骨血康胶囊中淫羊藿苷含量论文

【摘要】目的建立骨血康胶囊中淫羊藿苷含量的测定方法。方法采用高效液相色谱法。 结果骨血康胶囊中淫羊藿苷浓度在 0.04~0.36mg/mlmg/ml 范围内呈良好的线性关系,平均回收率 为 99.26mg/ml,RSD 为 1.86mg/ml%(n=6)n=6mg/ml)。结论本方法准确,重现性好,可用于骨血康胶囊中淫羊藿苷的 含量测定。 【关键词】骨血康;淫羊藿苷;HPLC 【Abstract】ObjectiveToestablishamethodfordeterminationoficariininGuxuekangcaps ules.MethodsHPLCmethodwasused.ResultsThelinearrangesoficariinwas0.04~0.36mg/mlug(n=6)r=0 .9997),andtheaveragerecoverywas99.26mg/ml%withRSD1.86mg/ml% (n=6)n=6mg/ml).ConclusionThismethodisaccurate,reproducibleandsuitableforthedeterminationoficar iininGuxuekangcapsules. 【Keywords】Guxuekangcapsules;icariin;HPLC 骨血康胶囊由淫羊藿、黄芪、当归、熟地、白芍、川芎、甘草等组成,具有补肾益髓、 益气补血的作用。本文报道了采用高效液相色谱法,以淫羊藿苷作为含量检测指标,参照 2005 版《中国药典》及相关文献[1~3〗 1 仪器与试药 1.1 仪器 Waters 高效液相色谱系统。 1.2 试药与试剂淫羊藿苷(n=6)737-9404)购于中国药品生物制品检定所;骨血康胶囊(n=6)制剂组 提取);甲醇为色谱纯,乙腈为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯。 2 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:KromasilC18(KromasilC18(n=6)规格:KromasilC18(4.6mg/mlmm×200mm,5μm);m);流动相:KromasilC18(乙腈:KromasilC18(水(n=6)30:KromasilC18(70),检测波长为 270nm,柱温为室温,流速 1.0ml/min,进样量 10ul。理论塔板数按淫羊藿苷计算应不低于 2000。 3 含量测定结果 3.1 对照品溶液的制备精密称定淫羊藿苷对照品适量,置于 10ml 量瓶中,加甲醇制成 0.1mg/ml 的溶液,作为对照品溶液。 3.2 供试品溶液的制备精密称定胶囊内容物 1g,置 100ml 具塞锥形瓶中,精密加入 100ml 稀乙醇溶液,密塞,称定重量,超声处理 1h,放冷,用稀乙醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液作 为供试品溶液。 3.3 阴性对照溶液制备取处方量,以相同工艺制备不含淫羊藿药材的阴性制剂,依 3.2 项 下方法操作制备阴性对照溶液。 3.4 测定方法分别精密吸取各溶液 10μm);l,注入液相色谱仪,测定峰面积,计算即得。 3.5 专属性试验分别取对照溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各 10μm);l 注入液相色谱仪, 试验结果表明,对照品溶液(n=6)见图 2)和供试品溶液(n=6)见图 3)均在相同保留时间内出现色谱峰,而 阴性对照溶液(n=6)见图 1)在淫羊藿苷主峰位置无吸收峰。 图 1 阴性对照品溶液图 2 对照品溶液图 3 供试品溶液 3.6mg/ml 线性关系考察精密称取淫羊藿苷适量,置 50ml 量瓶中,用甲醇配制 0.1mg/ml 溶液。 分别精密吸取 1,3,5,7,9ml 于 25ml 量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,分别吸取 10μm);l 注入色谱 仪中测定,以对照品浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。