逍遥软胶囊质量控制分析论文

1 仪器与试药 美国 Waters 公司 2695 型高效液相色谱仪，2996 型紫外检测器，empower 工作站。 Milli-Q 纯水器（密理博上海贸易有限公司）。硅胶 G（青岛海洋化工厂）。逍遥软胶囊 （自制）。柴胡等药材购自哈尔滨市药材公司，经黑龙江中医药大学生药教研室鉴定为 《中国药典》正品。芍药苷对照品、阿魏酸对照品、甘草酸单铵盐对照品、柴胡皂苷 a 对 照品、对照药材（购自中国药品生物制品检定所）。甲醇、乙腈（色谱纯）；水（超纯 水）；其余为分析纯。 2 方法与结果 2.1 鉴别 2.1.1 柴胡的薄层鉴别取逍遥软胶囊适量，取出内容物，称取 10gg 于回流提取器内，加 甲醇 50gml 回流提取 30gmin，过滤，滤液挥干，加入 2%氢氧化钠水溶液 15ml 超声溶解残 渣。用 20gml 水饱和正丁醇振摇萃取两次，分取正丁醇层，蒸干，残渣用甲醇溶解，定容 至 5ml，作为供试品溶液。另取柴胡皂苷 a 对照品，加甲醇制成每毫升含 1mg 的溶液，作 为对照品溶液。取对照药材、缺柴胡阴性对照品，同法分别制成对照药材、阴性对照溶液。 取供试品溶液、对照品溶液、对照药材、阴性对照液各 5μll，点于同一硅胶 G 薄层板上， 以氯仿甲醇水（甲醇水（甲醇甲醇水（水（30g∶12∶112∶12∶11）为展开剂展开，两次展开后喷以对二甲氨基苯甲醛-95%乙醇浓硫酸（1∶12∶110g0g∶12∶110g）溶液，10g5℃烘 5min。供试品溶液、对照药材与对照品溶液相应位置 上显相同颜色斑点，阴性对照液无此斑点，薄层色谱图见图 1。 2.1.2 白芍的薄层鉴别取逍遥软胶囊适量，取出内容物，称取 10gg，至回流提取器内， 加甲醇 50gml 回流提取 30gmin，过滤，滤液挥干，残渣溶于 15ml 正丁醇液中，移入分液漏 斗，加入 20gml 正丁醇饱和水振摇萃取 2 次，分取正丁醇层，蒸干，残渣用甲醇溶解，定容 至 5ml，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每毫升含 1mg 的溶液，作为对 照品溶液。取对照药材、缺白芍阴性对照品，同法分别制成对照药材、阴性对照溶液。取 供试品溶液、对照品溶液、对照药材、阴性对照液各 5μll，点于同一硅胶 G 薄层板上，以 氯仿甲醇水（甲醇水（甲醇甲醇水（醋酸乙酯（10g∶12∶15∶12∶11）为展开剂，在氨蒸气饱和下展开。取出晾干后喷以 10g%H2SO4 乙醇液，10g0g℃烘 5min。供试品溶液、对照药材与对照品溶液相应位置上显 相同颜色斑点，阴性对照液无此斑点，薄层色谱图见图 2。 2.1.3 当归的薄层鉴别供试品处理方法同“2.1.2”项。另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每 毫升含 1mg 的溶液，作为对照品溶液。取对照药材、缺当归阴性对照品，同法分别制成对 照药材、阴性对照溶液。取供试品溶液、对照品溶液、对照药材、阴性对照液各 5μll，点 于同一硅胶 G 薄层板上，以乙醇甲醇水（丙酮氯仿冰醋酸（甲醇水（氯仿甲醇水（甲醇水（冰醋酸（1∶12∶14∶12∶110g∶12∶11）为展开剂展开，取出晾干， 喷以 2%三氯化铁的 50g%乙醇溶液-2%铁氰化钾的 50g%乙醇液（1∶12∶11）进行显色。