医药学论文：金黄色葡萄球菌滤液制剂思复胜提升白细胞的实验与应用研究

【摘要】 目的 观察金黄色葡萄球菌滤液制剂（思复胜）提升白细胞的作用。方法 对含有SEC的思复胜注射液进行动物体内提升白细胞、体外增殖淋巴细胞实验以及对少量肿瘤患者的临床应用研究。结果 采用含4ng/ml以上SEC思复胜注射液，均可刺激小鼠体内白细胞的显著升高（P＜0.01）。＞5ng/ml剂量，可促进小鼠脾脏细胞及人外周血淋巴细胞的高度增殖。其效果较ConA（阳性对照）更好。人体应用试验证明：含SEC 12ng/ml的思复胜注射液每日注射2ml，30天内可避免使放、化疗肿瘤患者外周血白细胞降低，且有一定程度的升高，与放化疗前相比，统计学上差异无显著性，而与未注射思复胜注射液的放、化疗对照组相比，其外周血白细胞减少差异有显著性（P＜0.05）。含SEC的思复胜注射液可提升零星在家正在进行放、化疗肿瘤患者外周血白细胞数量，与已在放、化疗时白细胞数相比，其升高有显著（P＜0.05）或非常显著（P＜0.01）的差异。结论 含SEC的思复胜注射液对癌症放、化疗患者白细胞降低具有显著的保护作用。
【关键词】 含SEC的思复胜注射液；提升白细胞；增殖淋巴细胞；肿瘤放、化疗
Studies of experimential and application for Staphylococcus aureus cultures filtrate products（Si Fu Sheng）in promoting leukocytes
REN Shao-hua，HU Ding-guo，MA Feng-sen.Lishui Central Hospital，Lishui 323000，China
【Abstract】 Objective The test for promoting of leucocytes on mouse in vivo and proliferating of lymphocytes on human and mouse in vitro and clinic applied on some cancer disease for si fu sheng products of contain SEC.Methods There are some evidences that they can stimulate mouse in vivo leucocytes increasing remarkably.（P< 0.01）by used si fu sheng at a dose of 4ng/ml（SEC） or more injection，while it deeply stimulating mouse spleen cells or human peripheral blood lymphocytes proliferation and differentiation by used a close of >5ng/ml（SEC） injection.Results The effects are better than ConA（positive control）.Clinic trials shows that they can hold back decrease of peripheral blood leucocytes of 31cases patients suffered from cancer after radiotherapy or chemotherapy，further more there are some increasing instead by injected si fu sheng 2ml/day with a dose of 12ng/ml （SEC）. There are no statistical differences （P>0.05） compared with patients before radiotherapy or chemotherapy，but there are remarkable differences（P< 0.05） between using and no using si fu sheng （31 cases patients） on peripheral blood leucocytes decrease.Peripheral blood leucocytes number will step up to a remarkable（P< 0.05）or highly remarkable （P< 0.01）difference，for 12 cases piecemeal cancer patients with radiotherapy or chemotherapy takes si fu sheng 2ml/day injection compared with no using before.Conclusion These studies manifest si fu sheng injection can pull leucopenia of a cancer patients with radiotherapy or chemotherapy up obviously.
【Key words】 si fu sheng injection contain SEC; promoting leucocytes;proliferating lymphocytes; radiotherapy and chemotherapy of cancer.
