医药学论文：Decorin因子对人胃癌细胞及其表达的MG7蛋白的作用

【摘要】 目的 研究decorin因子对人胃癌细胞BGC-823的抑制作用，以及对胃癌细胞特异表达的MG7蛋白的影响。方法 肿瘤细胞用含不同剂量（0、1、3、6μl）decorin的细胞培养液培养，应用MTT测定法来测定生长抑制率，电镜技术来观察细胞凋亡情况，免疫组化技术来检测细胞内MG7蛋白含量。结果 decorin对胃癌细胞具有生长抑制作用,并呈现时间和剂量依赖性（方差分析，P＜0.05）。电镜下可观察到凋亡细胞，免疫组化发现细胞内MG7的含量在处理前后有明显变化。结论 decorin因子抑制人类胃癌细胞生长，诱导其产生凋亡，有望作为一种新的凋亡诱导剂用于胃癌的治疗，并且该因子的作用与细胞内MG7含量有密切关系。

 

　　【关键词】 decorin；胃癌细胞；MG7蛋白
Influences of decorin on the BGC-823 cell and MG7 protein

 

　　【Abstract】 Objective To exp1ore the effect of decorin on the BGC-823 cell and MG7 protein.Methods The growth inhibition of cells induced by various concentrations of decorin in different time course was analyzed by using MTT assay. The cell's apoptosis alterations were evaluated by transmission electron microscopy (TEM)，and quantity of MG7 was evaluated by cytochemical staining.Results The inhibition of proliferation on the cells was observed.The inhibitory effect was dose-dependent. Apoptotic cells were observed under transmission electron microscope. The different quantities of MG7 protein in cells were observed by cytochemical staining.Conclusion Decorin inhibits proliferation，induces apoptosis of human gastric cancer cells，and the effects have close relation to the quantities of MG7 protein in cells.

 

　　【Key words】 decorin；gastric cancer cells（BGC-823）；MG7 protein

 

　　Decorin是一种主要存在于结缔组织中与胶原纤维相关的蛋白多糖(proteoglycan，PG),有多种生物活性，可以调节和控制组织形态发生、细胞分化、运动、增殖及胶原纤维形成等过程，对防止组织和器官纤维化的发生有重要意义。已有研究表明，Decorin作为一种生物制剂可诱导肝癌细胞凋亡［1］。此外，大量资料表明，decorin能抑制多种组织来源的细胞生长［2］。MG7作为一种胃癌相关抗原由于其特异性最强，在胃癌组织中高表达［3～4］，近年来逐渐受到大家的重视，也成为了既有效又经济的胃癌筛检的好方法。因此，我们选择人类胃癌细胞(BGC-823)来观察decorin对他们的生长抑制及促凋亡作用，以及对于胃癌细胞所表达的MG7的影响，从而为decorin抗肿瘤机制的进一步研究和胃癌的化学治疗或是化学辅助治疗的临床应用提供依据。

 

　　1 材料与方法

 

　　1.1 材料 胰酶、MTT购自北京夏斯生物技术有限公司，新生小牛血清购自杭州四季青生物工程材料公司，RPMI1640购自GIBCO，PBS 、ABC试剂盒购自博士德生物公司，胃癌细胞（BGC-823）由军事医学科学院惠赠。MG7抗体由第四军医大学提供。Decorin因子由山西医科大学微生物免疫实验室提供。

 

　　1.2 方法

 

　　1．2．1 细胞培养 BGC-823细胞置于含5%CO2 37℃的培养箱中培养，以含10%小牛血清的RPMI1640作为其培养基，于100ml培养瓶中进行培养，2～3d传代，用0.1%的PBS洗2遍，0.25%的胰酶消化，分装。

 

　　1．2．2 细胞干预 将对数生长期的BGC-823细胞计数后，调整细胞密度为1×104/L，接种到96孔培养板，每孔200μl，每组5孔，细胞贴壁后每孔分别加入浓度为15μg/ml的decorin(1μl、3μl、6μl)继续培养24h、48h、72h，以培养液为对照组。MTT（5G/L）20μl,37℃再培养4h，弃上清加DMSO 200μl,震荡10min，于酶标仪490nm波长测定吸光度，记录数据。实验重复3次。肿瘤细胞的抑制率(%)=(1-实验组A值/阴性对照组A值)×100%。

 

　　1．2．3 形态学观察 培养状态下，直接用倒置显微镜观察细胞的生长状况，形态改变及凋亡小体形成，细胞爬片培养经decorin作用后，0.1%PBS洗涤，95%乙醇固定，常规HE染色，观察细胞形态与核染色质的变化。

 

　　1．2．4 MG7的测定 细胞培养同上，将生长旺盛的胃癌细胞用胰酶消化，制成密度为1×105/L的悬液，接种于24孔培养板中，孔内预置盖玻片，细胞贴壁后，分别加入5μl、15μl、30μl decorin，每孔设3复孔，以加常规培养液的孔做对照，分别培养24h、48h、72h，吸去上清液，95%乙醇固定15～20min，待免疫组化染色。收集上清液用于MG7的测定。