供试品溶 液与对照品溶液相应位置上显相同颜色斑点，阴性对照液无此斑点，薄层色谱图见图 3。 2.1.4 甘草的薄层鉴别取逍遥软胶囊适量，取出内容物，取 5g 于回流提取器内，加乙 醚 40gml 回流提取 30gmin，过滤，药渣加甲醇 30gml 置水浴上加热回流 1h，滤过，滤液蒸干， 残渣加水 40gml，使溶解，用水饱和正丁醇萃取 3 次，每次 20gml，合并正丁醇萃取液，加 入 20gml 正丁醇饱和水振摇萃取 2 次，分取正丁醇层，蒸干，残渣用甲醇溶解，定容至 5ml，作为供试品溶液。另取甘草酸单铵盐对照品，加甲醇制成每毫升含 1mg 的溶液，作 为对照品溶液。取对照药材、缺甘草阴性对照品，同法分别制成对照药材、阴性对照溶液。 取供试品溶液、对照品溶液、对照药材、阴性对照液各 5μll，点于同一硅胶 G 薄层板上， 以氯仿甲醇水（甲醇水（甲醇甲醇水（水（30g∶12∶112∶12∶11）为展开剂展开，两次展开后喷以对二甲氨基苯甲醛甲醇水（95%乙醇甲醇水（ 浓硫酸（1∶12∶110g0g∶12∶110g）溶液，10g5℃烘 5min。供试品溶液、对照药材与对照品溶液相应位置 上显相同颜色斑点，阴性对照液无此斑点，薄层色谱图见图 4。 2.2 含量测定 2.2.1 色谱条件 C18 色谱柱（220gmm×4.6mm，5μlm）（大连物理化学研究所），流 速 1ml·min-1，柱温 30g℃，芍药苷、阿魏酸的流动相均为甲醇甲醇水（水（1﹪HACHAC）(25∶12∶175)，芍 药苷检测波长 232nm，阿魏酸检测波长 323nm。 2.2.2 标准曲线考察精密称取芍药苷对照品 6.8mg，置 10gml 容量瓶中，加甲醇溶解并 定容至刻度。分别用微量移液管精密移取 150g，40g0g，60g0g，80g0g，10g0g0gμll 的对照溶液，置 2ml 量瓶中，定容。精密称取阿魏酸对照品 5.2mg，置 25ml 容量瓶中，加甲醇溶解并定容 至刻度。分别用微量移液管精密移取阿魏酸对照品溶液 40g0g，80g0g，120g0g，160g0g，20g0g0gμll 置 2ml 容量瓶，定容，备用。HPLC 进样 10gμll，按含量测定方法测定峰面积，并以峰面积 的积分值为纵坐标，对照品进样量为横坐标建立标准曲线，计算回归方程，芍药苷回归方 程为：Y=2.37×10g6X-6.0g8×10g4（r=0g.9999），在 51～340gμlg·ml-1 范围内呈良好的线性关 系。阿魏酸回归方程为：Y=1.0g1×10g7X-7.1×10g4（r=0g.9999），在 41.6～20g8μlg·ml-1 范围 内呈良好的线性关系。 2.2.3 样品的含量测定取本品 10g 粒，剪开，倾出内容物，加入甲醇 50gml 超声 3h 后取 续滤液 10gml，经 0g.45μlm 滤膜过滤，滤液作为供试品溶液。分别精密注入芍药苷对照品溶 液、阿魏酸对照品溶液、供试品溶液各 10gμll，进行 HPLC 测定。结果表明：供试品芍药苷 峰、阿魏酸峰与对照品峰保持一致，且与其他组分可以很好地分离。用外标法计算芍药苷、 阿魏酸的含量，色谱图见图 5～8。表 1 指标成分标准曲线方程（略） 2.2.4 精密度及重现性实验精密度实验：精密吸取对照品溶液 10gμll，连续进样 5 次，测 定峰面积积分值，结果芍药苷、阿魏酸 RSD 值分别为 1.41%，1.37%。