金黄色葡萄球菌滤液制剂是一种含有葡萄球菌肠毒素（SEC）的生物制品，而SEC又是一种外源性超级抗原（SAg）［1～4］仅需微量（纳克剂量ng）即可高效地刺激T细胞增殖。并促使机体释放多种细胞因子和产生细胞毒的作用［5～8］。体外细胞水平和动物体内水平的研究结果表明，作为SAg的SEC能够生产强大的杀伤或抑制肿瘤细胞效应［9～11］，故是一种很有潜能的新型肿瘤免疫治疗剂，并展示了良好的应用前景。曾已发现SAg的适当浓度还能对小鼠脾脏细胞及人外周血白细胞的激活使之增殖的作用［12，13］。近年，因各种因素或肿瘤患者在进行放、化疗过程中，外周血白细胞大量被杀伤，致使体内白细胞高度减少，并可出现一系列不良反应，而含SEC的思复胜注射液
却可增高各种原因引起的外周白细胞减少及缓解肿瘤患者因放、化疗引起的不良反应。笔者对此进行了实验研究，并对少数量的放、化疗肿瘤患者进行了临床试验治疗观察，获得了很有意义的结果，现将研究观察结果总结报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌株 金黄色葡萄球菌滤液制剂思复胜生产用菌株STMX91096，系冻干保存菌种。
1.1.2 培养基 分离培养基采用优质营养琼脂平板和血平板，复壮培养基采用含人血 白蛋白、黏液素肉汤。种子和生产培养基采用猪心浸汁蛋白胨氯化钠培养基［14］。
1.1.3 SEC的检测试剂 反向被动血凝试剂及SEC标准品购自北京中国人民解放军军事医学科学院流行病微生物研究所，批号020211。
1.1.4 实验动物 昆明种小白鼠，购自浙江省医科院动物中心。
1.2 方法
1.2.1 金黄色葡萄球菌滤液制剂（思复胜）原液制备 按金黄色葡萄球菌滤液制剂全套方法制备［14］。所得过滤除菌液即为原液。
1.2.2 思复胜原液中SEC含量测定 采用RPHA微量法测定原液中SEC滴度，同时与已标化的SEC标准品检测比较，以同批血凝试剂检测标准品（SEC）的敏感度（即ng/ml）乘于被检品的血凝滴度。即为被检原液中SEC实际含量（ng/ml）。例如用RPHA检测标准品敏感度为3.125ng/ml，而被检原液的血凝滴度为1:32，则原液中SEC含量为32×3.125=100ng/ml。
1.2.3 试验用制剂的剂型制备 注射用针剂思复胜的配制：取注射用水配成氯化钠溶液，按所需SEC含量配制成不同SEC浓度的试验用稀释药液，灌封于50ml灭菌瓶中供试验用。人体试验用思复胜注射液，用注射用水配成pH6.7的氯化钠溶液，将原液按12ng/ml SEC稀释成半成品，再经过滤，按每安瓿2ml灌封，即为成品，再取样进行质量检查，合格者供人体试验用。
1.2.4 动物体内升白实验方法
（1）实验动物：系采昆明种小鼠，体重20g左右，雌雄各半，随机分组，每组10只。
（2）实验方法：每次实验设正常对照组（NS）、环磷酰胺模型组（CTX）及给药组（不同浓度药液）。正常对照组连续5天腹腔注射NS。每天1次，每次每只0.2ml；CTX模型组，连续5天腹腔注射NS，每天1次，每次每只0.2ml；给药组连续5天腹腔注射被试药液，每天1次，每次每只0.2ml。至第3、4、5天，除正常对照组外。CTX模型组和给药组均加注CTX（1mg/ml），每天1次，每次每只0.2ml，末次注射后1h，取小鼠眼眶血20μl，用白细胞计数稀释液定量稀释后在计数板上显微镜下计数各小鼠白细胞数，用t检验分析每组小鼠白细胞数，并与CTX模型组比较计算P值。
1.2.5 动物脾脏淋巴细胞及人外周血淋巴细胞增殖实验参照［15，16］MTT比色法进行。
1.2.6 思复胜注射液对肿瘤放、化疗患者的临床试验观察方法 系由丽水市中心医院呼吸科及普外科进行。所有病例均为术后或已丧失手术机会即将进行放、化疗的恶性肿瘤患者，无放、化疗禁忌证，共62例。男35例，女27例，年龄19～77岁。随机分试验组和对照组，每组31例。
（1）试验组（放、化疗联合思复胜组）：在接受放、化疗同时，应用思复胜肌肉注射，每天1次2ml，连续30天为1个疗程。
（2）对照组（单纯放、化疗组）：按常规应用放、化疗，不用任何药物作辅助治疗。疗程与试验组同。
（3）所有患者放、化疗前检查外周血白细胞数及其他指标，放、化疗过程中每周复查白细胞，至第4周再检查1次，并对所有的白细胞数据作统计学处理。
2 结果
2.1 含不同量SEC的思复胜注射液在小鼠体内升白的比较实验使用不同含量SEC（2、4、8、10、15、20ng/ml）思复胜注射液分2次6组进行了小鼠体内增白实验，每组各10只小鼠。每次同时作正常对照组（NS）和CTX模型组对比实验。结果见表1、表2。