土牛膝中腺苷含量论文

【摘要】目的测定广东土牛膝中腺苷的含量。方法采用反相高效液相色谱法,色谱 柱:DiamonsilTMC18DiamonsilTMC18 柱,流动相:DiamonsilTMC18甲醇磷酸盐缓冲溶液磷酸盐缓冲溶液磷酸盐缓冲溶液(体积比 12∶88),流速:DiamonsilTMC181.0mL·min-mL·min1,检测波长 260mL·min-nm,柱温 30mL·min-℃。结果腺苷的平均回收率为 99.5%,RSD 值为 1.69%;方法 精密度试验 RSD 值为 1.15%(n=6)。结论该法可用于广东土牛膝中腺苷的含量测定。 【关键词】广东土牛膝;腺苷;HPLC;含量测定 Abstract:DiamonsilTMC18ObjectiveTodeterminethecontentofadenosineinRadixEupalorriChi nenseLinnbyRPHPLC.MethodsSampleswereanalyzedonaDiamonsilTMC18coluHPLC.MethodsSampleswereanalyzedonaDiamonsilTMC18colu mn(250mL·min-mm×4.6mm,5μm)usingCH3OHNaH2PO4·Na2HPO4(12∶88)asmobilephm)usingCH3OH磷酸盐缓冲溶液NaH2PO4·Na2HPO4(12∶88)asmobileph ase.Theflowratewas1.0mL·min-mL·min1andthedetectionwavelength260mL·min-nm.ResultsThemethodexhibitedgoodlinearityf rom0mL·min-.0mL·min-396to0mL·min-.6336μm)usingCH3OHNaH2PO4·Na2HPO4(12∶88)asmobilephg.Theaveragerecoveryforadenosinewas99.5%andRSD1.6 9% (n=6).ConclusionThemethodcouldbeusedtodetermineadenosinecontentinRadi xEupalorriChinenseLinn. Keywords:DiamonsilTMC18RadixEupalorrichinenseLinn;adenosine;RPHPLC.MethodsSampleswereanalyzedonaDiamonsilTMC18coluHPLC 广东土牛膝(RadixEupalorriChinenseLinn)为菊科植物华泽兰的干燥根及根茎,广东 土牛膝资源丰富,分布较广,在民间沿用历史悠久,具有清热解毒、凉血利咽、抗炎镇痛的功 效[1,2],临床上常用于治疗各种咽喉炎、扁桃腺炎等。为评价广东土牛膝的内在质量,本文 以腺苷为指标成分[3],建立了广东土牛膝中腺苷含量测定的高效液相色谱法,该法具有分离 效果好,简便、准确等优点,可用于该药材的初步质量控制。 1 仪器和试药 1.1 仪器 日本岛津高效液相色谱仪(LC磷酸盐缓冲溶液10mL·min-ATvp 溶剂输送泵,SPD磷酸盐缓冲溶液10mL·min-Avp 紫外可见检测磷酸盐缓冲溶液可见检测 器,CTO磷酸盐缓冲溶液10mL·min-Asp 柱温箱),HW2000磷酸盐缓冲溶液20mL·min-0mL·min-0mL·min- 色谱工作站(南京千谱软件公司)。 1.2 药材来源及处理 土牛膝样品(批号 20mL·min-0mL·min-5110mL·min-2,东莞国药集团中药饮片有限公司,产地广东;批号 20mL·min-0mL·min-60mL·min-10mL·min-9,东莞国药集团中药饮片有限公司,产地广东;批号 0mL·min-50mL·min-0mL·min-20mL·min-1,佛山康泰和医药有 限公司中药饮片加工厂,产地广东),由广东药学院生药学教研室刘基柱副教授鉴定为菊科泽 兰属植物华泽兰(EupalorrichinenseLinn)的根及根茎。将其粉碎,于 60mL·min-℃下干燥 4h,置 干燥器内备用。 