医药学论文：脑梗死患者Hcy及MTHFR基因多态性与颈动脉IMT的关系

【摘要】 目的 探讨Hcy、MTHFR C677T基因多态性与颈动脉IMT及脑梗死之间的关系。方法 观察42例脑梗死患者和40例对照者，用循环酶法测定Hcy水平，采用聚合酶链反应－限制片长多态性方法检测MTHFR基因多态性，用彩色多普勒检查颈动脉IMT。结果 病例组血清Hcy 浓度显著高于对照组；Hcy是颈动脉IMT增厚及脑梗死的促进因素；MTHFR基因多态性非颈动脉IMT增厚及脑梗死的危险因素。结论 血清Hcy升高是动脉粥样硬化及脑梗死的独立危险因素，单纯的MTHFR尚不能认为是动脉粥样硬化及脑梗死的独立危险因素。

 

　　【关键词】 脑梗死；同型半胱氨酸；5，10－亚甲基四氢叶酸还原酶；颈动脉IMT

 

The relationship between homocysteine，MTHFR gene polymorphism and carotid intima-media thickness in cerebral infarction patients

 

【Abstract】 Objective To investigate the relationship of homocysteine(Hcy) level and genetic polymorphisms of methylenetetrahydrofolate reductase(MTHFR) related to homocysteine metabolism with carotid intima-media thickness(IMT)in cerebral infarction patientsMethods In 42 cerebral infarction patients and 40 healthy people，serum Hcy level was measured by cyclophorase assay；MTHFR genetic C677T polymorphism was determined by polymerase chain reaction；carotid intimal-medial wall thickness was determined by the use of the duplex ultrasonographyResults The Hcy level in the patient group was significantly higher than that in the control group (P< 0001) Hcy is related to the thickness of carotid intimal-medial thikness and cerebral infarction even after controlling for other traditional risk factors，but MTHFR genetic C677T polymorphism is notConclusion Serum Hcy but not MTHFR is the risk factor of artherosclerosis and cerebral infarction

 

【Key words】 cerebral infarction； homocysteine；5，10-methylenetetrahydrofolate reductase； carotid intima-media thickness

 

近年来，高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteinemia，Hhcy)与血管病的关系日益引起重视。对Hhcy致脑梗死机制的研究主要集中在对动脉粥样硬化的影响上。 5，10－亚甲基四氢叶酸还原酶(Methylenetetrahydrofolate reductase， MTHFR) C677T 突变是引起Hhcy的主要遗传因素。颈动脉内膜－中膜厚度(intima－media thickness，IMT)作为反映全身动脉粥样硬化的一项早期指标已用于临床［1］。本研究目的在于探讨Hcy、MTHFR基因多态性与IMT及脑梗死之间的关系。

 

　　1 资料与方法

 

1.1 一般资料 病例组来自2006年3月1日~10月31日北京同仁医院及普仁医院神经内科连续住院发病1周内的脑梗死患者，符合1995年第四届全国脑血管病学术会议制定的诊断标准，均经头颅CT 或MRI确诊，排除严重心脏疾病、急慢性肝肾功能不全、恶性肿瘤、酒精或药物滥用者及近3个月服用叶酸、VitB12、VitB6者，共42例，男31例，女11例，平均669±100岁。正常对照组来自同期健康体检及志愿者， 既往无肝肾功能不全、心脑血管病及神经系统病史，共40例，男29例，女11例，平均626±93岁。

 

1.2 血清Hcy水平的测定 取受检者空腹血3ml， 1ｈ内分离血清，血清标本-20℃保存备检。Hcy测定仪器采用贝克曼CX7生化仪；Hcy检测试剂盒采用北京九强公司生产的Hcy010GB180Z Hcy检测试剂盒，荧光检测器检测波长340ｎｍ，进样量18μｌ。

 

1.3 颈动脉IMT的检测 应用 EP LOGZQ9 双功能彩色多普勒超声仪检查，检查部位包括双侧颈总（CCA）、颈内动脉(ICA)，IMT于CCA分叉近端1cm处后壁及分叉水平上方、球部以远1cm处测量或IMT最厚处，左右颈动脉各测量3次，取3次的平均值，IMT 超过10mm为颈动脉内膜增厚。

 

1.4 MTHFR C677T基因多态性检测 （1）提取外周血DNA。（2）PCR 体外基因扩增：引物根据文献设计［2］，由上海生工生物工程技术有限公司合成， P1:５'-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3'； P2: '-AGGACGGTGCGGTGAAGAGTG-３'。引物2OD，去离子水200μl备用。ＰＣＲ反应体系为天根生物工程公司提供的25μl反应体系（PCRPreMix）。加入模板4μl、引物Ｐ１和Ｐ２各1μl，再加去离子水配至25μl。循环条件：预变性94℃ 5min，解链94℃ 30s，退火62℃ 30s，延伸72℃ 30s，35循环周期后72℃再延伸7min。2%琼脂糖凝胶电泳检查PCR扩增产物，扩增片段大小为198b，置－20℃冰箱保存待用。(3)PCR扩增产物的限制性内切酶片段长度多态性分析： PCR扩增产物10μl，HinfⅠ１μl（10ｕ），缓冲液2μl，用去离子水补足至20μl，37℃水浴消化6h。3％琼脂糖凝胶电泳检查酶切结果。