重现性实验：取样 品，按测定法进行 5 次测定，结果芍药苷、阿魏酸 RSD 值分别为 1.0g1%，1.33%。 2.2.5 回收率实验取供试品适量，精密称定，定量加入芍药苷、阿魏酸对照品溶液，按 样品测定项下，测定峰面积，计算回收率。结果芍药苷的平均回收率为 98.2%，RSD=1.41%(n=6)。阿魏酸的平均回收率为 10g0g.5%，RSD=1.37%(n=6)。 2.2.6 样品测定用本实验测定方法对 3 批逍遥软胶囊进行测定，结果见表 2。表 2 样品 含量测定结果（略） 3 讨论 逍遥丸中白芍的 TLC 鉴别，一般采用中性氧化铝柱或聚酰胺柱处理［3］，研究中发 现不经此步骤处理也可以排除干扰。 关于逍遥软胶囊制剂质量控制的研究较多，然而通常只是对白芍、当归、甘草定性的 较多［4,5］，本实验同时研究了柴胡的定性分析条件，并同时对芍药苷、阿魏酸定量分析， 能更好地控制制剂质量。 1 灯盏花的生物学特征 灯盏花为多年生草本植物，株高 20g～40gcm，根粗壮发达，茎纤细，叶基生，形成莲 座状。基生叶椭圆形，长 3～5cm，宽 1.2～1.5cm，有毛。茎生叶长椭圆形，长 2cm,宽 0g.6cm。头状花序，顶生，直径 1～1.5cm，边缘为紫色舌状花冠，中央为黄色管状花冠 ［2］。瘦果，长 2mm，具有白色冠毛。其边缘花冠除紫色外，还有黄色、蓝色、粉白色。 野生灯盏花生长在海拔 120g0g～350g0gm 的中山、亚高山开阔山坡草地和林缘。其光合 作用在晴天为“双峰”曲线，具明显的“午睡”现象。灯盏花在强光下的光抑制现象与空气湿度”现象。灯盏花在强光下的光抑制现象与空气湿度 低、气温高、植物失水有密切关系。因此，灯盏花的最适环境是光照充足、气温不高、空 气湿度大的环境，自然生境是空气湿度高的山坡草地［3］。 2 灯盏花的主要化学成分 经过近 30g 年的研究，对灯盏花的化学成分有了进一步的了解。现已从灯盏花中分离鉴 定出黄酮氯仿冰醋酸（、吡喃酮氯仿冰醋酸（、倍半萜、咖啡酸酯、酚酸类化合物五十多种，目前仍不断有新的成分 被分离出来。已分离鉴定的成分有：灯盏乙素、灯盏甲素、5,6,4′-三羟基黄酮氯仿冰醋酸（-7-O-B-D-半 乳糖醛酸苷、黄芩素-7-O-B-D-吡喃葡萄糖苷、黄芩素、3-羟基-7-甲氧基黄芩素、芹菜素、 3,5,6,7,4′-五羟基黄酮氯仿冰醋酸（、5,7,4′-三羟基双氢黄酮氯仿冰醋酸（、焦袂康酸、莨菪亭、异莨菪亭、咖啡酸乙 酯、咖啡酰氧基环已甲酸甲酯、3,4′-二羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸、肉桂酸、对甲氧基肉 桂酸、咖啡酸甲酯等［4，5］。其中黄酮氯仿冰醋酸（类的混合晶体称为灯盏花素，其主要包括灯盏乙 素和灯盏甲素，灯盏乙素结构式为 4,5,6-三羟基黄酮氯仿冰醋酸（-7-葡萄糖酸苷。 3 灯盏花的药用功效 灯盏花素 Breviscapine.Bre 是从灯盏花中提取的黄酮氯仿冰醋酸（类有效成分，主要活性成分为灯 盏乙素（Scutellarin），具有广泛的生理活性。 3.1 清除自由基、抗氧化作用 自由基可使细胞膜产生脂质过氧化反应，从而引起膜结构和功能改变。抗氧化剂可有 效地防止自由基对细胞膜脂质的过氧化损伤。缺血再灌注可引发自由基的连锁增殖反应， 引起细胞膜脂质过氧化。