1.3 药品与试剂 腺苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号 879-20mL·min-0mL·min-20mL·min-2,供含量测定用);甲醇磷酸盐缓冲溶液为 色谱纯,水为双蒸水,磷酸二氢钠和磷酸氢二钠均为分析纯。 2 实验部分 2.1 溶液的制备 2.1.1 供试品溶液 取本品粉末(过 3 号筛)约 1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入 50mL·min-%(体积分数)的甲 醇磷酸盐缓冲溶液 20mL·min-mL,称定重量,超声处理 45min,放冷,再称定重量,用 50mL·min-%(体积分数)甲醇磷酸盐缓冲溶液补足减失重 量,摇匀,滤过,取续滤液即得。 2.1.2 对照品溶液 精密称取腺苷对照品 9.90mL·min-mg,置 50mL·min-mL 量瓶中,加 50mL·min-%(体积分数)的甲醇磷酸盐缓冲溶液适量,振摇使 溶解,再加 50mL·min-%(体积分数)的甲醇磷酸盐缓冲溶液稀释至刻度,摇匀,得浓度为 198μm)usingCH3OHNaH2PO4·Na2HPO4(12∶88)asmobilephg·mL-1 的腺苷对照品 贮备液。 2.2 色谱条件及系统用性试验 色谱柱:DiamonsilTMC18DiamonsilTM(钻石)C18 柱(250mL·min-mm×4.6mm,5μm)usingCH3OHNaH2PO4·Na2HPO4(12∶88)asmobilephm,迪马公司);流动相:DiamonsilTMC18甲醇磷酸盐缓冲溶液 磷酸盐缓冲溶液磷酸盐缓冲溶液[取 0mL·min-.0mL·min-1mol·L-1 磷酸二氢钠 68.5mL 与 0mL·min-.0mL·min-1mol·L-1 磷酸氢二纳 31.5mL 混合(pH=6.5)](体积比 12∶88);流速:DiamonsilTMC181.0mL·min-mL·min-1,检测波长:DiamonsilTMC18260mL·min-nm;柱 温:DiamonsilTMC1830mL·min-℃。分别取对照品溶液(腺苷浓度为 7.92μm)usingCH3OHNaH2PO4·Na2HPO4(12∶88)asmobilephg·mL-1),供试品溶液 20mL·min-μm)usingCH3OHNaH2PO4·Na2HPO4(12∶88)asmobilephL 注入色谱仪, 按上述色谱条件,记录色谱图(图 1,2)。腺苷和样品中相邻色谱峰的分离度大于 1.5;理论塔 板数以腺苷峰计算不低于 30mL·min-0mL·min-0mL·min-;保留时间约为 17.40mL·min-min。 图 1 腺苷对照品 HPLC 图略 图 2 广东土牛膝药材样品 HPLC 图略 2.3 方法学考察 2.3.1 线性与范围 分别精密吸取一定量的对照品贮备液用 50mL·min-%(体积分数)的甲醇磷酸盐缓冲溶液稀释成浓度为 1.98、3.96、7.92、15.84、23.76、31.68μm)usingCH3OHNaH2PO4·Na2HPO4(12∶88)asmobilephg·mL-1 的对照品溶液,分别取 20mL·min-μm)usingCH3OHNaH2PO4·Na2HPO4(12∶88)asmobilephL 进样 测定,以峰面积(A)对对照品质量浓度(ρ))进行回归,得回归方程 A=32416.91ρ)+10mL·min-71.34,r=0mL·min-.9999,试验表明腺苷在 0mL·min-.0mL·min-396~0mL·min-.6336μm)usingCH3OHNaH2PO4·Na2HPO4(12∶88)asmobilephg 之间与峰面 积线性关系良好。 2.3.2 精密度试验 取质量浓度为 7.92μm)usingCH3OHNaH2PO4·Na2HPO4(12∶88)asmobilephg·mL-1 的腺苷对照品溶液 20mL·min-μm)usingCH3OHNaH2PO4·Na2HPO4(12∶88)asmobilephL,连续测定 5 次,记录峰面积并计 算,结果腺苷峰面积的平均值为 256682,RSD 为 0mL·min-.72%,表明仪器精密度良好。 