妇月康胶囊中阿魏酸含量测定论文

【摘要】目的建立妇月康胶囊中阿魏酸的含量测定方法。方法采用 HPLC 法， uBondapakC18(4.0mm×250mm)柱，甲醇5%冰醋酸溶液（22∶7878）为流动相，检测波长 322nm。结果阿魏酸在 0.0725～0.2900μgg 范围内浓度与峰面积积分值呈良好的线性关系， r=0.9999(n=5)。平均回收率 99.46%，RSD 为 1.26%。结论该法简便、灵敏、准确，可用 于妇月康胶囊的质量控制。 【关键词】高效液相色谱法妇月康胶囊阿魏酸 DeterminationofFerulicAcidinFuyuekangCapsule Abstract： ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationofferulicacidinFuyuekangCapsules.Meth odsHPLCmethodwasusedinthequantitativeanalysisusingauBondapakC18(4.0mm×250m m)column.Themobilephasewasmethylalcohol5%glacialaceticacid(22∶7878)anddetectingwavelengthwas322nm.ResultsThecalibrationcurv ewaslinearintherangeof0.0725～ 0.2900μggforferulicacid(r=0.9999,n=5).Theaveragerecoverywas99.46%andRSDwas1.26% .ConclusionThismethodissimple,sensitive,accurateandavailableforthequalitycontrolofFuyu ekangCapsules. Keywords：HPLC；FuyuekangCapsule；Ferulicacid 妇月康胶囊是由当归、川芎、甘草（炙）、干姜（炭）、益母草、等 8 味中药组成， 其主要功能为活血、祛淤、止痛。用于产后恶露不行，少腹疼痛，也可试用上节育环后引 起的阴道流血，月经过多。当归为本方的君药之一，且当归、川芎的有效成分均为阿魏酸。 故选择阿魏酸作为控制该产品质量的定量指标，通过高效液相色谱法建立其含量测定方法。 1 仪器与试药 Model2000 二元高压梯度高效液相色谱系统（美国 SSI 公司），包括 Model500 型紫 外/可见可变波长检测器，LaballianceInstrumentSeriesⅣPumpPump，阿魏酸对照品（中国药品 生物制品检定所，含量测定用批号 07739809），妇月康胶囊（自制），水为重蒸馏水， 甲醇为色谱纯，冰醋酸等均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件色谱柱：uBondapakC18(4.0mm×250mm)；流动相：甲醇5%冰醋酸溶 液（22∶7878）；检测波长：322nm；流速：1.0ml/min；柱温：25℃；进样量：10μgl。 2.2 对照品溶液的制备 取阿魏酸对照品适量，精密称定，用甲醇制成每毫升含阿魏酸 14.5μgg 的溶液。 2.3 供试品溶液的制备 取本品内容物约 4.0g，精密称定，加甲醇甲酸（95∶785）溶液 40ml，超声处理 30min，放冷，滤过，用少量甲醇甲酸（95∶785）溶液分次洗涤容器和残渣，洗液滤过，合 并滤液，70℃水浴上蒸干，残渣加 30ml 水溶解，加盐酸调节 pH 值至 2～3，用乙醚提取 5 次，30ml/次，合并乙醚液，挥干，残渣用甲醇溶解，移置 10ml 量瓶中，并稀释至刻度， 摇匀，即得。 2.4 线性关系考察 分别精密吸取阿魏酸对照品溶液 5.0，7.5，10.0，12.5，15.0，20.0μgl 进样，按上述 色谱条件测定，以对照品量（X）为横坐标，峰面积值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得 阿魏酸回归方程：Y=3317067X＋11069.7（r=0.9999）。阿魏酸在 0.0725～0.2900μgg 范 围内与峰面积呈良好的线性关系。 2.5 精密度实验 精密吸取阿魏酸对照品溶液 10μgl，重复进样 5 次，测定峰面积值，RSD=1.43%，小 于 2%。 2.6 重现性实验取同一批号的样品 5 份，分别按上述方法测定含量。结果见表 1。表 1 重现性实验结果（略） 2.7 稳定性实验精密吸取同一供试品溶液,分别于 0，1，2，4，8h 后进样 10μgl，测定 阿魏酸峰面积，结果表明,供试品溶液在 8h 内稳定性良好,RSD 为 1.15%。 