医药学论文：五味子不同多糖水溶性质的测定及应用

【摘要】 用水溶醇沉法所得到的五味子多糖，应用40%乙醇沉淀分离成A、B两部分，分别测定它们的分子量、溶解速率和沉淀点，实验的结果表明：B区内的多糖不仅集中多糖有效成分，而且水溶性好和稳定性高，为多糖注射液配制提供理论根据和操作方法。

 

【关键词】 五味子；多糖；性质；测定

 

五味子多糖有较高的药用价值，但不同的给药方式其药的药效差异较大，药理学实验证明：多糖的注射给药的药效是口服药效的100～150倍。但注射用药的要求很高。天然多糖分散性很大，制备理想注射药较困难。但五味子水溶性多糖集中分布在两个区间，可用40%的乙醇能将精制的五味子水溶性多糖分离成两部分，其沉淀多糖A与溶液内多糖B，含量之比约为65：35。药理学实验证明，只有B区内的多糖才具有药用价值。通过测定多糖的分子量、溶解速率和沉淀点，反映出B区多糖在水中的溶解能力和稳定性方面远远高于A区多糖和原多糖。这为注射用五味子多糖配制提供可靠的理论根据和操作方法。实验部分如下。

 

1 实验仪器与材料

 

1.1 仪器 SWCII贝克曼温度仪；722型分光光度计；冰点测量仪。

 

1.2 材料 精制五味子多糖；葡萄糖 (AR)；浓硫酸 (AR)；苯酚(AR)。

 

2 分子量测定

 

应用冰点下降法测定多糖的数均分子量n，通常使用下面的关系式［1］，ΔTf C=Kf M+Kf V1ρ22(1 2-X1)C(1) 根据冰点下降关系式(1)，可以看出：ΔTf C与浓度C在一定条件下呈线性关系，其直线的截距为Kf M，通过截距就可以计算出多糖的分子量，这样就可以测定不同浓度下的ΔTf，根据关系式就可以得到多糖的分子量。

 

2.1 测量方法

 

2.1.1 纯水凝固点测定 取20ml蒸馏水加入冰点下降仪中后，将其放入冰-水-盐的冷浴中，用白克曼温度仪测量水的凝固点Tf，重复3次取其平均值，然后倒出蒸馏水。

 

2.1.2 混合多糖分子量测定 精称取多糖5.234g，用50ml蒸馏水溶解，并定容100ml，取其20ml放入冰点测定仪中，用白克曼温度仪测其凝固点。测量3次取其平均值，记录下凝固点后再加5m1蒸馏水，混匀后再测量3次凝固点。记录下平均值，再重复上面操作3次，每次都是加入5m1蒸馏水，凝固点测完后，将溶液倒回，这时原溶液体积变成120ml。

 

2.1.3 分级多糖分子量测定

 

2.1.3.1 多糖的分级 将测定完分子量的多糖溶液，在20℃条件下恒温2h，加入无水乙醇80ml，即乙醇含量40%(V/V)。此时会出现大量沉淀物，陈化2h后用离心法把沉淀物分离出来，倾倒出母液，其沉淀物为多糖A，母液在水溶锅上蒸干可得到沉淀物为多糖B。将分级多糖A和B分别溶解50ml和25m1水中，各取出lml稀释后，分别用硫酸-酚法测量两种溶液多糖的含量，结果是：多糖A的浓度为6.99g/100ml，多糖B的浓度为3.05g/100ml［2］。

 

2.1.3.2 分级多糖分子量测定 对A、B两种多糖溶液分别取20ml放入冰点测量仪中，按混合多糖测量凝固点的方法进行操作，均取3次平均值。3种多糖的测量数据见表1。表中的△Tf是纯水的凝固点与溶液凝固点的差值［1］。

 

2.2 数据处理 将表1中的△Tf C与C的对应关系代入凝固点关系式(1)，经过数据处理可得到3个多糖3个直线方程。见表2。

 

可以看出多糖A和B的分子量差别是很大的。多糖A的分子量是多糖B的2倍多，对于大分子物质，分子量越大溶解能力越低，可见多糖B的溶解力远高于多糖A。

 

3 溶解速率的测定

 

将多糖A和多糖B，各取1g左右。分别放入100ml水中，在25℃恒温下，自然溶解2h后，多糖B几乎全部溶解，用硫酸-酚法测量自然溶解量，多糖B是0.973g，多糖A是0.116g，多糖B的溶解速率是多糖A的8.38倍，多糖B的自发性溶解性强，所以形成的溶液稳定性就高。

 

4 沉淀点的测定

 

在多糖水溶液中加入沉淀剂乙醇，当开始出现沉淀时，乙醇在水和乙醇体系中所占的体积分数为沉淀点，用r表示［1］。

 

r=V V0+V（4）

 

r值越大溶解性越强，一般可认为相同温度下同一沉淀体系，r的比值是溶解能力的比值。

 

4.1 测定方法 取混合多糖，多糖A和多糖B 3种多糖溶液，配制成浓度为1g/100ml，每个样品都依次取出7个5m1，分别加入7只试管中，对每一组样品分别依次加入0.lml、0.2ml、0.5ml、lml、2m1、3m1、4m1无水乙醇，在恒温20℃陈化4h，离心沉淀，去掉上层液，用95%乙醇洗一次沉淀物，用水溶解沉淀物，用硫酸-酚法测其含量，具体数见表3［3，4］。表1 不同浓度的冰点下降数值表表2 多糖直线方程与分子量

 

4.2 数据处理与分析 从表2中可看出，随着r值的增大其沉淀量增大，沉淀点的测定方法是沉淀量与r作图，曲线延长到沉淀量为零时的r值，根据表2中的数据，它们的沉淀点分别是混合多糖为0.038，多糖A为0.036、多糖B为0.28，可见多糖B的沉淀点远远大于多糖A和混合多糖的沉淀点，但混合多糖和多糖A的差别不大，根据溶解能力是沉淀点的比值，多糖B与混合多糖r的比值为6.8：1，这就说明多糖B的溶解能力要高于混合多糖的5.8倍［2］。