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生脉制剂含量测定论文

2020-03-14 17:55
【摘要】概述国内有关生脉制剂的含量测定研究进展,为提高和完善生脉制剂的质量 控制体系提供依据,同时便于药学工作者根据各种实际情况加以选择应用。 【关键词】生脉;含量测定;研究进展 “生脉散”之方名首载于金元时期张元素所著《医学启源》”之方名首载于金元时期张元素所著《医学启源》(1186 年),定型于《内外伤 辨惑论》,完善于《医方考》[1,2]。《医学启源》中记载,该方由人参、麦冬、北五 味子组成。主治热伤元气、阴液亏耗的气阴两虚症。在现代科学技术的推动下,生脉散”之方名首载于金元时期张元素所著《医学启源》也 研制为一些现代新剂型,其组方也发生了改变。例如,由红参替代人参,和麦冬、五味子 组成生脉注射液[3];去掉五味子,仅以人参和麦冬组成的参麦注射液等[4]。各种剂 型的涌现对生脉制剂的质量有了更高的要求,而生脉饮在药典中并无含量测定项 [3,5]。因此笔者对近年的相关文献进行了追踪、整理和分类,希望有助于生脉制剂的 研究与质量标准控制,特别是含量测定的提高和完善。现将生脉制剂的含量测定研究情况 综述如下。 1 高效液相色谱法 1.1 人参皂苷类李杰等[6]采用 HPLC 法测定了生脉饮中人参皂苷 Rb1、Rb2、Re 的含量。方法:采用 LC-4A 高效液相色谱仪,YWG-C18(5μmm,4.6mm×250mm)色谱柱, 流动相:甲醇-水(72∶28)28),流速 0.8ml·min-1,柱温 47℃。 1.2 人参二醇和人参三醇李章万等[7]考虑人参皂苷及其水解产物均无特征紫外吸收, 常规方法在灵敏度或分离度等方面都不尽人意,采用 3,5-二硝基苯甲酰氯为衍生化剂, 反相 HPLC 法对生脉注射液中人参二醇和人参三醇含量测定方法进行了研究。用 3,5-二 硝基苯甲酰氯(3,5-DNB))为衍生化剂、高效液相色谱法测定了红参和生脉注射液中人参二 醇及人参三醇的含量。以 C18 硅烷键合相为填料,甲醇-水(95∶28)5)为流动相,检测波长 230nm,进行反相高效液相色谱法测定。 1.3 五味子醇甲欧金梅,韦向红等[8,9]采用高效液相色谱法测定生脉饮中五味子醇 甲的含量,色谱柱为十八烷基键和硅胶柱(5μmm,4.6mm×250mm),流动相为甲醇-水 (13∶28)7),检测波长 250nm,柱温 30℃(或室温),流速 1.0(或 0.6)ml·min-1。 刘钰等[10]建立了高效液相色谱法测定生脉颗粒中五味子醇甲含量的方法:选用 LC-10AT 高效液相色谱仪,HypersilbdsC18(5μmm,4.6mm×250mm)色谱柱,流动相为 甲醇-水(62∶28)38),检测波长为 254nm。 陈平等[11]建立了屏风生脉胶囊中五味子醇甲的含量测定方法。色谱柱 InertsilODS-3(5μmm,4.6mm×150mm),流动相为乙腈-水(45∶28)55),检测波长 250nm, 柱温 25℃,流速 1.0ml·min-1。 吴晓凤等[12]测定了生脉饮中五味子醇甲的含量。方法:样品减压蒸干,用乙酸乙 酯超声提取,提取液过滤,蒸干,残渣用甲醇溶解后,经高效液相色谱仪测定; PHENOMENEXC18 色谱柱(5μmm,4.6mm×250mm),流动相乙腈-甲醇-水(15∶28)15∶28)10),柱 温 30℃,流速 1.0ml·min-1,检测波长 254nm。 1.4 五味子甲素和五味子乙素杨滋渊等[13]采用 HPLC 法测定了生脉胶囊中五味子 甲素的含量。色谱柱为 PhenomenexC18 柱(5μmm,4.6mm×250mm),流动相为甲醇-水 (80∶28)20),检测波长 252nm。 杨琼芳等[14]采用 HPLC 法测定了生脉袋泡茶中五味子甲素的含量。