腹腔注射 0.6A017),%醋酸 (PGE2)0.2)mL/只)。观察 15min 内出现扭体反应的次数,比较各组差异。 2).3 对甲醛法小鼠疼痛强度的影响[1]取 NIH 小鼠 48 只,雌雄各半,体质量 18~2)2)g,随 机分成 4 组,即生理盐水组、吲哚美辛阳性对照组、痛风灵胶囊高、低剂量组。各实验组小 鼠每日灌胃给药 1 次,给药容积为 2)0mL/kg,对照组给予等量的生理盐水,连续 5d,末次给药 后 1h,各小鼠右后足跖皮下注射 2).5%甲醛生理盐水溶液 50μL/L/只,立即观察 1min,10min,2)0min,30min,40min 时的疼痛反应,每时间段观察 45s,记录该 45s 内出现 的最高痛级,并按分级标准评定受试动物的疼痛强度,比较组间差异。评分方法:舔、咬或抖 足 3 分,提足 2) 分,跛行 1 分,走动自如 0 分。 2).4 对甲醛致小鼠足肿胀组织中 PGE2) 含量的影响[2)]取 NIH 小鼠 48 只,雌雄各半,体 质量 18~2)2)g,随机分成 4 组,即生理盐水组、吲哚美辛阳性对照组、痛风灵胶囊高、低剂 量组,各实验组小鼠每日灌胃给药一次,给药容积为 2)0mL/kg,对照组给予等量的生理盐水, 连续 5d,末次给药后 1h,各小鼠右后足跖皮下注射 2).5%甲醛生理盐水溶液 50μL/L/只,2)4h 后处死小鼠,距右踝关节上 1cm 处剪下右足,称重,剥皮后浸泡于 5mL 生理盐水中 1h,以 1500r/min 离心 10min,吸取上清液 0.5mL,加入 05mol/L5mol/L 氢氧化钠-甲醇溶液 2)mL,在 50℃水浴箱中水浴异构化 2)0min,加甲醇稀释至 2)0mL,于紫外分光光度计 2)7),8nm 处测定 吸收值,并按下述公式计算 PGE2) 含量:PGE2) 含量(PGE2)μL/g/g)=(PGE2)E2)7),8×13.13×Vt×D)/W)/W。比 较各组间差异[注:Vt=PGE2) 浸泡液总体积,D)/W=稀释倍数,W=右下肢重量 (PGE2)g),E2)7),8=2)7),8nm 处的吸收值)]。 2).4p;统计学处理采用 SPSS11.5 统计软件包进行方差齐性检验、方差分析(PGE2)ANOVA), 以 P<0.05 为差异有显着性。 3 结果 3.1 对热刺激引起的小鼠疼痛反应的影响给药 2)h 后,罗通定组与生理盐水组比较,差异 有显着性(PGE2)P<0.05),痛风灵胶囊高剂量、低剂量与生理盐水组比较差异无显着性,表明痛风 灵胶囊对热刺激引起的小鼠疼痛反应无明显镇痛作用。见表 1。 表 1 痛风灵胶囊对热板刺激引起的小鼠疼痛反应的影响(PGE2)略) Tab.1AnalgesiceffectofTongfenglingcapsulesonthepaininducedwithhotplat einmice 与生理盐水组比较:**P<0.01(PGE2)t 检验) 3.2) 对冰醋酸引起的小鼠扭体反应的影响吲哚美辛组,痛风灵高、低剂量组与生理盐水 组比较,差异有非常显着性(PGE2)P<0.01),表明痛风灵胶囊对醋酸刺激引起的小鼠疼痛反应有明 显镇痛作用。见表 2)。 3.3 对甲醛法小鼠疼痛强度的影响[1]致炎 2)0min,吲哚美辛组、痛风灵高、低剂量组 与生理盐水组比较,差异显着,表明痛风灵对甲醛所致小鼠第二相反应有明显抑制。见表 3。 