新生胶囊对肿瘤模型动物扶正祛邪论文

【摘要】目的验证新生胶囊扶正祛邪的主要药理作用。方法试验选用 ICR 小鼠、 BALB/C 品系裸鼠,建立 S180 肉瘤肿瘤模型和 MGC-803 肿瘤模型,观察口服灌胃新生胶囊 对肿瘤小鼠肿瘤的抑制作用,选用 S180 腹水肿瘤模型小鼠观察新生胶囊对小鼠生命存活时 间的影响。结果新生胶囊能显着抑制 S180 荷瘤小鼠和 BALB/C 裸鼠 MGC-803 移植瘤的生 长,与肿瘤模型组比较差异有显着性(P<0.05)P<0.05))。小鼠灌胃新生胶囊,对 S180 腹水肿瘤小鼠生 命存活时间与模型组比较差异无显着性(P<0.05)P>0.05))。但与环磷酰胺合用,可以延长 S180 腹水 肿瘤小鼠存活时间,生命延长率为 33.2%~38.86%,提示新生胶囊与环磷酰胺合用对 S180 腹 水小鼠存活时间有协同增效作用的趋势。新生胶囊还具有一定的扶正作用,对注射环磷酰胺 引起的小鼠免疫功能降低有一定的改善,对血流中碳粒的吞噬廓清能力有一定的增强作用。 提高吞噬指数(P<0.05)K),),增加血清溶血素含量,与模型组比较差异有显着性(P<0.05)P<0.05))。结论新生胶 囊具有一定的扶正祛邪、增强机体免疫功能的作用。 【关键词】新生胶囊;S180S180 肉瘤肿瘤模型;S180MGC-803 肿瘤模型;S180扶正祛邪 新生胶囊是由黄芪、乳香、没药等多味中药组成的中药复方制剂,具有清热解毒、活血 消症、散结止痛的功效,临床上用于食管癌、胃癌及恶疮肿毒等症的辅助用药。为验证其主 要药理作用,我们选用 ICR 小鼠、BALB/C 品系裸鼠,建立 S180 肉瘤肿瘤模型和 MGC-803 肿瘤模型,观察新生胶囊扶正祛邪的药理作用,并以参芪颗粒、注射用环磷酰胺为阳性对照, 试验结果如下。 1 材料 1.1 动物小鼠:ICRICR 品系,等级:ICRSPF(P<0.05)清洁级);S180裸鼠:ICRBALB/C 品系,等级:ICRSPF。由北京维通 利华实验动物技术有限公司提供。供给源许可证号:ICRSCXK),(P<0.05)京)2002-0003。 1.2 药物新生胶囊批号:ICR20040118,含量:ICR每克原药提取物相当 3.68g 生药。提供单位:ICR北 京中医药大学。注射用环磷酰胺生产单位:ICR江苏恒瑞医药股份有限公司,产品批 号:ICR0208211。临用时用生理盐水配成所需浓度。参芪颗粒生产单位:ICR江西山高制药有限公司, 临用时用 0.5)%羧甲基纤维素钠配成所需浓度。 1.3 瘤株小鼠 S180 瘤株由中医研究院中药研究所提供;S180小鼠 MGC-803 瘤株由中国医学 科学院肿瘤研究所动物室提供。 1.4 仪器与试剂 TU-1901 双光束紫外可见分光光度计,北京普析通用仪器有限责任公司 制造。 2 试验方法 2.1 祛邪作用的研究 2.1.1 对小鼠 S180 肉瘤瘤体生长的影响[2]肿瘤模型建立于超净工作台中,取 S180 肉瘤 瘤液,以生理盐水稀释,显微镜下计算 1ml 瘤液中活体瘤细胞数,用生理盐水稀释成所需浓度 (P<0.05)1.6×107 个/ml),按每只小鼠 0.2ml 接种于右腋皮下。 取上述健康 ICR 品系小鼠 75) 只(P<0.05)每次同性别),体重 19~21g,无菌条件下,于右侧腋下接 种上述配置的 S180 肿瘤瘤液 0.2ml,24h 后随机分成 5) 组,模型组,新生胶囊大、中、小剂量 组,环磷酰胺阳性对照组,每组 15) 只(P<0.05)分组和给药剂量见表 1)。每天各组小鼠灌胃相应药物 0.5)ml/20g,连续给药 8 天。