医药学论文：乙肝小三阳血清HBVDNA定量检测及其与前S1关系的研究

［摘 要］ 目的：检测乙型肝炎小三阳患者HBVDNA含量，并与前S1抗原(PreS1)进行比较分析。方法：收集351例乙型肝炎小三阳患者血清和30例正常体检者血清，用ELISA方法检测前S1抗原，用荧光定量PCR方法定量检测HBVDNA。结果：HBsAg、抗HBe、抗HBc阳性(小三阳)患者HBVDNA检出率为62.7%(4.5×106 copies／ml)，前S1抗原检出率为72.9%。结论:HBeAg转阴者也存在病毒复制，HBVDNA与前S1抗原相关性较好，对于乙型肝炎患者在常规血清学标志物检测的基础上对HBVDNA数量进行动态检测有助于临床诊断、疗效观察及预后判断。

 

　　［关键词］ 乙型肝炎；HBVDNA；前S1抗原

 

　　Study the Relationship of HBVDNA Quantitatively Detection and PreS1 for the Patients of Hepatitis B with Positive of HBsAg、AntiHbe and AntiHBc

 

　　　Abstract：Objective To determine hepatitis B virusDNA(HBVDNA) and pre S1 antigen in patients with hepatitis B and expolore their different clinical values.Methods 351 positive serum of HBsAg,antiHBe,antiHBc of hepatitis B and 30 healthy man wrer collected.PreS1 antigen and HBV markets were detected with ELISA and HBVDNA with fluorescent quantitative PCR(FQPCR) respectively.Results The positive rates of HBVDNA and PreS1 antigen were 62.7%(4.5×106 copies／ml)、72.9% respective in patients with hepatitis B of which HBsAg、antiHBe、antiHBc were positive.Conclusion There were replication of virus in patients with HBeAg negative,The serum levels of HBVDNA of patients with hepatitis B closely correlate PreS1.HBVDNA with fluorescent quantitative PCR for the patients with hepatitis B is helpful to clinical diagnosis、clinical evalution and prognosis.

 

　　Key words：Hepatitis B；HBVDNA；PreS1 antigen

 

　　乙型肝炎血清标志物的检测方法有多种，寻求快速、敏感和特异性检测手段具有十分重要的意义。前S1(PreS1)抗原已成为HBV感染、复制和乙肝患者诊断、治疗和预后的一个重要标志，但存在"窗口期"及"免疫逃避株"等问题。乙型肝炎病毒HBVDNA含量是判断病毒复制活跃和具有传染性的直接可靠依据，HBVDNA定量测定可以反映乙型肝炎病毒(HBV)的量的变化，直接检测患者血清中病毒的拷贝数量，反映患者病毒血症的水平。本研究观察了乙肝小三阳患者血清标志物、前S1和HBVDNA三者之间的相关性，探讨了HBVDNA检测的临床意义,现报道如下。

 

　　1 材料与方法

 

　　1.1 标本 收集我院351例乙型肝炎小三阳患者血清,其中男273例，平均年龄30.1岁，女78例，平均年龄32.3岁，健康对照30例,男25例，平均年龄33.8岁，女5例，平均年龄34.6岁。留取清晨空腹静脉血，分离血清，-20 ℃保存待检。

 

　　1.2 仪器 RSP150/8全自动加样器(瑞士TECAN公司生产)，BEPⅢ全自动酶免疫分析仪(德国DadeBehring公司生产)，美国ABI公司AB770型PCR荧光定量仪。

 

　　1.3 方法

 

　　1.3.1 血清标志物(HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc)检测 应用ELISA方法，试剂由上海实业科华生物技术有限公司提供，试剂批号分别为：20060718、20061013、20060913、20060925、20060924。用瑞士TECAN公司生产的加样器(RSP150/全自动酶免分析仪)进行加样(包括质控血清、阴阳性对照及待检血清)，然后用BEPⅢ全自动酶免疫分析仪进行检测，判定方法严格按照说明书进行。

 

　　1.3.2 前S1抗原检测 采用双抗体夹心ELISA法，用抗前S1和抗HBs作为固相化抗体和酶标抗体，单抗捕获待检标本中的乙肝病毒表面抗原，用辣根过氧化物酶标记的抗PreS1单抗作为检测抗体。严格按照试剂盒说明书的检测步骤进行操作，根据酶底物反应后的呈色吸光值，测定血清中乙肝病毒PreS1，试剂由上海阿尔法生物技术有限公司提供，试剂批号：20060601。

 

　　1.3.3 HBVDNA定量测定 采用PCR方法结合荧光探针体外扩增和检测技术，试剂由深圳匹基生物工程股份有限公司，该试剂盒的检测下限为5.0×108 copies／ml，试剂批号：20060301。

 

　　1.4 统计分析计数资料 采用配对计数资料卡方检验，所有数据用SPSS 11.5处理。