医药学论文：MBP在不同时间窗贴敷式头部亚低温对新生仔兔HIE治疗时的意义研究

［摘要］ 目的 通过贴敷式头部亚低温对新生仔兔缺氧缺血性脑病（HIE）治疗前后血中髓鞘碱性蛋白（MBP）的测定，揭示贴敷式头部亚低温对新生仔兔HIE有保护作用。方法 采用酶联免疫法测定血清中MBP。贴敷式头部亚低温实施6 h治疗。结果 HIE后不同时间组及假手术组（正常组）组间比较，血清中MBP含量差异有非常显著性（P＜0.01），经Q检验进行两两比较发现，HIE后3 h组MBP含量与正常组差异无显著性（P＞0.05），而HIE后其他组与正常组间均差异有显著性。结论 贴敷式头部亚低温对缺氧缺血性脑病有保护作用，且在HIE后3 h脑保护作用最强；血中MBP含量可作为缺氧缺血致脑损伤早期诊断的敏感指标。
［关键词］ 贴敷式头部亚低温；髓鞘碱性蛋白；脑保护
新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）是导致儿童神经系统后遗症的主要原因，是我国围生期新生儿的主要疾病之一。如何有效地防治HIE及其后遗症、降低死残率是关键。本研究通过建立病理性新生仔兔HIE动物模型，监测HIE后不同时间窗实施亚低温治疗后，血中脑保护指标髓鞘碱性蛋白（MBP）的变化，分析并确定MBP在不同时间窗贴敷式头部亚低温对新生仔兔HIE治疗时的意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料 生后2~3天纯系新西兰仔兔60只，自然分娩，重量为60~100 g，不限雌雄，购自我院动物中心。正常假手术组（对照组）仔兔10只。缺氧缺血性脑病仔兔10只。亚低温治疗组共40只。
1.2 实验分组 A：正常假手术组10只（仅做颈部正中切口，游离左侧颈总动脉，不结扎）。B：常温创伤组（缺氧缺血性脑病）10只。C：亚低温治疗组共40只；C1：HIE后30 min亚低温治疗6 h组10只；C2：HIE后3 h亚低温治疗6 h组10只；C3：HIE后6 h亚低温治疗6 h组10只；C4：HIE后12 h亚低温治疗6 h组10只。A~C 4组均于相应时间点处死，取血。
1.3 方法 （1）缺氧缺血性脑病仔兔动物模型的建立［1］。（2）血清中MBP的测定采用酶联免疫方法；将冰冻血清移至4 ℃冰箱缓慢解冻后测定NSE，整个过程严格按试剂盒使用说明操作。（3）贴敷式头部亚低温治疗的实施。打开亚低温治疗仪，设置温度（8 ℃），检查仪器功能实验动物于相应时间点（发病后0.5 h、3 h、6 h、12 h）实施亚低温，将动物头颅病变侧头皮与局部亚低温治疗仪的探头紧密接触，身体进行保温，实施贴附式亚低温的时间为6 h，治疗后取血。HDB-01贴敷式局部亚低温脑保护仪［哈尔滨工业大学制造，专利号：ZL2004 2 0018692.4；注册号：黑药器械（准）字2004第2580019号］。（4）制冷及脑温测量：预设医用半导体局部亚低温脑保护仪的制冷器温度分别为10 ℃、8 ℃和2 ℃。在立体定向仪引导下将SL4型针状（φ=0.5 mm）点温传感器（同济大学研制）分别垂直送达壳核、丘脑中心点，壳核处进针19 mm、丘脑处进针23 mm。制冷器均匀涂导热膏后进行头部贴敷的同时，记录脑温随时间变化的情况。脑温平衡后以1 mm为1个点测量脑内温度梯度。更换不同制冷器温度时动物需完全复温后再测量下一组数据。实验过程中监测动物肛温及呼吸等重要生命体征。(5)取血：于相应时间点自腹主动脉取血，立即以3000 r/min离心15 min，取上血清，-80 ℃保存备测。
1.4 统计学方法 用Foxpro在计算机上建立数据库，双份录入数据并进行逻辑检核后，应用统计软件（SPSS 11.0）进行统计分析。分别进行描述性分析、方差分析及Q检验等。
2 结果
不同时间点动物亚低温6 h后血清中MBP的含量，见表1、图1。

