【关键词】 麻疹减毒活疫苗；人二倍体细胞；收获率
麻疹是由麻疹病毒引起的主要罹及婴幼儿急性传染病。在我国麻疹减毒活疫苗应用已有近40年的历史，制备疫苗均以鸡胚细胞为基质，作为异源细胞，具有携带禽病毒的可能，而人二倍体细胞为人源细胞［1］，在国外早已用来生产麻疹减毒活疫苗。人二倍体细胞（2BS株）现已广泛应用于疫苗生产，如甲肝减毒活疫苗、水痘减毒活疫苗等，已证明其具有安全性。我们用人二倍体细胞为基质制备出符合2005年版《中国药典》三部要求的麻疹减毒活疫苗，本文就此做如下报告。
1 材料
1.1 细胞
生产用细胞为人二倍体细胞2BS株，用于生产的细胞世代限定在43代以内。
1.2 毒种
鸡胚细胞为培养基质制备的麻疹减毒活疫苗毒种长47株27代适应于人二倍体细胞，33℃和35℃培养，收获制成，经检定后用于生产，并已有多个代次毒种制备疫苗，证明此毒种具有良好的传代稳定性。
1.3 培养液及维持液
MEM为基础液，加入适当比例的灭能小牛血清，碳酸氢钠调pH值。
1.4 疫苗液
199液，pH值为7.4～7.5。
2 方法
2.1 单层法制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）
单层人二倍体细胞2BS株按1：2～1：4传代，接种2L克氏瓶，加入细胞培养液，180ml/瓶，置37℃培养。当人二倍体细胞长成单层时，换成细胞维持液，200ml/瓶，再加入毒种，毒种的感染剂量（MOI）为1：100。将感染病毒的细胞瓶置35℃培养，此方法称为单层法。当细胞病变达50%以上时，用400ml Earle's液冲洗细胞面，去除小牛血清，加入疫苗液，200～500ml/瓶，置35℃培养。当细胞病变达90%以上时，收到4℃冷库。在4℃冷库释放病毒1周，按0.3%加入人血白蛋白作保护剂，抽样检定。检定合格后，加入蔗糖明胶稳定剂及长8号微量保护剂，采用适宜的冻干曲线冻干。
2.2 同时法制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）
单层人二倍体细胞2BS株按1：2传代，毒种的感染剂量（MOI）为1：1000。将细胞、病毒和培养液同时分装到10L瓶中（即同时法），2000ml/瓶，置35℃旋转培养，转瓶机转速为7～8r/h。当细胞病变达50%以上时，用3000ml Earle's液冲洗细胞面，去除小牛血清，加入疫苗液，2000～5000ml/瓶，置35℃旋转培养。当细胞病变达90%以上时，收冷到4℃冷库转瓶机上。在4℃冷库释放病毒1周，按0.3%加入人血白蛋白作保护剂，抽样检定。检定合格后，加入蔗糖明胶稳定剂及长8号微量保护剂，采用适宜的冻干曲线冻干。
2.3 无菌试验、鉴别试验、异常毒性试验、水分、物理检查
按2005年版《中国药典》三部进行常规检定［2］。
2.4 牛血清白蛋白残留量检测
采用放射免疫法。应不高于50ng/剂。
2.5 病毒滴度及热稳定性试验（37℃ 7d）
采用微量细胞病变法。成品病毒滴度及37℃放置7天前后均不低于3.3 LgCCID50/ml，37℃放置7天后病毒滴度下降不得超过1.0 Lg。
3 结果
3.1 麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）成品检定
3.1.1 不同培养方法制备的麻疹减毒活疫苗基础滴度及热稳定性的比较
单层法与同时法制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）的病毒滴度及热稳定性均达到2005年版《中国药典》三部的要求，见表1。表1 单层法与同时法制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）的病毒滴度及热稳定性（略）
经统计学处理，t值分别为1.51、1.49，P均＞0.05，差异无显著性，因此，单层法与同时法制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）的病毒滴度及热稳定性无区别，两种方法均可以用于疫苗生产。
3.1.2 不同代次毒种制备的麻疹减毒活疫苗(人二倍体细胞)基础滴度及热稳定性
分别以不同代次的毒种制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞），其基础滴度及热稳定性均符合2005年版《中国药典》三部的要求，结果见表2。表2 不同代次毒种制备的麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）基础滴度及热稳定性（略）
9代、10代、11代毒种制备出的疫苗基础滴度及37℃稳定性均达到2005年版《中国药典》三部的要求，因此不同代次的毒种均可以制备疫苗。
3.1.3 不同培养方法制备的麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）牛血清白蛋白残留量检测
单层法与同时法制备的麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞），牛血清白蛋白残留量比较，结果见表3。表3 单层法与同时法制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）的牛血清白蛋白残留量（略）
经统计学处理，t=19.51，P< 0.05，差异有显著性，因此同时法制备的疫苗的牛血清白蛋白残留量低于单层法制备的疫苗的牛血清白蛋白残留量，表明应用同时法培养制备疫苗，可降低牛血清白蛋白残留量。
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