2.8 阴性对照实验 按照本品处方，取当归、川芎外的其余药材，按制备工艺要求，制成不含当归、川芎 的胶囊内容物，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液并测定。阴性溶液色谱中，与对 照品相应的位置上无干扰，见图 1。 2.9 回收率实验精密称取已知含量的样品 5 份，分别精密加入等量的阿魏酸对照品，按 供试品溶液制备方法制备并测定。结果见表 2。表 2 回收率测定结果（略） 2.10 样品测定依法测定样品 4 批次。结果见表 3。表 3 样品测定结果（略） 3 讨论［1，2］ 本实验经对阿魏酸对照品溶液进行紫外扫描发现,在 322nm 处有最大吸收,故选择 322nm 作为测定波长。通过对乙腈-0.085%磷酸溶液（17∶7883）、乙腈-2%冰醋酸 （20∶7880）、甲醇-5%冰醋酸(25∶7885)等多种流动相进行比较实验,发现甲醇-5%冰醋酸溶液 (22∶7878)的系统分离效果最好,且柱效高,故选择本系统为流动相。制备供试品溶液选择提取 溶媒时，曾对甲醇、甲醇-甲酸（95∶785）、醋酸乙酯和水进行了比较，其中用水提取，在乙 醚萃取时乳化现象严重，干扰测定。其余三种则以甲醇-甲酸（95∶785）提取效率最高,故提取 溶剂选择甲醇-甲酸（95∶785）溶液。但甲醇-甲酸（95∶785）提取液颜色较深干扰测定，故本研 究在此基础上，结合阿魏酸的理化性质，又进行初步纯化，用乙醚萃取。对萃取次数及超 声提取 20～40min 的结果进行比较,结果表明,超声 30min,萃取 5 次，阿魏酸即可提取完全。 【摘要】目的对峨嵋产黄连微量元素及重金属的初级形态进行分析。方法用火焰原子 吸收分光光度法测定了黄连中 Cu，Fe，Cr，Mn，Zn，Pb，Ca，Mg 的含量，并对其在水 煎液中的溶出率进行了研究。结果黄连中 Ca，Mg 的含量最高，同时含有丰富的 Fe，Mn 和 Zn，且 Mg，Zn，Mn 具有较高的溶出率；虽然重金属 Pb 的含量较高，但在可溶态中的 含量却很少。结论为进一步研究微量元素与中药疗效之间的关系提供了参考。 【关键词】黄连；微量元素；形态分析 StudyontheTraceElementsofEmeiCoptischinensis Abstract： ObjectiveToanalysetheprimaryspeciationoftraceelementsandheavymetalsinEmeiCoptisch inensis.MethodsAtomicabsorptionspectrophotometrywasusedtodeterminethecontentsofC u，Fe，Cr，Mn，Zn，Pb，Ca，MginCoptischinensis,andtheirsolutionratesindecoctionw erealsostudied.ResultsCa，MghadthehighestcontentsinEmeiCoptischinensis,Fe、Mnand ZnwererichandthedissolutionratesofMg，ZnandMnwerehigherthantheotherelements.Alth oughcontentsoftheheavymetalPbwashigh,thedissolvablestatewaspoor.ConclusionTherefe renceinformationforfurtherstudytherelationshipbetweenthetraceelementandtheefficacyofth etraditionalChinesemedicinehasbeenprovided. Keywords：Coptischinensis；Traceelement；Analysisofprimaryspeciation 黄连为毛茛科植物黄连 CoptischinensisFranch、三角叶黄连 CoptisdeltoideaC.Y.ChengetHsiao、云南黄连 CoptisteetoidesC.Y.Cheng 或峨嵋野连 Coptisomeiensis（Chen）C.Y.Cheng 的根茎。分别习称“味连”“雅连”“云连”和“凤尾连”。黄 连产于四川者统称川黄连，为道地药材，其中味连品质较佳，雅连更优，凤尾连最优，云 连品质不及川黄连。 黄连是清热燥湿药。现代药理研究表明，黄连对细菌、真菌以及病毒均有较好的拮抗 作用。近年来，黄连抗癌、降糖、调节免疫功能、改善心血管功能、降血压、抗血小板聚 集等功效不断被发现［1］。 