表1 不同时间点动物亚低温6 h后血清中

 

 

图1 HIE 不同时间点与正常假手术组BMBP均值比较

从表1可见，HIE后不同时间组及假手术组组间比较，血清中MBP含量差异有非常显著性（P＜0.01），经Q检验进行两两比较发现，HIE后3 h组MBP含量与正常组差异无显著性（P＞0.05），而HIE后其他组与正常组间均差异有显著性。
图1为不同时间状态下，血清中MBP的含量，可以看出，HIE后3 h组，MBP含量最接近正常组。

3 讨论
亚低温(33 ℃~35 ℃)疗法在儿科应用还很少，尤其在新生儿疾病方面的应用，更被视为禁区。贴敷式局部亚低温治疗新生儿HIE的研究国内外尚未见报道。如何有效应用亚低温治疗新生儿HIE，确定一个可行的亚低温治疗方案，是研究的热点。
亚低温有确切的神经保护作用［2，3］，这一观点已逐渐得到公认。贴敷式头部亚低温是指头部或血管附近施以降温手段来达到脑内亚低温的方法。实现了16 min内使脑部病灶区降到亚低温保护温度。贴敷式头部亚低温发挥脑保护作用的机制是：降低脑组织的代谢率；保护血-脑屏障；减低脑水肿，降低颅内压；促进神经系统的功能恢复。
亚低温的治疗存在时间窗，而且时间窗比较窄，亚低温治疗时间窗的选择和治疗的可能性是神经细胞恢复的关键。很多学者认为，应该在脑缺血缺氧后尽快地实施亚低温，亚低温治疗越早越好。因此寻找合适的亚低温开始干预时间成为现今研究的一项重要任务。本研究探索了新生仔兔HIE发生后的最佳亚低温开始治疗时间(时间窗)的研究，即在HIE发生后24 h内最早的时间(时间窗)给予亚低温治疗，可使病变处脑温达到亚低温水平而发挥脑保护治疗作用。
MBP是中枢神经系统髓鞘膜的主要蛋白［4］，具有神经组织特异性。MBP位于髓磷脂浆膜面，与髓鞘脂质紧密结合，维持CNS髓鞘结构和功能的稳定，在神经纤维中起着绝缘和快速传导的作用。其水平变化可反映脑白质少突胶质细胞髓鞘损伤的严重程度，是中枢神经系统损害和急性脱髓鞘的有效生化指标［5，6］。当中枢神经系统受损伤脱髓鞘时，血清或脑脊液中MBP含量增高，因此，血清或脑脊液MBP的浓度在一定程度上反映了脑白质少突胶质细胞髓鞘损伤的严重程度［7］。且MBP的含量增高与髓鞘的破坏程度平行，故MBP可作为判断中枢神经系统缺氧缺血破坏程度的指标。近年来围产期脑损伤对髓鞘发育的影响越来越引起人们关注。许多学者已发现临床上脑瘫、惊厥、神经发育迟滞与围产期损伤所致的中枢神经系统髓鞘形成延迟有关。
由于脑组织缺血、缺氧、水肿及坏死等改变，导致神经元、神经胶质细胞损伤及神经组织脱髓鞘；同时由于血-脑屏障通透性增高或破坏，进入血清中MBP含量就明显增高。血清MBP含量能够较敏感地代表脑缺氧缺血后不同的时期病理变化的定量，测定血清MBP含量，可全面判定神经元、胶质细胞、神经髓鞘膜结构有无损伤及其严重程度［7，8］。
本研究中，新生仔兔HIE后，脑组织发生缺血、缺氧、水肿及坏死等改变，导致神经组织脱髓鞘及神经元、神经胶质细胞的损伤，同时使血-脑屏障通透性增高，因此进入血清中MBP含量就明显增高，且增高的程度与脑细胞坏死的多少有关。本研究发现，HIE损伤后血清MBP含量增高，并随着损伤后的不同时间窗给予亚低温治疗，其含量恢复降低程度也有所不同，时间窗为30 min、3 h、6 h、12 h血清MBP含量较损伤组均有下降，但时间窗为3 h，给予亚低温治疗6 h血清MBP含量下降的最明显，基本接近正常状态下的水平。说明HIE损伤后时间窗为3 h，亚低温6 h为贴敷式局部亚低温对脑保护作用最强，是治疗脑缺氧缺血的最佳治疗方案。