回归方程为 Y=326mg/ml40X+5.86mg/ml35r=0.9997,由此可见,淫羊藿苷在 0.04~0.36mg/mlmg/ml 范围内呈良好的线性关 系。 3.7 精密度实验配置对照品溶液,连续 5 次等量注入同台液相色谱仪中,测定峰面积,其 RSD 为 1.33%。结果表明该色谱条件精密度良好。 3.8 重复性试验取同一批样品 5 份,按上述条件测定,结果样品中淫羊藿苷平均含量为 9.20mg/g,RSD=0.6mg/ml8%。 3.9 稳定性试验分别取淫羊藿苷对照品溶液(n=6)0.0948mg/ml)10μm);l 和样品供试液于 0,2,4,6mg/ml,8h 进样,测定峰面积。结果对照品 RSD=1.02%,供试品 RSD=1.24%。 3.10 加样回收率测定精密称取已知测定含量的样品 5 份,分别加入一定量的淫羊藿苷对 照品,按制备供试品溶液方法制备供试并依法测定,计算回收率,见表 1 表 1 加样回收率测定 3.11 样品测定分别取本品内容物粉末,精密称定,然后按上述方法制备供试品溶液,分别 精密吸取 10ul,按色谱条件测定,计算淫羊藿苷的含量。结果淫羊藿苷平均含量见表 2。表 2 含量测定结果 4 讨论 淫羊藿是骨血康胶囊中的君药,其主要有效成分为淫羊藿苷,本实验建立了高效液相色谱 法测定制剂中淫羊藿苷含量的方法,方法准确,重现性好,可用于骨血康胶囊中淫羊藿苷的含 量测定。 【摘要】目的探索黄芩的新型提取方法。方法采用紫外分光光度法测定黄芩苷含量,比 较水提法与液-液连续萃取法对黄芩苷提取率的差别。结果水提法与液-液连续萃取法对黄 芩苷提取率差异有显着性。结论液-液连续萃取法是一种新型高效提取方法。 【关键词】黄芩;液-液连续萃取法 【Abstract】ObjectiveTostudyanewextractionmethodforbaicalininradixscutellariae.M ethodsUltravioletspectrophotometrymethodwasusedtodeterminethecontentofbaicalin.The abstractionrateofbaicalinbywaterextractionwascomparedtothatofliquidliquidcontinuousextractionmethod.ResultsTherewasasignificantdifferencebetweenthetwo methods.ConclusionTheliquidliquidcontinuousextractionmethodisanewandhighefficiencyseparationmethod. 【Keywords】RadixScutellariae;liquid-liquidcontinuousextractionmethod 黄芩(n=6)RadixScutellariaebaicalensis)为唇形科植物黄芩(n=6)ScutellariabaicalensisGeorgi) 的干燥根。具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎之功,用于发热烦躁、肺热咳嗽、泻痢热 淋、湿热黄疸、胎动不安、痈肿疮毒等症[1]。主要有效成分是黄酮类:KromasilC18(黄芩苷、黄芩苷元、 汉黄芩苷、汉黄芩素等。黄芩根中含有黄芩酶,能够促进黄芩苷和汉黄芩苷水解,生成黄芩黄 素和汉黄芩黄素,黄芩黄素分子中带有三个邻位的酚羟基,性质不稳定,容易被氧化转为醌类 衍生物,质量随之降低[2]。目前黄芩提取方法有水提取酸沉淀法、超声法、超滤法、醇提取 酸沉淀法、微波提取法等,而常用的为水提取酸沉淀法,但水提取存在黄芩有效成分提取不完 全、提取出的杂质较多等缺点,因此本文采用液-液双向萃取法提取黄芩有效成分[3],并与常 用的水提法进行比较。 