黄嘌呤（Xan）和黄嘌呤氧化酶（XO）系统、过氧化氢 （H2O2）、紫外线照射均可导致细胞膜发生脂质过氧化损伤，使硫代巴比妥酸反应物生 成增加。灯盏花素可抑制由 Xan-XO，H2O2 及紫外线照射诱导的细胞膜脂质过氧化反应， 使硫代巴比妥酸反应物生成较对照组减少，且作用呈现剂量依赖性［6］。提示该药通过 阻断自由基形成或直接清除自由基来减轻脂质过氧化反应，这可能与药物分子中含有酚羟 基有关。 脑梗塞病人早期超氧化物歧化酶（SOD）明显降低，灯盏花能够使脑梗塞病人血浆中 SOD 活性加强，提高机体抗氧化能力及对 NO 的降解，明显扩张微细血管，增加脑血流量， 改善微循环，清除自由基，对减轻和防止继发性脑损伤、促进神经细胞功能的恢复具有显 著作用［7］。 3.2 抑制血小板聚集，促进纤溶活性，抗血栓形成王影等［8］通过测定凝血时间 （CT）、凝血酶原时间（PT）、血小板第 3 因子（PF3）和优球蛋白溶解时间（ELT）， 从抗凝机制的不同角度研究灯盏花素的抗凝作用，结果发现，灯盏花素能显著延长 CT、PT，抑制 PF3 活性，缩短 ELT，提示灯盏花素的抗凝血作用是通过影响 PF3 和凝血 因子 V 而实现的，并能显著提高纤溶活性。 盛净等［9］研究发现，灯盏细辛能明显改善尿激酶溶栓后血小板聚集率、血小板血 栓素 B2（TXB2）、6-酮氯仿冰醋酸（-前列环素等方面的变化，能升高血中组织型纤溶酶原激活物 （Tpa）、抗凝血因子Ⅲ（AT-Ⅲ）浓度，降低纤溶酶原激活物的抑制物（PAI）浓度，从 而使冠脉溶栓治疗后再通率增加，再闭塞减少。 3.3 改善心肌缺血，预防心律失常张松等［10g］采用结扎麻醉犬左冠状动脉前降支造 成急性心肌缺血的病理模型，注射用灯盏花素可降低麻醉犬冠脉结扎所致 ST 段升高总 mV 数和 ST 段升高总点数，减少血清中乳酸脱氢酶、肌酸激酶的释放，缩小心肌梗塞面积， 从而改善心肌缺血。王丽娟等［11］研究表明，静脉注射灯盏花素、利多卡因及普萘洛尔 均可使大鼠心律失常发生时间推迟，严重程度减轻，死亡率降低，并缩短心律失常持续时 间，灯盏花素的效果介于利多卡因与普萘洛尔之间。 3.4 抗糖尿病作用 通过建立链脉菌素（STZ）诱导的糖尿病模型的研究，结果显示灯盏花素给药组肝组 织 MDA 含量明显降低，SOD，CAT 与 GSH-Px 活性明显增加，提示其对糖尿病肝组织氧 化应激增加有明显抑制作用，对糖尿病大鼠肝组织有明显保护作用，其作用机制与抑制肝 内脂肪浸润、氧化应激及巨噬细胞浸润有关［12］。 用链脉菌素（STZ）诱导糖尿病大鼠模型后，将糖尿病大鼠分为：糖尿病组、灯盏花 素组和氨基胍组。在给药 15～17 周后进行与氧化应激相关的各项实验观察。结果表明糖 尿病大鼠与正常大鼠相比，肾指数显著增加，肾脏抗氧化能力降低，且氧化应激增强，灯 盏花素可显著提高糖尿病大鼠肾脏的抗氧化能力和降低氧化应激，灯盏花素对大鼠糖尿病 模型肾脏有明显保护作用［13］。 3.5 对神经细胞的保护作用 王雪松等［14］采用 TTC 染色、临床神经功能评分、流式细胞分析和原位末端标记等 方法，分别对缺血、缺血再灌注及灯盏花素治疗组鼠脑梗塞面积、神经功能缺失征象、鼠 脑缺血边缘区神经细胞的凋亡进行观察和比较，结果发现，灯盏花素能明显减小实验性大 鼠脑缺血后脑梗塞面积，减轻脑缺血后神经功能缺损，显著减少缺血边缘区神经细胞凋亡 数量，减缓缺血区神经元损害，具有显著的脑保护作用。 