黄连中的主要化学成分为原小檗碱型生物碱，已经分离出来的生物碱有小檗碱、巴马 丁、黄连碱、甲基黄连碱、药根碱、木蓝碱等，酸性成分为阿魏酸、氯原酸等。 近年来，中药有效成分中的无机微量元素正在日益受到重视。方清茂等［2］采用 AAS 法测定了土壤和所种植的黄连中 As，Pb，Cr，Hg 等元素含量的关系。王小逸等 ［3］采用 HRICPMS 法测定了黄连中与清热解毒有关的 Mg，Zn，Mn，Ca 的含量，同 时测定了生药中 16 种稀土元素。唐睿等［4］采用 ICPAES 法测定了黄连中 6 种被认为与 清热解毒作用相关的微量元素的含量。 本实验选用黄连主产地峨嵋产的黄连为研究对象，用火焰原子吸收分光光度法测定了 其中部分微量元素和重金属的含量，并研究了微量元素及重金属的初级形态，为进一步研 究微量元素与中药疗效之间的关系提供参考。 1 仪器与材料 1.1 仪器 361MC 型原子吸收分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)；DHG9240A9240A 电热恒温 鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；DL1 万用电炉（北京中兴伟业仪器有限公 司）；电子分析天平。 1.2 材料 去离子水（18.2MΩ·cm-1cm-1）；过氧化氢（优级纯天津市东方化工厂）；高氯酸（优级 纯成都化学试剂厂）；硝酸（优级纯成都化学试剂厂）； Cu，Fe，Cr，Mn，Zn，Pb，Ca，Mg 标准储备液（1000μgg/ml，使用时配制成所需浓 度）。 黄连（产于四川峨嵋川主，由宋良科副教授鉴定为 4 年生味连 CoptischinensisFranch.）；0.45μgm 滤膜。 2 方法 2.1 样品制备黄连药材冲洗干净后，再用去离子水冲洗 3 次，置于干燥箱中，65℃烘 6h，冷却后粉碎，过 40 目筛，得原药样品 A。 准确称取 25g 原药样品 A，用 250ml 去离子水浸泡 1h，煎煮 40min,四层纱布过滤， 得残渣 B 和头煎液 C；再加去离子水将残渣 B 煎煮 20min，过滤后得残渣 D 和二煎液 E； 将 C 与 E 混合，用 0.45μgm 滤膜过滤，分离出可溶态 F、颗粒物 G9240A。 分别准确称取 0.5g 样品 A，颗粒物 G9240A 和残渣 D，加入 HNO3-HClO4 混合酸 （1∶785）10ml，浸泡过夜，在电炉上加热消化，至溶液近干，冷却后加 1%HNO3，加热至 残渣溶解，冷却后定容至 25ml，备检。再取 40ml 可溶态样品 F，浓缩至 20ml 左右，加入 20mlHNO3-HClO4 混合酸（1∶785）按前述方法消化并定容至 25ml，备检。 2.2 样品分析原子吸收分光光度法测定，工作条件见表 1。表 1 微量元素的检测条件 （略） 取待测 8 种微量元素标准储备液，配制成标准系列溶液，测定各标准溶液吸光度，得 到工作曲线。各元素回归方程及相关系数见表 2。表 2 回归方程及相关系数（略） 按工作条件，用原子吸收分光光度法测定各备检液中的微量元素含量，同时做空白校 正。 3 结果 3.1 各形态微量元素含量测定结果见表 3。表 3 微量元素的含量测定结果（略） 3.2 水煎液的溶出率根据表 3 的测定结果，计算各微量元素的溶出率。结果见表 4。表 4 微量元素在水煎液中的溶出率（略） 4 讨论 从测定结果可以看出，原药材的 8 种微量元素中，Ca，Mg 的含量最高，同时含有丰 富的 Fe，Mn 和 Zn。这几种元素在一般清热解毒中药中均有较高的含量［5］。 Mg，Zn，Mn 具有较高的溶出率，而黄连药用时往往采取煎煮法，水溶性成分才是能 被人体吸收的成分。较高的提取率（41%-74%）提示：Mg，Zn，Mn 在黄连中可能以简单 无机盐或配合物的形态存在，或与黄连中的其它成分以相对松散的方式结合，更易被加热 破坏，因而易于溶出。据文献报道，糖尿病的预防和治疗与微量元素密切相关，近年来糖 尿病与微量元素 Zn，Cr 的代谢改变及机制的关系得到关注［6］，而在黄连中，Zn，Cr 的含量和溶出率均较高。因此，对于这些微量元素的作用，以及它们与黄连中有机成分的 协同作用、结合形式的进一步研究是必要的。 从表 3 可以看出，微量元素在原药材、可溶态、颗粒物和残渣中的含量差异较大。值 得关注的是黄连中的 Pb 含量很高，Pb 是影响黄连出口的一个重要因素，但 Pb 在可溶态 中的含量很少，表明 Pb 是以某种水难以溶解的状态存在的，它主要存在于颗粒物和残渣 中，Fe，Cu 元素亦如此，推测其中的 Pb，Fe，Cu 生成了某种难溶盐存在于残渣或以某 种形态(如氧化物、胶体)吸附或包藏于颗粒物中。