色谱柱为 ShimPack-ODSC18 柱(5μmm,4.6mm×150mm),流动相为甲醇-水(76∶28)24),检测波长 254nm。柱温 25℃,流速 1.0ml·min-1。 张新奎等[15]采用 HPLC 法测定了生脉饮中五味子乙素的含量。色谱柱为十八烷基 键和硅胶柱(5μmm,4.6mm×250mm),流动相为甲醇-水(13∶28)7),检测波长 254nm,柱温 室温,流速 1.0ml·min-1。 1.5 综合类夏晶等[16] 建立了同时测定生脉注射液(红参、麦冬、五味子)中人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re、人 参皂苷 Rb1 和五味子醇甲 4 种成分含量的方法。方法:Waters510 高效液相色谱仪,色谱 柱 WaterssymmetryshieldTMRP18(5μmm,4.6mm×250mm),乙腈-水梯度洗脱,流速 1.0ml·min-1,检测波长为 203nm。 胡晓斌等[17]采用 HPLC 测定生脉胶囊中五味子甲素、乙素的含量,以控制成品的质 量。方法:采用 Shim-packODS 色谱柱,柱温 25℃,甲醇-水(78∶28)28)为流动相,流速 1.0ml·min-1,检测波长 254nm;并建立了生脉胶囊中人参皂苷 Rg1、Re 的 HPLC 含量测 定方法:样品超声提取,采用 LC-10AT 高效液相色谱仪,SPD-10Avp 紫外检测器,ShimpackODS 色谱柱,柱温 40℃,乙腈-0.05%磷酸(22∶28)78)为流动相,流速 1.2ml·min-1, 检测波长 203nm[18]。 何海冰等[19]采用 ODSC18 柱(5μmm,4.6mm×250mm),流动相为乙腈-水 (88∶28)12),流速 1.0ml·min-1,检测波长 204nm,柱温 30℃,对生脉粉针剂中的薯蓣皂 苷元进行含量测定。同时对五味子醇甲的 HPLC 含量测定方法进行了研究[20]。采用 HiQSilC18 柱(5μmm,4.6mm×250mm),流动相为乙腈-水(50∶28)50),流速 1.0ml·min1,检测波长 254nm,柱温 25℃。 2 分光光度法 何海冰等[20]采用紫外分光光度法对生脉粉针剂中总木脂素含量进行了测定。检测 波长 254nm。 张梅等[21]将样品经大孔树脂净化、显色剂的选择性显色后,使用 UV-210A 型紫 外可见分光光度计,采用正交函数分光光度法使得麦冬和五味子对人参总皂苷测定的影响 基本消除,测定了生脉注射液中人参总皂苷含量。 3 薄层扫描法 彭勃等[22]认为人参为生脉饮口服液中君药,故应以人参为定量对象,但因复方制 剂生脉饮在制成水剂时其内部成分发生了变化,人参皂苷 Rb1、Rb2、Rf、Rd、Re 均已 消失,而 Rg1、Rh1 的含量比单昧人参中明显增高,在生脉饮口服液中 Rg1、Rg2、Rh1、Rf 为人参皂苷中的主要皂苷,所以该实验采用薄层扫描法测定生脉饮 口服液中人参苷 Rg2 的含量,可以有效地控制产品质量。方法:CS-910 型薄层扫描仪, 薄层板为 0.3%CMC-Na 的硅胶 G 板(20cm×20cm×0.4mm)105℃活化 30min,展开剂为氯 仿-甲醇-水(65∶28)3∶28)10)10℃以下放置和下层溶液为好,人参皂苷 Rg2 为对照品, λs=525nms=525nm,λs=525nmR=700nm。 4 小结 综上所述,生脉制剂的含量测定主要采用高效液相色谱法,指标包括人参(红参或党 参)中的皂苷类成分;五味子中的五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素;麦冬中的薯蓣 皂苷元等,均取得较好效果并能有效控制制剂质量,而对大类成分研究较少。鉴于此,笔 者认为《中国药典》生脉饮制剂可以考虑增加含量测定项以更有效地控制制剂质量。