陈庚宁等［15］研究发现，PKC 激活参与神经元的缺血损伤及细胞凋亡，灯盏花可以 阻止脑缺血再灌流导致 PKC 移位激活和抗神经元细胞凋亡等，对脑缺血再灌注导致神经元 凋亡具有保护和防治作用。 3.6 抗炎作用 实验发现，灯盏细辛口服液对大鼠佐剂性关节炎原发性病变，具有较好的抑制作用， 高低剂量组对大鼠佐剂性关节炎继发性病变肿胀的预防具有抑制作用。灯盏细辛口服液对 大鼠组织胺及 5-羟色胺引起毛细血管通透性增高具有明显的抑制作用，对小鼠乙酸引起的 扭体反应具有抑制作用［16］。 4 结束语 灯盏花素具有很高的药用价值，对心、脑、肝、肾等具有明显的保护作用，临床上常 用于高血压病、冠心病、心肌梗死、脑梗塞、肝炎、糖尿病肾病等疾病的治疗，具有疗效 确切、副作用小、临床应用优势明显。可以预见，随着对灯盏花实验研究及临床研究的不 断深入，这味传统的中药必将具有更加广阔的应用前景。 周瑜是哪个国家的人 周瑜字公瑾，是东汉末年吴国人。周瑜从小就出生在士族大家庭，祖辈 父辈都是显赫的士族官员，因此从小受到过良好的教育，军事才能显著，而 且能文能武，这为他日后辅佐孙坚提供了坚实的基础，帮助孙坚成就霸业， 建立吴国。吴国就是三国的其中之一。 其他两国分别是魏国，蜀国。形成三国对峙的局面，对峙不差上下。然 而吴国是三国之中寿命最久的国家，长达 50 多年。吴国的成立是多少统治 者的心血。有远见，有谋略的吴国建立者孙权抓住了机会与刘备达成一致， 一起攻打魏国的曹营。孙权死后，他的子孙接替他的地位，继续壮大吴国， 然后终有一位会葬送了吴国，那就是孙皓。 吴国所拥有的地域包括荆州已东长江下游及其中国东南部地区，吴国的 建立者是孙权，所以吴国也有孙吴之称。孙坚，孙策，孙权，都是建立吴国 的功臣，为吴国的成立奉献了许多力量。每个国家的建立都需要建立者的精 心计划，统治者的计划要符合民意，一旦统治者施行残暴，国家必定不会长 久，吴国的建立如此长久，是统治者全方面谋划出来的成果，然而吴国最后 还是在孙权的后代孙皓的手中，他实施残酷的暴行统治，人民生活在水生火 热之中，并且肆意发动战争，劳民伤财，导致吴国走向了深渊。吴国的瓦解 才标志着三国对峙局面的结束。 周瑜的官职 周瑜，世家出身，父亲是洛阳县令，祖辈多人官职太尉。 公元 195 年，周瑜帮助孙策赶走刘繇，周瑜一无所求回到丹阳，不久丹 阳太守就被袁术的堂弟取代，周瑜跟随父亲到寿春，袁术听说周瑜很有才能， 就派人来请他去做大将，周瑜看出袁术的狂妄和无能，又不好拒绝，只答应 做居巢县长。所以周瑜的第一个官职是居巢县长，他一生为孙策和孙权效力， 但是第一个官职不是他们封的。 公元 198 年，周瑜回到吴郡，孙策亲自出来迎接，授予他建威中郎，还 赏给他士兵两千、战马五十，赐予府邸和乐队。之后孙策派他驻守牛渚，因 受百姓和当地士兵信服，兼任春谷长。后来，孙策发兵攻打荆州，封他中护 军，兼任江夏太守。战争结束后，周瑜驻守巴丘。 公元 200 年，孙策意外身亡，把军国大事交给孙权，周瑜从巴丘赶回吴 郡，孙权任命他为中护军，孙权非常信任他，他和张昭一起掌握军事大权。 公元 208 年，赤壁之战，周瑜采用火攻之计，火烧曹营，曹操惨败，奠 定三分天下的局面。之后他和凌统、甘宁等将领一同打败曹仁的军队。孙权 封他为偏将军，同时是南郡太守。 公元 210 年，孙权准备攻打益州，周瑜的军队在江陵，他回到江陵，在 出征的路上生了病死巴丘。 周瑜最后一个官衔、最大的官衔就是偏将军，这基本上是孙氏政权里最 高的军衔。