表 2) 痛风灵胶囊对冰醋酸引起的小鼠扭体反应的影响(PGE2)略) Tab.2)AnalgesiceffectofTongfenglingcapsulesonthepaininducedwithacetica cidinmice 与生理盐水组比较:**P<0.01(PGE2)t 检验) 表 3 痛风灵胶囊对甲醛法小鼠疼痛强度的影响(PGE2)略) Tab.3AnalgesiceffectofTongfenglingcapsulesonpainreactioninducedwithfor malininmice 与生理盐水组比较:*P<0.05,**P<0.01(PGE2)t 检验) 3.4 对甲醛致小鼠足肿胀组织中 PGE2) 含量的影响吲哚美辛组、痛风灵高剂量组与生 理盐水组比较,差异显着,表明痛风灵可降低炎症组织中的 PGE2) 含量。见表 4。 表 4 痛风灵胶囊对甲醛致小鼠足肿胀组织中 PGE2) 含量的影响(PGE2)略) Tab.4EffectofTongfenglingcapsulesonPGE2)levelinmouseformalintest 与生理盐水组比较:*P<0.05(PGE2)t 检验) 4 讨论 中医认为,痛风是由于脾肾亏虚,湿浊毒邪滞留肌肉关节,从而引起关节肿大、畸形[3]。 痛风灵胶囊方中秦艽、防己、延胡索等均具有较强的镇痛作用,而且秦艽与延胡索配伍可增 强其镇痛作用。 本文采用物理和化学刺激法实验,结果表明痛风灵胶囊的高剂量和低剂量能抑制小鼠扭 体反应,但对小鼠热板痛阈无效,说明其对外周性疼痛有较强的镇痛作用,但对中枢性疼痛的 作用不佳。 甲醛疼痛刺激法为单纯持续性自发痛模型,此模型只诱导一双相的持续性自发痛过程, 而无长时程的痛超敏现象。小鼠足底皮下注射甲醛引起的反应可分为两个时相,0~10min 出现者为Ⅰ相相(PGE2)早期相),该反应主要是直接刺激 C 纤维所致;10~6A017),0min 出现的反应为Ⅱ相相 (PGE2)迟发相),该反应则由炎症介质的产生、释放引起。吗啡类药物能抑制两相疼痛,抗炎镇痛药 物则只能抑制Ⅱ相相反应,该法可初步了解受试药物的归类及作用机制[4]。实验结果表明,痛 风灵胶囊可降低Ⅱ相相痛级分值均数,而对Ⅰ相相反应无抑制作用,提示其属于抗炎镇痛药。 从炎痛症的病理生理来看,炎症局部组织或血浆在致炎因子作用下,会产生和释放一些 有致痛作用的介质,如:PGE2)、缓激肽、组织胺等,这些介质通过致敏和兴奋伤害性感受器 末梢而引起疼痛。本实验结果表明,痛风灵胶囊的高剂量组能显着抑制小鼠炎症组织中 PGE2) 的产生,提示痛风灵胶囊的镇痛机制与炎症组织中 PGE2) 含量的降低有关。至于痛风 灵胶囊是否还通过抑制其它致炎介质而达到镇痛作用,则有待进一步研究。 【摘要】目的考察不同产地血竭在凝血和抗血小板聚集方面的作用。方法采用毛细血 管法测定凝血时间,体内血小板致聚剂——胶原和肾上腺素诱导小鼠血瘀模型。结果不同产 地血竭对正常小鼠的凝血功能均有一定的抑制作用,可较明显抑制小鼠对血小板致聚剂诱发 的血小板聚集作用。结论国产血竭和进口血竭均有一定的活血化瘀和抗血栓形成的作用。 【关键词】血竭;凝血时间;血小板致聚剂 Abstract:ObjectiveToassesstheactivityinbloodclottingandantiplateletaggre gationofdragonbloodfromdifferenthabitats.MethodsCapillarymethodwasusedto getclottingtimeandcongestivemicemodelinducedwithcollagenproteinandepine phrinehydrochloridewasused.ResultsD)/Wragonbloodfromdifferenthabitatshaveso meinhibitoryactionsonbloodclottingofhealthyKunmingmice,plateletaggregation