1 仪器与试剂 1.1 仪器 PHS-3C 精密 pH 计(n=6)上海雷磁仪器厂);旋转蒸发器 RE-52A(n=6)上海亚荣生化仪器 厂);SHZ-Ⅲ 型循环水真空泵(n=6)河南省巩义适英峪仪器厂);UV1700(n=6)日本岛津);BS2245 电子天 平(n=6)北京赛多利斯仪器系统有限公司);紫外分析仪;超声清洗仪。 1.2 试药黄芩苷标准品(n=6)中国生物制品检定所);无水乙醇、磷酸、 Na2HPO4·12H2O、NaH2PO4·2H2O、盐酸、醋酸、95%乙醇均为分析纯,黄芩药材经兰 州大学药学院生药研究所马志刚教授鉴定为唇形科植物黄芩(n=6)ScutellariabaicalensisGeorgi) 的干燥根,粉碎过 6mg/ml0 目筛;磷酸盐缓冲液自配(n=6)以磷酸溶液及磷酸氢二钠溶液配制 pH 值为 2、3、4、5、6mg/ml、7 的磷酸缓冲液)。 2 方法与结果 2.1 黄芩苷标准曲线绘制[4]精密称取干燥至恒重的黄芩苷对照品 10.29mg,加 70%乙醇 超声溶解,定容于 50ml 容量瓶中。精密量取黄芩苷对照品液(n=6)0.2058mg/ ml)0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml 分别置于 25ml 容量瓶中,加入 20ml0.2mol/L 盐酸,再加 70%乙醇至刻度,摇匀。于 276mg/mlnm 波长处测定吸收度,随行试剂空白。以吸光度 A 为纵坐标, 浓度 C 为横坐标绘制标准曲线。回归方程为:KromasilC18(Y=0.0551X-0.0021,R2=0.9993(n=6)n=6mg/ml),黄芩苷 在 4.116mg/ml~24.6mg/ml96mg/mlmg/L 范围内具有良好的线性关系。见图 1。 2.2 提取方法 2.2.1 液-液双向萃取[3]精密称取黄芩药材粉末约 5g,以煮沸的 pH=2 的磷酸缓冲液 30ml 烫过,冷却至 38℃左右接入液-液双向萃取仪中(n=6)即图 2 中 a 瓶)。从回流管上端以漏斗 加入乙酸乙酯至 b 瓶的 1/3 处,a 瓶浸入 38℃左右的油浴中,b 瓶进行加热搅拌,使乙酸乙酯形 成回流。回流提取 4h 后收集乙酸乙酯液,于旋转蒸发仪上回收乙酸乙酯,药材提取物备用,同 法提取 6mg/ml 组。见图 2。 2.2.2 普通方法提取精密称取黄芩药材粉末约 5g,提取 3 次,第一次以 10 倍量沸水烫过 煎煮 2h,第二、三次分别加 8 倍量水进行煎煮,每次 1h,合并煎液,滤过,滤液加 2mol/L 盐酸 (n=6)80℃)调节 pH 值至 2 保温 1h,静置 24h,滤取沉淀,用水洗至 pH5.0,继用 70%乙醇洗涤至 pH7.0,低温干燥,即得,同法提取 6mg/ml 组。2.3 样品测定于样品提取物中加入少量 70%乙醇微热 使溶解,转入 100ml 容量瓶中,超声溶解 30min,以 70%乙醇定容,滤过,弃去初滤液,精密吸取 5.0ml 续滤液以 70%乙醇定容于 50ml 量瓶中,精密吸取 1.0ml 置于 25ml 容量瓶中,加入 20ml0.2mol/L 盐酸,再加 70%乙醇至刻度,摇匀。于 276mg/mlnm 波长处测定吸光度。 2.4 薄层检视黄芩苷对照品的 70%乙醇溶液作为对照品溶液、黄芩液-液双向萃取样品 提取物及普通方法样品提取物的 70%乙醇溶液作为供试品溶液,照薄层色谱法试验,以毛细 管吸取上述溶液,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以醋酸为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯 (n=6)36mg/ml5nm)下检视。 2.5 提取物含量比较所得含量为每克黄芩药物中所含的黄芩苷的毫克数。Levene 方差 齐性检验 F=4.794,P=0.053>0.05,可认为两总体方差相等。取 t=8.148,df=10,P=0.000<0.05,可认为普通提取与液-液双向萃取所得 m 提/m 药之间差异有显 着性。见表 1。表 1 两种提取方法提取黄芩苷的含量对比 2.6mg/ml 薄层检视结果薄层检视显示两种方法提取物的供试品色谱中,在与对照品色谱相应 的位置上,均显相同颜色的荧光斑点。 