五味子提取物抑菌作用研究论文

1 资料与方法 1.1 菌种与培养基试验菌为金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯 氏菌，由浙江省台州医院微生物实验室友情赠送。牛肉膏蛋白胨培养基按文献［4］自制， PH 为 6.0（用 PBS 配制［5］）。 1.2 五味子提取物的制备五味子饮片购自临海市医药有限公司，经 70℃烘干后研成粉 末。取粉末 10g 用 75％乙醇在超声波清洗器中提取，反复多次，直至浸出液色淡。将浸出 液浓缩，并定容到 10ml，即 1ml 提取液为 1g 五味子的提取物［6］。提取液过 0.22μmm 滤 膜除菌，4℃贮存备用。 1.3 抑菌试验 1.3.1 抑菌效力的测定将供试菌从斜面转接到 5ml 液体培养基，30℃培养 24h，吸取 50μml 到 5ml 液体培养基，30℃培养 6h 后取 100μml 菌液均匀涂布到平板上；再贴上滤纸圆 片（φ6mm，提取液浸 24h 后风干），每皿 4 片，重复 3 次。37℃倒置培养 24h 后测定抑 菌圈大小，用无菌水作空白对照，确定抑菌效果。 1.3.2 最低抑菌浓度（MIC）的测定采用二倍稀释法［7］测定提取物对供试菌的 MIC。取 7 支试管，第 1 支加入 10ml 提取液，其余 6 支各加入 5ml 无菌水，从第 1 支吸取 5ml 提取液移至第 2 支，混匀后，再吸取 5ml 至第 3 支，以此类推，最后 1 支试管取出 5ml 弃去，每一试管的浓度分别为 1000、500、250、125、62.5、31.3 和 15.6mg/ml。分别将 5ml 上述各浓度的提取物与 20ml 牛肉膏固体培养基混匀，制成提取物的浓度分别为 200、100、50、25、12.5、6.3 和 3.2mg/ml（w/v）的平板，接种菌液后倒置培养 24h 观 察，以没有供试菌生长的最低浓度为提取物的 MIC。 1.3.3 热稳定性试验将五味子提取液置于 80℃水浴、100℃水浴和 121℃湿热条件下 ［8］热处理 20min，再制成浓度为 500mg/ml 的提取液浸泡滤纸片，稍风干后贴在涂有菌 液的平板中，测定其抑菌效果。 2 结果与分析 2.1 提取物浓度对抑菌效力的影响滤纸片法测定结果（见表 1）显示，五味子提取物对 4 种供试菌的生长均有很强的抑制作用，其中对绿脓杆菌的抑制作用最强，肺炎克雷伯氏 菌其次，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌最弱。 表 1 五味子提取物的浓度对抑菌效率的影响（略） 2.2 不同菌的 MIC 提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯氏菌 的 MIC 值如表 2 所示。除金黄色葡萄球菌的 MIC 为 50mg/ml 外，其余 3 种菌均为 25mg/ ml（与滤纸片法基本一致）。 表 2 五味子提取物的 MIC（mg/ml）（略） “－”表示无菌生长，“”表示无菌生长，“+”表示细菌生长 2.3 提取物的热稳定性试验提取物经 3 种温度的热处理 20min 后，仍具有较强的抑菌 效力，其抑菌圈直径与未经高温处理的样品接近，其中只有对绿脓杆菌抑制作用，经 100℃处理和湿热灭菌后有显著下降，对金黄色葡萄球菌的抑制作用，经湿热灭菌后有显 著降低；而对大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌抑制作用，3 种处理与对照均无显著差异（见表 3）。说明五味子的抑菌成分具有一定的热稳定性。 