阳性对照组小鼠隔日腹腔注射环磷酰胺 20mg/kg。共 4 次,模型 组灌胃同体积 0.5)%羧甲基纤维素钠溶液。于末次给药 24h 后处死小鼠,称体重并剥离皮下 瘤块,称瘤重,计算各组瘤体重量,并按下列公式计算抑瘤率,以抑瘤率>30%为有效。 抑瘤率=(P<0.05)1-T/C)×100%(P<0.05)T 为给药组瘤重,C 为对照组瘤重) 以上实验重复 3 批。表 1 新生胶囊对 S180 肉瘤瘤体生长的影响注:ICR与模型组比 较,**P<0.01,*P<0.05) 2.1.2 对 BALB/C 小鼠 MGC-803 肉瘤瘤体生长的影响[2]取上述健康 BALB/C 品系雌性 裸鼠 5)0 只,体重 13~16g,无菌条件下,于右侧肩后接种 MGC-803 肉瘤瘤块 3mm×3mm±2mm,24h 后随机分成 5) 组:ICR模型组,新生胶囊大、中、小剂量组,环磷酰胺阳性 对照组,每组 10 只(P<0.05)分组和给药剂量见表 2)。每天各组小鼠灌胃相应药物 0.1ml/20g,连续给 药 25) 天。阳性对照组小鼠每隔 6 天腹腔注射环磷酰胺 20mg/kg,共连续 4 次,模型组小鼠灌 胃同体积 0.5)%羧甲基纤维素钠溶液。于末次给药 24h 后处死小鼠,称体重并剥离皮下瘤块, 称瘤重,计算各组瘤体重量,并按下列公式计算抑瘤率,以抑瘤率>30%为有效。 抑瘤率=(P<0.05)1-T/C)×100% (P<0.05)T 为给药组瘤重,C 为对照组瘤重) 以上实验重复 2 次。表 2 新生胶囊对 MGC-803 肉瘤瘤体生长的影响注:ICR与模型组比较, *P<0.05),**P<0.01 2.1.3 对 S180 腹水肿瘤小鼠生命存活时间的影响[1]取上述健康 ICR 小鼠 75) 只,按体重 随机分为 5) 组,无菌条件下,以生理盐水稀释 S180 腹水肿瘤细胞(P<0.05)1.2×107 个/ml),每只小鼠腹 腔注射 S180 肿瘤腹水液 0.2ml,24h 后按体重随机分为 5) 组(P<0.05)分组、给药剂量及方法同 2.1.1),连续给药 14 天,观察记录各组小鼠存活的天数,并计算生存率。以上实验重复 3 次。 见表 3。表 3 新生胶囊对 S180 腹水肿瘤小鼠存活时间的影响注:ICR与模型组比较,**P<0.01 2.2 扶正作用的研究(P<0.05)对小鼠免疫功能的影响) 2.2.1 对荷瘤小鼠免疫器官重量的影响取上述健康 ICR 雌性小鼠 60 只,体重 20~22g,无 菌条件下,于右侧腋下接种 S180 肿瘤细胞(P<0.05)1.6×107 个/ml)0.2ml,24h 后随机分成 5) 组:ICR模型 组,新生胶囊大、中、小剂量组,环磷酰胺阳性对照组,每组 12 只(P<0.05)分组、给药剂量见表 4)。 另设一组空白对照组,每天各组小鼠灌胃相应药物 0.5)ml/20g,连续给药 8 天。阳性对照组小 鼠隔日腹腔注射环磷酰胺 20mg/kg。共 4 次,模型组和空白对照组灌胃同体积 0.5)%羧甲基 纤维素钠溶液。于末次给药 24h 后处死小鼠,解剖,称取胸腺、脾脏重量,按下列公式计算器 官系数。 胸腺指数=胸腺(P<0.05)mg)/体重(P<0.05)g) 脾指数=脾脏(P<0.05)mg)/体重(P<0.05)g)表 4 新生胶囊对荷瘤小鼠免疫器官的影响注:ICR与模型组比 较,**P<0.01;S180与空白组比较,△△P<0.01 2.2.2 对小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响[3](P<0.05)小鼠碳粒廓清法)取健康 ICR 品系小鼠 78 只,雌雄各半。