目前, 国内外正积极开发研制其复合物、新制剂,通过提高和完善质量控制体系,特别是含量测 定方法的改进,对增强疗效,扩大应用范围具有重要意义。 【摘要】生物碱是许多中草药及药用植物的有效成分。如何从天然产物中提取与分离生物 碱,吸引了人们的广泛关注。传统的提取方法是建立在生物碱的理化性质基础上,有溶剂 提取法、直接提取法等。随着超声波、色谱技术、膜分离技术、超临界萃取技术以及酶学 技术的应用和发展,其提取与分离方法也不断地得以改进。随着对生物碱药用价值认识的 提高,生物碱的提取与分离方法将更加高效、迅速、完善。文章综述了近年来生物碱提取 分离的新方法。 【关键词】生物碱;分离;提取;纯化 生物碱是植物中含氮的碱性有机化合物,大都有明显的生理活性,所以常常是很多中 草药的有效成分。生物碱大多数来自植物界,以罂粟科、豆科、防己科、毛莨科等科的植 物中分布较多。生物碱含量一般都较低,大多少于 1%,长春花中的长春新碱含量只有百 万分之一[1]。而中草药所含成分十分复杂,既有有效成分,又有无效成分和有毒成分。 为了提高中草药的治疗效果,就要尽最大限度提取有效成分,去除无效成分及有毒成分。 因此,如何从天然产物中提取与分离生物碱,吸引了人们的广泛关注,其提取与分离方法 也不断地改进和发展。 1 生物碱的提取方法 1.1 传统的提取法 生物碱大都能溶于氯仿、甲醇、乙醇等有机溶剂,除季铵碱和一些分子量较低或含极 性基团较多的生物碱外,一般均不溶或难溶于水,而生物碱与酸结合成盐时则易溶于水和 醇。基于这种特性,可用不同的溶剂将生物碱从中药中提取[2,3]。包括有溶剂提取法、 直接提取法(水溶性生物碱、季铵碱)、离子交换树脂法(如麦角新碱类、东莨菪碱、咖 啡因等)和沉淀法。 1.2 超声波提取法 声化学的研究发展很快,已遍及到化学化工、药物提取等领域,受到了普遍的重视, 已证实超声辐射可增强提取成分的产额。药材在溶剂中受到超声波特有的作用——振动时 产生的空化效应,使生药粉中的细胞受空化泡瞬间崩溃所产生的力量,致使细胞壁破裂, 加速了溶剂进入细胞内部,在超声振动作用下,损伤细胞中的生物碱成分直接快速向溶剂 中溶解[4]。如用超声提取药材中的小檗碱,与常规的煎煮、浸泡提取法相比,超声的 空化作用大大加速了小檗碱成分的提取速度,还很好地保持了生物碱的特性和品质,同时, 也提高了小檗碱成分的提取[5,6]。 1.3 微波萃取微波萃取技术作为一种新型的萃取技术,有其独特的特点。主要是对极 性分子的选择性加热从而对其选择性的溶出。同时降低了萃取时间,提高了萃取速度。范 志刚等[7]比较了微波提取与常规煎煮方法,结果微波法麻黄碱的浸出量明显优于煎煮 法。邓远辉等[8]用微波提取黄连中小檗碱,结果表明在单位时间内微波处理较回流提 取具有明显优势。 1.4 酶法中药制剂的杂质大多为淀粉、果胶、蛋白质等,针对杂质可选用合适的酶予 以分解除去。酶反应较温和地将植物组织分解,可以较大幅度提高收率,故酶解不失为一 种最大限度从植物体内提取有效成分的方法之一。目前,用于中药提取方面研究较多的是 纤维素酶,大部分的中药材的细胞壁是由纤维素构成,植物的有效成分往往包裹在细胞壁 内;纤维素则是由 β-D-葡萄糖以 1,4-β 葡萄糖苷键连接,用纤维素酶酶解可以破坏 β-D葡萄糖键,使植物细胞壁破坏,有利于对有效成分的提取。马桔云等[9]选用黄连提取 小檗碱,研究了其加酶组和未加酶组对有效成分小檗碱提取的影响,两种工艺提取的小檗 碱含量有显著差异,而提取的成分一致。 1.5 半仿生提取法半仿生提取法简称 SB)E 法,是将整体药物研究法与分子药物研究法 相结合,从生物药剂学的角度,模拟口服给药及药物经胃肠道转运的原理,为经消化道给 药中药制剂设计的一种新的提取工艺。即将药料先用一定 pH 的酸水提取,继以一定 pH 的 碱水提取,提取液分别滤过、浓缩,制成制剂。