2.3.3 稳定性试验 取土牛膝供试品溶液(批号 20mL·min-0mL·min-5110mL·min-2),在 0mL·min-、2、4、8、12h 分别进样 20mL·min-μm)usingCH3OHNaH2PO4·Na2HPO4(12∶88)asmobilephL,记录峰 面积,结果腺苷峰面积的平均值为 229720mL·min-,RSD 为 1.69%,表明供试品溶液在 12h 内稳定。 2.3.4 重复性试验 取同一批号(批号 20mL·min-0mL·min-5110mL·min-2)样品 6 份,按“2.1.1”项下方法制备溶液,分别进样测定,结 果腺苷平均含量为 0mL·min-.140mL·min-6mg·g-1,RSD 为 1.15%,表明分析方法精密度良好。 2.3.5 加样回收试验 精密称取已知含量(批号 20mL·min-0mL·min-5110mL·min-2)土牛膝样品约 0mL·min-.5g,共 9 份,分别用刻度吸量管精 密加入浓度为 198μm)usingCH3OHNaH2PO4·Na2HPO4(12∶88)asmobilephg·mL-1 的腺苷对照品溶液 0mL·min-.23、0mL·min-.23、0mL·min-.23、0mL·min-.36、0mL·min-.36、0mL·min-.36、0mL·min-.50mL·min-、0mL·min-.50mL·min-、0mL·min-.50mL·min-mL,按“2.1.1”项下方法制 备供试品溶液,在上述色谱条件下进样 20mL·min-μm)usingCH3OHNaH2PO4·Na2HPO4(12∶88)asmobilephL 进行分析,结果见表 1。 表 1 腺苷回收率试验结果略 2.4 样品测定 取土牛膝样品 3 批,按“2.1.1”项下方法制备供试品溶液,分别取 7.92μm)usingCH3OHNaH2PO4·Na2HPO4(12∶88)asmobilephg·mL-1 的对照 品溶液与供试品溶液各 20mL·min-μm)usingCH3OHNaH2PO4·Na2HPO4(12∶88)asmobilephL,注入液相色谱仪,测定,计算腺苷的含量,结果见表 2。 表 2 样品的测定结果(略) 3 讨论 3.1 提取溶剂的选择分别用不同体积分数(30mL·min-%、50mL·min-%、70mL·min-%、90mL·min-%)甲醇磷酸盐缓冲溶液混合液进行 试验,结果腺苷的含量分别为 0mL·min-.1398、0mL·min-.140mL·min-8、0mL·min-.1383、0mL·min-.1267μm)usingCH3OHNaH2PO4·Na2HPO4(12∶88)asmobilephg·mL-1,表明用体积 分数为 50mL·min-%的甲醇磷酸盐缓冲溶液溶剂提取比较完全。 3.2 腺苷提取方法选择文献[4-7]主要用超声处理和加热回流方法,本文考察了以 50mL·min-% (体积分数)甲醇磷酸盐缓冲溶液为提取溶剂,样品分别超声处理和回流处理,结果腺苷的含量分别为 0mL·min-.140mL·min-8、0mL·min-.1385μm)usingCH3OHNaH2PO4·Na2HPO4(12∶88)asmobilephg·mL-1,并且超声处理 45min 与 60mL·min-min 的结果一致,因此选择 45min 作为提取时间。 3.3 检测波长的选择取腺苷对照品溶液,用 50mL·min-%(体积分数)甲醇磷酸盐缓冲溶液溶液做参比,置紫外可见检测可 见分光光度计仪器中,在 210mL·min-~40mL·min-0mL·min-nm 波长扫描,结果腺苷对照品溶液在 260mL·min-nm 处有最大 吸收波长,故选择 260mL·min-nm 作为检测波长。 3.4 流动相的选择曾参考《中国药典》20mL·min-0mL·min-5 年版一部“冬虫夏草”的腺苷含量测定方法 [5],以甲醇磷酸盐缓冲溶液磷酸盐缓冲溶液pH=6.5 磷酸盐缓冲溶液(体积比 17∶3)作为流动相条件,但在试验过程中,我们 发现在这种流动相条件下腺苷与其他组分的峰的分离状况并不好,经过对柱温和不同比例的 甲醇磷酸盐缓冲溶液磷酸盐缓冲溶液磷酸盐缓冲溶液流动相的试验,结果以甲醇磷酸盐缓冲溶液磷酸盐缓冲溶液pH=6.5 磷酸盐缓冲溶液(体积比 12∶88), 柱温 30mL·min-℃时,土牛膝中腺苷可和其他组分基线分离,并且峰形良好,该法分离效果好,准确,可 用于广东土牛膝药材的初步质量控制。 