医药学论文：重组梅毒螺旋体多表位抗原的改进及应用

【摘要】 目的 对梅毒螺旋体抗原表位进一步优化，以满足梅毒检测试剂的需要。 方法 用信息生物学软件对梅毒螺旋体TpN47抗原表位进行分析，在我们以前研究工作的基础上，延伸其长度，用化学合成法获得目的基因，插入到pBVIL1载体中，构建pBVIL1/TpN47表达质粒。将新获得的TpN47基因与本研究室保存的TpN15、TpN17、TpN44.5基因片段相连接，进行嵌合表达，经纯化后用双抗原夹心法测其活性。 结果 经改进的重组梅毒螺旋体多表位嵌合抗原，用于检测国家新一代的参考品，其阳性及阴性符合率均为100%，4份灵敏度符合参考品的要求。 结论 所构建的pBVIL1/TpN15＋TpN44.5＋TpN17＋TpN47嵌合质粒，在E.coli中获得了高效表达，经测定，此抗原可满足新一代梅毒检测试剂的需要。

 

【关键词】 梅毒螺旋体；TpN47；嵌合抗原；参考品

 

Improvement based on recombinant multi-epitope chimeric antigen Treponema pallidum and its application

 

SONG Xiao-gou，WANG guo-hua，CHEN Kun，et al.Institute of Basic Medical Sciences, AMMS, Beijing 100850,China

 

【Abstract】 Objective In order to detect Kit antibodies of syphilis，the epitope chimeric antigen of Treponema pallidum were optimized further. Methods Treponema pallidum TpN47 antigen epitope were analyzed by information biology software,to extend its length, then linked with TpN15, TpN17, TpN44.5 antigens gene fragment. The recombinant Treponema pallidum multi-epitope chimeric antigens was expressed in E.coli. The Activity of multi-epitope chimeric antigens were detected by sandwich antigen enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results Improvement based on recombinant multi-epitope chimeric antigen Treponema pallidum antigens were used newly panel of antibodies syphilis, results of detection were both positive and negative coincidence ratio of 100%, 4 serial sensitivity consistent with panel. Conclusion Recombinant of multi-epitope chimeric antigen of Treponema pallidum was highly expressed in E.coli. Satisfy requirememnt for new panel of syphanaly antibodies.

 

【Key words】 Treponema pallidum；multi-epitope chimeric antigen; TpN47；panel

 

目前，临床上对梅毒螺旋体感染的检测，常用的方法是血清学检测，如酶联免疫吸附测定（ELISA）［1］法等，此方法所用抗原绝大部分为重组蛋白。在以前的研究［2］中，我们分别选择了TpN15、 TpN17、 TpN44.5和 TpN47的优势抗原表位，进行了克隆和表达，并将此四组基因连接，在E.coli中进行了嵌合表达，此抗原在当时梅毒感染血清学检测中起了重要作用，但随着新一代参考品（panel）的起用，我们发现不能完全满足检测试剂的需要，其原因可能是TpN47基因片段过短所致，因当时为了最大限度缩短基因长度，以降低非特异性反应，仅选用了24个氨基(78～101)。我们再次以梅毒全基因组序列［3］为基础，用Biosun分子生物学软件［4］重新对抗原表位进行了全面系统地分析，增加TpN47基因长度，即选用400个氨基酸（1～400），这样可能会提高抗原的覆盖面。此片段经与TpN15、 TpN17、 TpN44.5基因片段相连接，进行嵌合克隆表达纯化后采用双抗原夹心法对梅毒参考品进行测定，其结果符合要求。

 

1 材料与方法

 

1.1 材料

 

1.1.1 菌株及质粒 原核融合表达载体pBVIL1、pBVIL1/ TpN15、pBVIL1/ TpN17、pBVIL1/ TpN44.5表达质粒由本室构建并保存；E.coli HB101，由本室保存。