按体重随机分为 6 组(P<0.05)分组及给药剂量见表 5)),各组小鼠每天分别灌胃相应 药物 0.5)ml/20g 体重,连续 14 天。除空白对照组外,其余各组小鼠分别于给药后第 8 天、10 天小鼠腹腔注射环磷酰胺 100mg/kg,造成小鼠免疫功能低下模型,于末次给药后 1h,每只小 鼠尾静脉注射印度墨汁 0.1ml/10g 体重,分别于注射后 1min、5)min 从小鼠眼静脉丛取血 20μl,l,溶于 2.5)ml0.1%Na2CO3 溶液中摇匀,照分光光度法,在 680nm 处测定吸收度(P<0.05)OD))值, 最后将小鼠颈椎脱臼处死,分别称取肝脾重量。按下列公式计算廓清指数(P<0.05)K),)和校正廓清指 数(P<0.05)a)进行统计学计算。 K),=logOD)1-logOD)2T2-T1 ɑ=3K),×体重/(P<0.05)肝重+脾重)表 5) 新生胶囊对小鼠 RES 吞噬功能的影响注:ICR与空白对照组比 较,△△P<0.01;S180与模型组比较,*P<0.05) 2.2.3 小鼠体液免疫功能的影响(P<0.05)溶血素法)取健康 ICR 品系小鼠 78 只,雌雄各半。按体 重随机分成 6 组(P<0.05)分组、给药剂量见表 6),每组 13 只。各组小鼠每天分别灌胃相应药物 0.5)ml/20g 体重,模型组、空白对照组灌胃同体积 0.5)%CMC-Na 溶液,连续给药 14 天。于给 药后第 7 天,各组按 0.2ml/只腹腔注射 5)%鸡红细胞生理盐水混悬液进行免疫。第 8 天、10 天除空白对照组小鼠外其他各组小鼠每只腹腔注射环磷酰胺 100mg/kg,造成小鼠免疫功能 低下模型。并于免疫后第 7 天,各组动物取血,将血清稀释 100 倍。取稀释血清,与 5)%鸡红细 胞、10%豚鼠血清(P<0.05)补体)作用后,离心,取上清液于 5)40nm 处测定光密度(P<0.05)OD) 值),各组进行比 较,进行统计学计算。表 6 新生胶囊对小鼠血清溶血素含量的影响注:ICR与空白组比 较,△△P<0.01;S180与模型组比较,*P<0.05),**P<0.01 2.3 增效作用的研究(P<0.05)与环磷酰胺合用对 S180 腹水小鼠存活时间的影响)取上述健康 ICR 小鼠 90 只,按体重随机分为 6 组,无菌条件下,以生理盐水稀释 S180 腹水肿瘤细胞 (P<0.05)1.2×107 个/ml),每只小鼠腹腔注射 S180 肿瘤腹水液 0.2ml,24h 后按体重随机分为 6 组,模 型组,新生胶囊大、中、小剂量组,环磷酰胺 5)mg/kg、20mg/kg 剂量组,各组每天灌胃给药 (P<0.05)药剂量及方法同 2.1.1),同时新生胶囊各组隔日腹腔注射环磷酰胺 5)mg/kg 体重,连续 14 天, 观察记录各组小鼠存活的天数。以上实验重复 2 次。 2.4 统计学方法以 SPSS 统计软件,进行统计学处理。实验结果用平均值±标准差(P<0.05)x±s)) 表示,组间差异用 t 检验。 3 试验结果 3.1 祛邪作用的研究(P<0.05)抗肿瘤作用研究) 3.1.1 对小鼠 S180 肉瘤瘤体生长的影响试验结果表明:ICRS180 肿瘤模型小鼠口服新生胶 囊大、中剂量组能显着抑制 S180 移植瘤的生长,与肿瘤模型组比较差异有显着性 (P<0.05)P<0.01)。结果见表 1。 3.1.2 对 BALB/C 小鼠 MGC-803 肉瘤瘤体生长的影响试验结果表明:ICRMGC-803 肿瘤模 型小鼠口服新生胶囊大、中剂量组能显着抑制 BALB/C 小鼠 MGC-803 移植瘤的生长,与肿 瘤模型组比较差异有显着性(P<0.05)P<0.05))。