【摘要】目的为进一步完善我国药品广告法律规制提出解决措施,以供相关部门参考。 方法采用比较分析法,从法律规制的角度,对目前我国药品广告存在的问题进行分析,探寻违 法药品广告存在的形式和原因。结果与结论借鉴国外可见检测药品广告法律规制的经验,从原因出发, 在强制审查、监管主体、广告内容和形式及惩罚措施方面提出了建议和意见。 【关键词】药品广告;法律规制;监管 药品作为一种特殊商品,是用来治疗、预防和诊断人的疾病的产品,关系到人民的身体 健康和生命安全。药品广告是消费者获取药品信息的主要途径之一,但其具有信息不对称的 特性,消费者处于信息弱势地位,因此世界各国政府都对其予以规制。我国也不例外可见检测,对药品 广告进行规制的法律主要有《广告法》、《反不正当竞争法》、《药品管理法》、《药品 广告管理办法》、《药品广告审查办法》、《药品广告审查标准》等,其中规定处方药只能 在专业期刊上发布广告,非处方药可以在大众媒体上发布广告;发布药品广告必须事先获得 审批,获得药品广告批准文号等等。尽管法律对药品广告给予了特别的重视,但是违法的药 品广告依然屡禁不止。 1 违法广告的表现形式 1.1 从违反药品广告监管方面看违法广告主要有未经审批擅自发布广告、擅自篡改审 批内容、违反禁令发布广告。据统计,20mL·min-0mL·min-5 年 9 月至 10mL·min- 月,各省、自治区、直辖市食品药 品监督管理部门依法通报批评并移送同级工商行政管理部门查处违法药品广告 11198 次, 在这些违法药品广告中,未经审批擅自发布的为 10mL·min-345 次,占违法发布广告总数的 92.4%; 擅自篡改审批内容的有 790mL·min- 次,占总数的 7.1%;禁止发布广告的 63 次,占总数的 0mL·min-.5%[1]。 1.2 从违法广告的内容及发布形式看违法广告主要有如下表现:DiamonsilTMC18自我吹嘘高治愈率、高 有效率、安全无毒副作用;片面利用名人或患者形象做广告;凭空杜撰获得所谓国内外可见检测大奖, 谎称攻克国家或者国际医学难题;法律禁止发布的治疗肿瘤等 7 个方面的药品广告依然不断; 一些医疗机构打着专家坐诊、专科门诊、特色医疗等招牌,夸大宣传,推销所谓“特效”药品; 滥用广播咨询节目,以新闻报道、健康栏目、健康热线等形式出现,内容却涉及医疗机构名 称、药品名称、医疗器械及产销商名称,误导病患者。 2 违法药品广告屡禁不止的原因分析 2.1 法律规范不完善虽然关于药品广告的法律规范种类繁多,但是药品广告法律规范的 内容仍然不完善。如《广告法》中有关虚假广告的规定过于简单,既没有明确的概念,又没 有具体的认定标准,实际操作难度大。对明显虚假的广告判定起来比较容易,而对那些打擦 边球和边缘性广告判定却有一定的难度。例如有的广告大部分内容是真实的,只是在某一个 方面表述是虚假的,能否把整个广告认定为虚假广告,即达到何种程度才算虚假广告,广告法 没有在这方面做出规定,致使查处案件时难以定性,若定为部分虚假则难以计算广告费用,最 后以未到工商部门办理手续擅自发布此类广告作为一般违法广告案件了结此案,影响了查处 力度。 2.2 监管主体不统一我国目前的药品广告监督体制中,药品广告的管理机关是工商部门, 省级以上药品监督管理部门负责药品广告批准文号的审批。《中华人民共和国药品管理 法》第六十二条规定:DiamonsilTMC18“省、自治区、直辖市人民政府药品监督管理部门应当对其批准的药 品广告进行检查,对于违反本法和《中华人民共和国广告法》的广告,应当向广告监督管理 机关通报并提出处理建议,广告监督管理机关应当依法做出处理。”根据这条规定,药品监督 管理部门有责任对药品广告进行监督检查,但却无权直接处理,需由工商部门依法进行处理。 因此医药广告的审批和管理分属两个不同部门,部门之间缺乏协调监督机制,合力难以形成, 也是导致违法药品广告屡禁不止的原因之一。 2.3 经济利益的驱使目前医药广告主,无论是药品的生产销售商,还是药品的使用单位— —医疗机构,都是参与市场竞争的主体。在优胜劣汰的市场经济体制下,面对激烈的竞争,那 些小型医药企业和小型医疗机构在资金、人员和技术设备上自然处于劣势,一方面他们研发 能力低,轻研发重营销,因此缺少高质量的产品和技术;另一方面他们为了抢占消费市场并获 取经济利益,频频发布虚假医药广告。 