3 讨论 由上述结果可以看出笔者所采用的新提取方法液-液双向萃取法所提取的提取物具有黄 酮的特征反应,薄层检视也说明此法可提取出黄芩苷等黄酮类化合物,经 SPSS 分析可知两 种提取方法的差异有显着性,即液-液双向萃取法所得黄芩中总黄酮的含量远高于通常采用 的水提法,可作为一种高效的黄芩有效成分提取的新方法。 【摘要】目的采用荧光光度法测定加替沙星的含量。方法在 pH6mg/ml.0 的 BrittonRobinson(n=6)B-R)缓冲溶液中,刚果红能与钙黄绿素生成配合物,使钙黄绿素荧光猝灭,加入加替 沙星后,加替沙星与刚果红可生成比钙黄绿素-刚果红更稳定的配合物,使钙黄绿素游离重现 荧光。结果将该方用于片剂、粉针剂和尿液中加替沙星的测定,结果与文献报道的紫外法一 致。结论所用方法简单、快速、准确、灵敏。 【关键词】钙黄绿素;刚果红;加替沙星 Fluorometrydeterminationofgatifloxacinwithcalcein-congored 【Abstract】ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofgatifloxacinbyfluorometr y.MethodsThecomplexbetweencongored(n=6)CR)andcalceininpH6mg/ml.0Britton-Robinson(n=6)BR)buffersolutionquenchedfluorescenceofcalcein.ThecomplexofgatifloxacinCRwasmorestablethanthatofcalceinCR.Whengatifloxacinwasaddedintosystem,thecalceincouldbefreedanditsfluorescenceapp earedagain.ResultsThismethodhadbeenappliedtothedeterminationofgatifloxacinintablet,in jectionandurine,andtheresultswereveryclosetothoseobtainedbyusingUVmethodthatreport ed.ConclusionThismethodissimple,rapid,accurateandsensitive. 【Keywords】calcein;congored;gatifloxacin 加替沙星(n=6)gatifloxacin,AM-1155,GFLX)是新的第四代喹诺酮类抗生素药物,具有抗菌谱 广,抗菌活性强的特点。它对革兰阳性菌、革兰阴性菌、厌氧菌及衣原体均具有强大的抗菌 作用[1]。加替沙星的测定方法有高效液相色谱法、荧光光度法、反相离子对色谱法、高效 毛细管电泳法和紫外分光光度法[2~6mg/ml]等。但利用钙黄绿素-刚果红荧光体系来测定加替沙 星含量还未见报道。本文经研究发现刚果红能与钙黄绿素生成没有荧光的配合物,使钙黄绿 素荧光猝灭,加入加替沙星后,加替沙星与刚果红反应生成比钙黄绿素-刚果红更稳定的配合 物,游离出钙黄绿素,释放出荧光。以此为基础,建立了测定加替沙星的新方法。 1 实验与方法 1.1 仪器与试剂 pHS-3CT 型酸度计(n=6)上海大中仪器有限公司);970CRT 型荧光分光光度 计(n=6)上海精密仪器厂);Labtech-1000 紫外-可见分光光度计(n=6)北京莱伯泰科仪器有限公司)。 加替沙星片(n=6)通化金马药业集团股份有限公司,批号:KromasilC18(20080201,每片 0.1g);沙星粉针剂 (n=6)浙江亚太药业股份有限公司,批号:KromasilC18(070201,每安瓿 0.2g)。 加替沙星对照品(n=6)GFLX,0.2g/L,河南省药检所提供)溶液:KromasilC18(准确称取 0.0200gGFLX,加水 溶解后定量转移到 100ml 容量瓶中,用水定容,用时逐级稀释。