inducedbyplateletactivationwasalsoinhibitedobviously.ConclusionD)/Wragonblood sfromChinaandabroadhavesomeeffectsonpromotingbloodcirculation,removing bloodstasisandanti-thrombosis. Keywords:D)/Wragonblood;clottingtime(PGE2)CT);plateletaggregation 血竭(PGE2)dragonblood)是珍贵的中药传统品种之一,主要来源于棕榈科麒麟竭及百合龙血 树属龙血竭,进口的血竭主要为棕榈科麒麟血竭。国产龙血竭与进口棕榈科的血竭相比,在 化学成分上有较大差异,国产血竭对血液系统、心血管系统有较强的药理作用[1-3]。本研 究的目的是以凝血时间和抗血小板聚集反应为指标,比较不同产地血竭凝血和抗血小板聚集 作用,为进一步研究国产血竭替代进口血竭在血液方面的作用机制提供理论依据。 1 实验材料 1.1 药品与试剂广西、云南、印尼、龙王、柬龙 5 种产地血竭原料,购于市场,由广东药 学院药科学院天然药物化学教研室吕华冲副教授鉴定,自处理:用 95%乙醇索式提取,所得醇 溶物干燥,按血竭醇溶物∶泊洛沙姆∶聚乙二醇 4000(PGE2)质量比为 1∶2)∶1),乙醇溶剂熔融法制备成 固体分散体;地奥心血康,成都地奥制药集团有限公司,批号 06A017),06A017),11;复方丹参片,广州白云 山和记黄埔中药有限公司(PGE2)原广州白云山中药厂),批号 2)005102)5;盐酸肾上腺素注射液,北 京市永康药业有限公司 1mL∶1mg,批号 051002)41;I 型胶原蛋 白,NorthingtonBiochemicalCorporation 公司,1g 分装,批号 35E8048。 1.2) 动物昆明小鼠,SPF 级,雄性,体质量 18~2)2)g,购于广东省实验动物中心,合格证号 2)006A017),A017),。 1.3 仪器上皿电子天平 FA2)104(PGE2)上海精密科学仪器有限公司);钻石牌机械秒表(PGE2)上海星 钻秒表有限公司);电动玻璃匀浆机 D)/WY89-1 型(PGE2)宁波新之生物科技股份有限公司)。 1.4 药品、试剂的前处理与配制血竭溶液:分别称取广西、云南、印尼、龙王、柬龙血 竭固体分散体各 10g,再分别称取广西、印尼血竭固体分散体各 5g 和 2).5g,共 9 份,分别加 100mL 注射用 0.9%NaCl 研磨均匀,即得 9 种不同类型和剂量的血竭溶液。 复方丹参片溶液:复方丹参片 3 片加 2)0mL 注射用 0.9%NaCl 研磨均匀,即得 15mg/ mL 丹参混悬液;地奥心血康溶液:地奥心血康胶囊 10 粒加 100mL 注射用 0.9%NaCl 研磨 均匀,即得甾体总皂甙 10mg/mL 地奥混悬液。 血小板聚集诱导剂溶液:精密称取Ⅰ相型胶原 05mol/L1mg,加入 7),5mL 的生理盐水,用电动匀 浆机冰浴下匀浆 4h,再静置冷藏 2)d,临用前 1d,加入 2)0mL 盐酸肾上腺素注射液,摇匀,定容 到 100mL,冰箱 4℃冷藏,避光保存备用。 2) 方法 2).1 毛细管法测定血液凝聚时间(PGE2)自改良)昆明小鼠 192) 只,♂,按体质量分类、随机分组, 每组 16A017), 只,分为 NS 组、阳性对照组(PGE2)复方丹参片组 0.3g/kg、地奥心血康胶囊组 0.2)g/ kg)、不同产地龙血竭固体分散体组(PGE2)广西血竭组分为 0.5g/kg、15mol/L0g/kg、2).0g/kg 低中 高三组,印尼血竭组分为 05mol/L5g/kg、1.0g/kg、2).0g/kg 低中高三组,云南组 2)5mol/L0g/kg,龙王 血竭组 2).0g/kg,柬龙血竭组 2).0g/kg);实验设计空白对照组给予 0.9%氯化钠溶液,每天按 体质量灌胃给药 1 次,连续给药 7),d。 