医药学论文：家兔肝抑素对大鼠肝癌的作用

【摘要】 目的 研究肝抑素（HC）对大鼠实验性肝癌的治疗作用和作用环节。方法 采用二乙基亚硝胺(DEN)诱导法建立大鼠肝癌模型。观察大鼠肝脏的病理改变、肝表面癌结节数、肝重/体重。以甲胎蛋白（AFP）、γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）和碱性磷酸酶（ALP）作为观察指标。采用流式细胞仪检测肿瘤细胞的动力学变化。结果 大剂量HC的疗效优于阿霉素(ADM)，其作用环节是阻滞了G0～G1期细胞的增殖；中等剂量HC的疗效与ADM相似，但其作用环节则是阻滞了G2～M期细胞的增殖。结论 本研究证实了HC在体内应用能抑制肝癌细胞的增殖，延缓肝癌的发生发展。
【关键词】 肝抑素；大鼠；肝肿瘤；二乙基亚硝胺
The effect of rabbit hepatic chalone on rat hepatocellular carcinoma
【Abstract】 Objective To study the therapeutic effect and protective effect of experimental hepatocellular carcinoma in rats with rabbit hepatic chalone(HC).Methods Hepatoma rats were induced by diethylnitrosamine(DEN).The changes of hepatoma nodules and ratio of liver/body weight were recorded and the alpha fetoprotein(AFP)，γ-glutamyl transferase(γ-GT) and alkaline phosphatase(ALP) and the pathological changes of livers were observed.The cellular dynamic parameters were studied by flow cytometry.Results HC of high dose group was better than adriamycin(ADM) group，the protective effect might be to postpone advancement of G0-G1 phase cells.HC of appropriate dose group was the same as ADM group，and the protective effect might be to postpone advancement of G2-M phase cells.Conclusion The HC in this study could inhibit the prolifiration of hepatoma cells and delay the forming of hepatoma.
【Key words】 hepatic chalone；rat；hepatocellular carcinoma；diethylnitrosamine
肝抑素（hepatic chalone，HC）是由生物正常肝细胞通过自分泌和旁分泌作用产生的、能抑制肝细胞增殖的一种分子量为13500的多肽蛋白质，它在肝脏的再生调节机制中发挥着重要的作用。有研究［1］发现HC对人肝癌细胞（SMMC-7721细胞株）在体外的增殖有明显的抑制作用，抑制率为77.7%，而对人胃癌细胞（BGC-823细胞株）的增殖则无抑制作用，提示HC是抑制肝癌细胞增殖的特异性因子。至于HC在体内应用是否可以抑制肝癌细胞的增殖，至今未见有文献报道，因此很有必要对HC进行深入的探讨和研究。本研究建立由二乙基亚硝胺(Diethylnitrosamine，DEN)诱发的大鼠肝癌模型，采用病理学、血清生化指标和细胞动力学的方法，研究HC对大鼠体内肝癌的治疗作用和作用环节。
1 材料与方法
1.1 动物分组 选取健康雄性SD大鼠（由广东医学院实验动物中心提供）60只，体重100～120g，随机分为6组(每组10只):正常组、模型组、阿霉素（adriamycin，ADM，由浙江海正药业股份有限公司生产）组和HC（本实验室提纯［2］）治疗组:A组，大剂量；B组，中等剂量；C组，小剂量。
除正常组外，其余5组大鼠在饮水中均加入0.01%DEN（Sigma公司产品），喂养90天，停止喂养DEN，然后开始治疗。
1.2 治疗方法 正常组和模型组每天1次腹腔注射生理盐水0.5ml/只，而ADM组每天1次腹腔注射ADM 3mg/kg，A组每天1次腹腔注射HC 9mg/kg，B组每天1次腹腔注射HC 3mg/kg，C组每天1次腹腔注射HC 1mg/kg。给药处理30天。
ADM剂量的选择以临床化疗剂量30mg/m2为依据，按人与大鼠间体表面积折算的等效剂量比值表计算得出。取折算得出的ADM剂量为HC的中等剂量(3mg/kg)，并由此得出HC的大剂量(9mg/kg)和小剂量(1mg/kg)。
1.3 常规检查 称体重，解剖大鼠，取出肝脏，称肝重，计算肝重比体重，记录肝表面癌结节数。
1.4 生化检测 断头取血，收集血清，用放射免疫测定法检测血清甲胎蛋白（AFP）的分泌量，用7170A型自动生化分析仪(由日本岛津公司制造)测γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）、碱性磷酸酶（ALP）的含量。
1.5 病理检查 统一取右叶肝组织，福尔马林液固定，石蜡包埋，制备成2μｍ厚的切片，HE染色，光镜下观察肝组织的病理变化。
1.6 流式细胞仪检测 取3块肝组织（每块约为1g），制备离散肝细胞悬液，以碘化丙啶荧光素染色显示核DNA，用流式细胞仪（美国BD公司产品，FACS Vantage）对样品进行DNA含量分析，得出各细胞周期的分布比率。
1.7 统计学方法 各组数据用x±s表示，组间比较采用t检验加方差分析。
2 结果
2.1 各组大鼠的生存率 实验结束时，各组大鼠的死亡数和生存率见表1。