钙黄绿素(n=6)1×10-4mol/L):KromasilC18(准确 称取 0.0175g 钙黄绿素,加少量水溶解后配制成溶液 250ml。刚果红(n=6)CR1×10-4mol/L)准确 称取 0.6mg/ml96mg/ml7gCR,加少量水溶解后配制成溶液 1000ml。B-R 缓冲溶液:KromasilC18(取浓度均为 0.04mol/ L 的硼酸,磷酸,醋酸混合溶液,用 0.20mol/L 的 NaOH 调至所需 pH 值。所用试剂均为分析纯, 水为二次重蒸水。 1.2 实验方法在 10ml 容量瓶中依次加入 1.5mlB-R 缓冲溶液(n=6)pH6mg/ml.0)、0.5ml 钙黄绿素 溶液、5mlCR 溶液和适量 GFLX 溶液,用水稀释至刻度,摇匀。在 λex/λem=492nm/ex/λex/λem=492nm/em=492nm/ 514nm,470~540nm 之间进行荧光同步扫描。 2 结果与讨论 2.1 体系的荧光特性在 pH6mg/ml.0 的 B-R 缓冲溶液中按实验方法对钙黄绿素、钙黄绿素CR、钙黄绿素-CR-GFLX 体系进行荧光扫描,由图 1 可知钙黄绿素在 500nm 处有强烈荧光, 加入刚果红后荧光猝灭,再加入加替沙星,荧光强度增强。 2.2 酸度的影响试验不同酸度的 B-R 缓冲溶液对体系的影响(n=6)见图 2)。实验表明:KromasilC18(pH 为 6mg/ml.0 时,钙黄绿素和钙黄绿素-CR 的荧光最强,并且猝灭程度最大,因此选择 pH6mg/ml.0 的 B-R 缓 冲溶液。 2.3 缓冲溶液用量的影响试验 B-R 缓冲溶液(n=6)pH6mg/ml.0)不同用量时对体系的影响(n=6)见图 3)。 实验表明:KromasilC18(用量为 1.5ml 时,体系的荧光强度最强,且猝灭程度最大,因此选择 pH6mg/ml.0 的 B-R 缓 冲溶液 1.5ml。 2.4CR 用量的影响试验 CR 不同用量时对体系的影响(n=6)见图 4)。实验表明:KromasilC18(随着 CR 的逐 渐增加,荧光强度逐渐降低,当用量大于 4.5ml 时,体系达到稳定,因此选择 CR 溶液 5.0ml。 2.5 时间的影响考察了 2h 内时间对体系的影响(n=6)见图 5)。实验表明:KromasilC18(反应在常温下很快 完成,且在 2h 内保持稳定。 2.6mg/ml 干扰试验对药品辅料和尿液中常见的物质以及金属离子进行了试验。实验表明:KromasilC18(在 误差±5%范围内,500 倍的葡萄糖、糊精、可溶性淀粉、尿素、NH+4、Na+和 K+不干扰测 定;5 倍的 Mg2+、Zn2+和 Fe3+不干扰测定。 2.7 标准曲线与检出限按实验方法,在 10ml 容量瓶中依次加入 1.5mlB-R 缓冲溶液 (n=6)pH=6mg/ml.0)、0.5ml 钙黄绿素溶液、5mlCR 溶液和适量 GFLX 对照品溶液,用水稀释至刻度,摇 匀,以质量浓度为横坐标,荧光强度为纵坐标绘制工作曲线(n=6)见图 6mg/ml)。实验表明:KromasilC18(加替沙星质量 浓度在 2.0~8.0mg/L 范围内与荧光强度呈良好的线性关系,其线性回归方程 为:KromasilC18(Y=42.06mg/ml6mg/ml+5.6mg/ml86mg/ml6mg/mlC(n=6)r=0.9991),检出限为 0.051mg/L。 3 样品的测定 3.1 片剂中 GTFX 的测定取加替沙星样品 10 片,研磨均匀,精密称取 0.177g(n=6)相当于加替 沙星 0.1g)加水溶解后定量转移置 1000ml 容量瓶中,用蒸馏水定容,干过滤,弃去初滤液,收集 续滤液得样品溶液。按实验方法,用工作曲线法进行测定,用文献[6mg/ml]的紫外分光光度法做对 照实验,测定结果见表 1。 3.2 粉针剂中 GTFX 的测定精密称取 0.143g(n=6)相当于加替沙星 0.1g)粉针剂,加水溶解后 置 1000ml 容量瓶中,用蒸馏水定容,干过滤,弃去初滤液,收集续滤液得样品溶液。按实验方 法,用工作曲线法进行测定,用文献[6mg/ml]的紫外分光光度法做对照实验,测定结果见表 1。表 1 片剂和粉针剂中加替沙星的测定结果