末次给药 1.5h 后,在 17),℃的空调房间内,用毛细管插入小鼠眼底静脉丛取血,深约 4~5mm,轻轻转动,自血液流入管内按动秒表、开始计时,血液注满后取出毛细管平放于水 平台面,每隔 10s 向两侧倾斜一次,观察血液流动性,记录出现血液不再流动的时间[4]。 2).2) 药物对胶原蛋白和肾上腺素诱导血瘀模型小鼠的保护作用[5]昆明小鼠 2)40 只,♂, 按体质量分类,随机分组,每组 2)0 只,分组同 2).1,每天按体质量给药,连续给药 7),d。 末次给药 1.5h 后,小鼠尾静脉注射胶原蛋白和肾上腺素的混合诱导剂,诱发动物血栓性 偏瘫甚至死亡,记录注射后 10min 内小鼠死亡数,计算恢复率以及存活时间。小鼠 10min 内存活计为恢复,恢复率=每组恢复动物数/每组动物数×100%[6A017),,7),],存活时间≥10min 的, 统一记录存活时间为 10min。 2).3 统计学处理凝血时间数据以(PGE2)±s)s)表示,用单因素方差分析(PGE2)SAS 统计软 件,version9.0),以 P<0.05 为差异有显着性;每组动物恢复数进行 χ2) 检验,组间差异采用 两两组间 χ2) 检验(PGE2)SAS 统计软件,version9.0),以 P<0.05 为差异有显着性;存活时间先进 行 F 检验,检验方差齐性,再进行 t 检验。 3 结果 3.1 不同产地血竭制剂对小鼠凝血时间的影响经单因素方差分析,各给药组与空白组比 较差异均有显着性(PGE2)P<0.01);给药组间进行比较,地奥心血康组、广西高剂量组、印尼中剂 量组和高剂量组可较明显延长小鼠的凝血时间,印尼中剂量和高剂量组作用最强,此两组差 异无显着性(PGE2)P>0.05),其余给药组差异无显着性(PGE2)P>0.05)。由实验结果可知,广西和印尼血 竭的延长凝血时间作用似有浓度相关性,印尼 1g/kg 组为有效浓度。复方丹参片,作为临床 的常用活血化瘀药,延长凝血时间方面的作用并不很强。地奥心血康可较明显延长小鼠凝血 时间,但与印尼组相比差异无显着性。见表 1。 表 1 不同产地血竭对正常昆明小鼠凝血时间的影响(PGE2)略) Tab.1EffectofD)/WragonbloodfromdifferenthabitatsontheclottingtimeofKMmic ewithcapillarytest 与空白对照组比较:*P<0.01 3.2) 不同产地血竭对血栓形成小鼠存活时间的影响每组恢复动物数进行 χ2) 检 验,χ2)=2)4.6A017),2)57),,P<0.05,不同给药组对血栓形成小鼠存活率差异有显着性。两两组间 χ2) 检验,P>0.05,提示广西与印尼血竭的效果似无浓度相关性,各浓度组组间差异无显着性;广 西和印尼的高剂量组、云南组、龙王组、柬龙组 4 组组间对小鼠存活率的改善作用差异无 显着性,相比较而言,广西和印尼的低剂量组、云南组同丹参组、地奥组有较好的提高小鼠 存活率的作用,龙王和柬龙组对小鼠存活率的改善作用比丹参组、地奥组差,差异有显着性。 存活时间先进行 F 检验,组间方差齐性,给药组与空白组经 t 检验,给药组能明显提高小 鼠的存活时间;给药各组对提高小鼠存活时间的作用差异无显着性(PGE2)P>0.05)。结果见表 2)。 表 2) 不同产地血竭对血栓形成昆明小鼠存活时间的影响(PGE2)略)