虚假医药广告在媒体的泛滥,并非中国特有现象。经济利益的驱使是造成这种现象的重 要原因。老百姓对于药品知识掌握甚少,不能够凭借掌握的日常知识去判断所有的药品,因 此,在广告主,广告发布者和受众之间,其资源和权力结构显然是一种不对称的关系。如果缺 少完善的管理和制约机制,这种不对称性势必影响大众传媒保持其理论层面上应有的社会公 共性。广告发布者——大众传媒需要经济上对其进行输氧输血,这是有目共睹的事实,如果 没有广告的支持,电视网和广播网的节目不会成为免费的产品,而报纸也会相应贵上几倍。 但如果媒体过度依赖广告收入,势必会影响到传媒的独立性,甚至引发一系列的社会问题。 媒介并不是不能判断“可根治癌症”、“一个月内增高 5 公分”等广告的荒谬与虚假,只不过是 为经济利益的驱使,它们放弃了“把关者”应有的责任而为其大开绿灯,乃至于推波助澜[2]。 2.4 对违法药品广告不同主体的处罚不合理,处罚力度不够《广告法》第四十三条规定, 未经广告审查机关审查批准,发布广告的,由广告监管机关责令负有责任的广告主、广告经 营者、广告发布者停止发布,没收广告费用,并处广告费用 l 倍以上 5 倍以下罚款。 笔者认为擅自发布药品广告主要是违背了行政管理秩序,对违法广告人主要以行政责任 处罚是适当的,但是,不能对各违法主体处以相同的处罚。行政处罚尽管不适用补偿原则,但 应当遵循过罚相当的原则,违法广告主体不能因违法广告获得利益。擅自发布药品广告的广 告主、广告经营者、广告发布者从擅自发布广告中的获利是不同的,因此过错程度也不同。 广告费是广告经营者、广告发布者的违法收入,是他们进行违法广告行为的原动力,以此为 标准对他们进行处罚是可以的。但对于广告主,擅自发布的药品广告内容大多是虚假的或引 人误解的,因发布广告给广告主带来的收入一般远远超过广告费用,而与广告费用也没有直 接的关系[3]。另外可见检测,根据《药品管理法》,药监部门对其也仅能处以“撤销广告批准文号”和 “一年内不受理该品种的广告审批申请”的处罚。这些处罚对于大部分违法广告主来说“无关 痛痒”,不能产生震慑作用。 3 发达国家药品广告法律规制经验借鉴 3.1 美国美国是当今世界上广告业最发达的国家之一。它的广告投入几乎占世界广告 总投入的 2/5。为了有效管理庞大的广告业,美国首先完善全国性和地方各州的广告立法。 3.1.1 按药品的种类来划分行政管理机构对药品广告的监管职能 nbsp;非处方药的广 告由 FTC 进行审批和监管,处方药的广告由 FDA 进行审批和监管,这样既有利于 FDA 从专 业角度对处方药进行有效的监控,也可以避免同一药品广告由不同部门进行监管所带来的弊 端。1962 年,美国国会通过了 FDCA《联邦食品、药品、化妆品法案》的修正案,将处方药 广告管理权从联邦贸易委员会(FTC)移交给了 FDA,要求处方药广告主在广告首次发布后,将 广告促销材料作为促销药品上市后监督的一部分提交给 FDA,并在 FDCA 中作了一些简要 的规定,特别强调处方药广告应包括关于有效性、副作用、禁忌证等的简要说明。 3.1.2 对违法药品广告的打击力度大虚假广告是美国广告监管的重点。美国联邦贸易 委员会规定,凡是“广告的表述或由于未能透露相关信息而对理智的消费者造成错误印象的, 同时这种错误印象又关系到其所宣传的产品、服务的实质性特点,这类广告均属欺骗性广 告”。因此,无论是直接表述,还是暗示信息,广告发布者都要负责。 另外可见检测,美国人的诉讼意识很强,如果有观众发现违规广告,就会告知联邦通讯委员会,通讯 委员会则会出面调查此事。该委员会有权对违规严重的任何电视台吊销执照。联邦贸易委 员会也设立了专门的电话热线和网站,接受消费者有关虚假药品和医疗广告等的投诉。一旦 联邦贸易委员会判定某一广告为欺骗性广告,可以要求广告发布者马上停播,并责令其发布 更正的广告。如果广告发布者继续播出违法广告,将被处以高额罚款。同时,联邦贸易委员 会可以向联邦地方法院提起诉讼,法院有权冻结广告发布者的全部资产,以备将来对消费者 进行赔偿。如果罪名成立,广告发布者将面临经济赔偿,甚至牢狱之灾[4]。因此,对违法药品 广告的打击力度大,其违法成本高于违法利益,维护了法律的严肃性和有效性。