结果见表 2。 3.1.3 对 S180 腹水肿瘤小鼠生命存活时间的影响试验结果表明:ICRS180 腹水肿瘤小鼠口 服新生胶囊小鼠的存活时间与模型组比较差异无显着性(P<0.05)P>0.05))。注射环磷酰胺组小鼠与 模型组比较差异有显着性(P<0.05)P<0.01),结果见表 3。 3.2 扶正作用的研究(P<0.05)对免疫功能的影响) 3.2.1 对荷瘤小鼠免疫器官重量的影响试验结果表明:ICR与模型对照组比较,新生胶囊大、 中、小剂量对荷瘤小鼠胸腺、脾脏重量,差异无显着性(P<0.05)P>0.05))。结果见表 4。 3.2.2 对小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响(P<0.05)小鼠碳粒廓清法)试验结果表明:ICR小鼠灌胃新 生胶囊 3.15)g 生药/kg、1.5)8g 生药/kg14 天后,对环磷酰胺引起的免疫功能低下,有提高 K), 值 (P<0.05)廓清指数)的作用,与模型组比较差异有显着性(P<0.05)P<0.05)),结果见表 5)。 3.2.3 对小鼠体液免疫功能的影响(P<0.05)溶血素法)试验结果表明:ICR小鼠口服新生胶囊 3.15)g 生 药/kg、1.5)8g 生药/kg、0.79g 生药/kg,可提高血清溶血素含量,与模型组小鼠比较差异有显 着性(P<0.05)P<0.05)),结果见表 6。 3.3 增效作用的研究(P<0.05)与环磷酰胺合用对 S180 腹水小鼠存活时间的影响)结果表明:ICR新生 胶囊大剂量组小鼠合用环磷酰胺 5)mg/kg,生命延长率为 33.2%,38.86%提示新生胶囊与环磷 酰胺合用对 S180 腹水小鼠存活时间有协同增效作用的趋势。结果见表 7。表 7 新生胶囊与 环磷酰胺合用对 S180 腹水肿瘤小鼠存活时间的影响注:ICR与模型组比较,*P<0.05),**P<0.01 4 小结 新生胶囊是由黄芪、乳香、没药、重楼、人工麝香等中药组成的复方制剂,具有清热解 毒、活血消症、散结止痛的功效,临床上将用于食管癌、胃癌及恶疮肿毒等症的辅助用药。 动物试验表明:ICR(P<0.05)1)新生胶囊具有一定的祛邪作用。大、中剂量组能显着抑制 S180 荷瘤小鼠 和 BALB/C 小鼠 MGC-803 移植瘤的生长,与肿瘤模型组比较差异有显着性(P<0.05)P<0.05))。(P<0.05)2)小 鼠灌胃新生胶囊,对 S180 腹水肿瘤小鼠生命存活时间与模型组比较差异无显着性 (P<0.05)P>0.05))。但小鼠灌胃新生胶囊 3.15)g/kg 同时注射环磷酰胺 5)mg/kg 可以延长 S180 腹水小 鼠存活时间,生命延长率为 33.2%~38.86%,提示新生胶囊与环磷酰胺合用对 S180 腹水小鼠 存活时间有一定协同增效作用趋势。(P<0.05)3)新生胶囊具有一定的扶正作用。小鼠灌胃新生胶囊, 对注射环磷酰胺引起的免疫功能降低有一定的改善作用,对血流中碳粒的吞噬廓清能力有一 定的增强作用。提高吞噬指数(P<0.05)K),)、增加血清溶血素含量,与模型组比较差异有显着性 (P<0.05)P<0.05))。 5) 讨论 肿瘤,尤其是恶性肿瘤是危害人民健康的重大疾病之一,临床上对肿瘤的治疗,无论是放 疗或是化疗,都有一定的副作用,给患者带来痛苦和肌体免疫力的下降,新生胶囊是中药复方 制剂,具有清热解毒、活血消症、散结止痛的功效,动物试验也表明具有一定的扶正祛邪、增 强机体免疫功能的作用。这对于临床上治疗肿瘤,减少放化疗带来的痛苦又增加了新的治疗 途径。