这种新提取法可以提取和保留更多的有效 成分,能缩短生产周期,降低成本。张兆旺等[10~12]比较 SB)E 法和水提取法的提取 工艺,结果表明 SB)E 法可以提取和保留更多的有效成分,有可能替代水提取法。 2 生物碱的分离和纯化 一种植物中往往含有几种或几十种生物碱。因此,提取出来的总生物碱还需进一步分 离,去除杂质、排除干扰物,保证分析结果的准确性。 2.1 一般纯化的方法可析出结晶的生物碱用重结晶法;挥发性生物碱可用水蒸气蒸馏 法;易升华的生物碱用升华法提取得到单体。由不同沸点组成的液体生物碱总碱,往往可 通过常压或减压分馏分离。如毒芹中的毒芹碱和羟基毒芹碱,石榴皮中的伪石榴皮碱、异 石榴皮碱和甲基异石榴皮碱等都可通过减压分馏法分离出来[3]。许多生物碱的盐比游 离碱更易于结晶。因此,可利用其在各种溶剂中的不同溶解度进行分离,之后再转变成游 离碱[3]。 2.2 色谱法色谱法利用混合物组分在固定相中吸附和分配系数的微小差别,达到各组 分彼此分离的目的。优点是分离效率高,它能把各种性质极相似的组分彼此分离,而后分 别加以测定,因而是一类重要而常用且发展最快的分离手段,且对于那些用传统的分离方 法难以分离的物质以及热敏性物质,该方法具有明显的优越性。对苷类生物碱或极性较大 的生物碱,可用反相色谱或葡聚糖凝胶进行分离[13,14]。对于 PKαα 较大的生物碱,一 般多用离子对色谱,通过离子对试剂和生物碱形成中性络合物达到分离的目的[3]。 2.3 树脂吸附分离技术 树脂吸附是一种有效分离有效成分的途径。大孔吸附树脂是 20 世纪 60 年代末发展起 来的一类有机高聚物吸附剂,它具有多孔网状结构和较好的吸附性能。在对某些中药材或 者中药复方制剂中的有效成分进行定性、定量检测时,使用大孔吸附树脂可有效的除去某 些干扰成分,而取得较好的效果[15]。用大孔吸附树脂提取中草药有效成分优势显著, 提取苦豆子生物碱具有吸附快、解吸易、流体流动性能好,树脂寿命长,对环境、产品无污染 等独特优势,有利于规模化生产。 2.4 超滤法 超滤法是 20 世纪 60~70 年代发展起来的一种以多孔性半透膜——超滤膜作为分离介 质的膜分离技术。具有分离不同分子量分子的功能。超滤法优点在于不耗任何溶剂,操作 简单。虽然总生物碱纯度较低,但超滤液可以直接结合阴离子交换树脂进一步对生物碱进 行进一步纯化,减少了纯化过程中的许多中间步骤,且总生物碱的纯度高,树脂的污染小。 彭国平等[16]研究各材质超滤膜对不同中药成分的影响,结果表明生物碱类成分对膜超 滤有较强的选择性,可适用于水溶性较大成分的分离。 2.5 超临界萃取技术基于超临界流体的优良特性发展起来的超临界流体萃取(SFE)技 术被列为中药药效最佳提取分离技术,兼有精馏和液-液萃取的特点,操作参数易于控制, 溶剂可循环使用,特别适合于分离热敏性物质。虽然 SFE 技术也存在缺乏对超临界流体状 态本身的透彻理解,高压设备目前较昂贵,商业利益促使的专利保护等因素制约着该技术 的发展等,但超临界萃取技术仍是一种符合当代绿色潮流的洁净、高效提取技术。已报道 采用 SFE 技术萃取秋水仙根和光菇子(秋水仙碱)、益母草、荜茇(胡椒碱)等生物碱 [17,18]。 3 结束语 生物碱大多具有天然的生理活性,是多种中草药及药用植物的有效成分,对生物碱提 取、分离和纯化的研究,具有非常重要的意义。一方面,更多的具有独特药用价值的生物 碱不断被发现和应用;另一方面,伴随着科学技术的不断进步和发展,各种高效的、方便 快捷的方法不断涌现,各种生物碱独特效能的不断发掘及广泛应用。根据生物碱的性质, 选择具体的提取、分离和纯化方法,灵活运用各种提取、分离和纯化的原理,不断探索新 的提取、纯化的最佳条件,生物碱的提取分离技术将会得到更加深入的研究和开发。
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