表 3 热处理对五味子提取物抑菌效力的影响（略） 不同字母表示 P＜0.05 水平显著，ns 为不显著 3 结论 经反复实验，结果表明五味子提取物的浓度在 31.3～1000mg/ml 范围内，对 4 种供试 菌的抑制效应依次为：绿脓杆菌>肺炎克雷伯氏菌>大肠杆菌>金黄色葡萄球菌。滤纸片琼 脂扩散法结果显示，除金黄色葡萄球菌 MIC 为 62.5mg/ml 外，其余 3 种供试菌 MIC 均为 31.3mg/ml；采用二倍稀释法测得的 MIC 也显示类似的结果，金黄色葡萄球菌的 MIC 为 50mg/ml，另 3 种菌的 MIC 均为 25mg/ml。另外，五味子提取物经短时高温处理后，其活 性成分不变，仍保持较强的抑菌效果。 1 老年疾病的特点 (1)起病隐匿。老年人的身体日渐衰弱，反应迟钝，故患病后常缺乏典型的症状和体征， 如老年人上感往往不发热或发热不高，仅有头痛乏力、浑身酸痛、食欲不振等症状，甚至 在严重胸部感染时，也不出现发热，易误诊、漏诊。（2）多病症共存。当今医学证实， 老年人不仅在全身，而且在同一个脏器内可以同时发生几种病变。以心脏为例，可同时见 到冠状动脉硬化、心肌肥大、肺心病、心包炎、心脏传导系统的病变等［1］。（3）多种 病理变化同存。因脏器虚衰，老年人患病往往临床表现复杂化，如老年人心衰，常多病因 并存，如：冠心病、高血压病、贫血病、糖尿病、退行性心脏瓣膜病、脑血管病症等多器 官病症并存［2］。（4）易反复，病程长。 2 老年患者中成药的应用原则 2.1 对症下药中成药的组成是以中医理论为基础的，而“辨证论治”则是中医治疗疾病的”则是中医治”则是中医治疗疾病的疗疾病的 原则，也是应用中成药的前提。大多数老年患者在就诊时往往根据药物广告或病友的推荐， 向医生要求开具某种中成药，他们只注意药品名称和自己的疾病，而对药物的组成、功效 和适应证是否适合自己的病症表现则了解不透。殊不知中成药是由不同的中草药制成，有 寒、热、温、凉性能不同，表现出不同的功效，而病情又有寒、热、虚、实、表、里的不 同，若药虽对病却不对症，不仅起不到好的疗效，有时还会适得其反。 2.2 正确用法用量，确保安全用药对于一些含有毒性或药性猛烈的药物，如剂量过大， 药力过猛，会伤人体的正气，严重的还会威胁到生命。如胆石通胶囊如果超剂量服用，会 造成胃黏膜损伤［3］。含乌头类药物的正天丸、金匮肾气丸等，因乌头类中药含有乌头 碱等毒性成分，过量服用可引起恶心、呕吐、腹泻及全身发麻，继而瞳孔放大、呼吸困难、 视觉模糊、血压及体温下降，重者可引起死亡。老年人由于各种器官功能的衰退，对药物 耐受力差，个体差异较大，半衰期延长，过量服用易加重肝脏受损，易致药物在休内蓄积， 造成毒副反应。 2.3 重视中成药的不良反应如山海丹胶囊可引起瘙痒、皮疹，霍香正气水致过敏性紫 癜，银黄口服液引起药疹等［3］。由于老年患者发生的不良反应高于普通成年人，其表 现又往往不典型，容易延误治”则是中医治疗疾病的序，所以一些有不良反应报道的中成药品种应慎重选择。 2.4 中西药联合应用要适当如中成药金匮肾气丸、六味地黄丸、保和丸、山楂丸和西 药胃舒平、小苏打、盖胃平、氨茶碱合用，可造成酸碱失调而失去作用。中成药防风通圣 丸、麻杏石甘片、甘草合剂、咳停片等不能与西药降压 0 号、复方降压片、心痛定、络活 喜等同用，以免抵消西药的降压作用。中药山楂丸、保和丸与西药抗生素类合用，可降低 酶的活性而丧失药效。香连丸、小活络丹、川贝枇杷露（膏）与西药阿托品、颠茄、咖啡 因同用，会增强后者的生物碱的毒性；中成药冠心苏合丸和西药硝酸盐类同用，能生成含 汞离子的有毒沉淀物，使人中毒。中成药五味子糖浆和西药磺胺类合用，容易引起尿闭或 血尿。由于老年患者往往一人患有多种疾病，治”则是中医治疗疾病的疗时更应该注意各种药物间的相互影响， 选用药品的种类宜少不宜多。 1 商品名来源及产地 木香：主产于云南丽江、迪庆州等地，奉为地道的药材，可称“云木香”。由印度等地 经广州进口，通称“广木香”。川木香：产于四川及西藏。土木香：产于河北。越西木香： 产于四川的越西，西昌。红木香：产于浙江，安徽等地。青木香：产于四川、江苏等地。 2 药材性状，显微鉴别 2.1 性状鉴别(1)木香：略呈圆柱形，枯骨形为纵剖片，长约 5～15cm，直径 0.5～ 6cm，表面黄褐色，栓皮多除去，有显著纵沟及侧根痕，有时可见不规则菱形网纹。质坚 实，体重，不易折段。断面略平坦，黄白色至棕黄色，有一棕色环及放射性纹理，并可见 散在的褐色油点。气强烈芳香，味苦。(2)川木香：呈圆柱形（铁杆木香）或有纵槽的半圆 柱形（槽自木香），稍弯曲，长 10～30cm，直径 1～3cm，表面黄褐色或暗褐色，有较细 的纵皱纹，外皮脱落处可见丝瓜络，状细筋脉，根头偶有黑色发粘的胶状物，可称“油头”、 “糊头”体较轻，质脆易折断。断面，黄白色或黄色，散在黄色稀疏油点及裂隙，木部较宽 广，有放射状纹理，有的中心呈腐朽状。气微香，味苦，嚼之粘牙。（3）土木香：多呈 圆柱形或长圆锥形，稍弯曲或扭曲，少数为圆锥状的短段或不规则块状。长 10～20cm， 直径 0.5～2cm，表面深棕色，具纵皱纹及不明显的横向皮孔，顶端有稍凹陷的茎痕及棕红 色叶柄残基，根头部稍膨大，多纵切开或斜切成截形，边缘稍向外反卷，质坚硬不易折断。 断面不平坦，稍呈角质样，乳白色至浅黄棕色，形成层环状明显，木质部略显放射状纹理。 气微苦而灼辣。（4）越西木香：呈圆柱形或半圆柱形，略似鸡骨，长 5～25cm，直径 0.5 ～2cm，表面黄褐色或灰褐色，有纵纹几纵裂沟，并有突起的须根痕，质坚硬。断面棕黄 色，多有偏心性放射性纹理及油室，皮部较薄，形成层颜色较深，油质较重。气浊，味微 甜而苦辣，嚼之粘牙。（5）红木香：呈圆柱形，不规则扭曲，长 10～50cm，直径 1～ 2.5cm，表面灰棕色至棕紫色略粗糙，有细棕皱纹和多数深达木下的横裂状，扭曲处尚可 有横深沟偶有枪皮脱落，露出棕色皮部，质坚难折断。断面粗纤维性，皮部与木部易分离， 皮部宽厚，棕色，木部浅棕色，密部浅棕色，密布小孔（导管）。气微香而特异，味微甜， 后苦而辛。（6）青木香：呈圆柱形或扁圆柱形，略弯曲长 3～15cm，直径 0.5～1.5cm， 表面黄褐色或灰棕色，粗糙不平，有纵皱纹及须根痕，质脆容易折断，断面不平坦、皮部 淡黄色、木部宽广；射线类白色，放射状排列，形成层环明显，黄棕色，气香特异，味苦 ［1］。 2.2 显微鉴别要点（1）木香：薄壁细胞中含有菊糖，网纹导管多见，也有具缘纹孔导 管。（2）川木香：纤维旁有石细胞，薄壁细胞含菊糖。（3）土木香，薄壁细胞中含菊糖， 网纹导管。（4）、红木香：细胞含淀粉粒。（5）越西木香：韧皮部及木射线中均有较大 的油室散在，薄壁细胞充满菊糖。（６）青木香：薄壁细胞含淀粉粒。［2］ 3 功效主治”则是中医治疗疾病的区别 （1）木香：长于健脾化滞。用于停食积聚、胸满腹胀、呕吐泻痢等。（2）川木香： 行气止痛，消胀。用于腹胀肠鸣、腹痛、痢疾里急后重。（3）土木香：健脾和胃，调气 解郁，止痛安胎。用于胸胁、脘腹作痛，呕吐泻痢，胸胁挫伤，岔气作痛，胎动不安。 （4）红木香：长于祛风活血止痛。用于筋骨疼痛，月经痛，跌打损伤。（5）越西木香： 功似木香但力较弱。（６）青木香：长于疏肝止痛，解毒消肿。用于肝气郁结之胁痛，痈 肿疔疮，蛇虫咬伤。 4 讨论 由于时代变迁及各种文献记载引起木香类药材之间相互混淆，给处方调剂及临床使用 带来不便，为此应加以注意。根据功效，虽然有相似之处，但主治”则是中医治疗疾病的有偏重。川木香偏于行 气止痛，土木香偏于健脾和胃，而红木香偏于祛风活血，青木香偏于平肝止痛，解毒消肿， 所以临床上应根据需要甄别使用。