医药学论文：E2F

【摘要】 目的 探讨E2F-1蛋白在胃癌及正常胃黏膜组织中的表达与意义。方法 采用免疫组化技术对80例原发性胃癌癌组织与癌旁黏膜中E2F-1的表达进行检测，同时对40例正常胃黏膜组织进行对照性研究，并进行统计学分析。结果 E2F-1在癌组织与癌旁黏膜中的阳性表达率为72.5%（58/80）和30.0%（24/80），在正常胃黏膜组织中的阳性表达率为22.5%（9/40），差异有非常显著性（P< 0.001）。癌组织、癌旁黏膜中E2F-1的表达在不同的临床病理特征之间差异无显著性（P＞0.05）。结论 E2F-1蛋白在胃癌组织中超表达，E2F-1的反常表达与胃癌的发生有关。
【关键词】 胃癌；免疫组化；E2F-1
【Abstract】 Objective To study the expression and significance of E2F-1 in human primary gastric carcinomas and normal mucosa.Methods Immunohistochemistry was used to detect the expression of E2F-1 in the cancer tissues and their corresponding mucosa of 80 cases of human primary gastric carcinomas and to study by comparing with normal stomach mucosa of 40 cases.Statistics was used to analyze the data.Results The positive expression rate of E2F-1 in cancer tissues was 72.5%(58/80)，while the positive expression rate of E2F-1 in corresponding mucosa was 30.0%(24/80)，and the positive expression rate of E2F-1 in normal stomach mucosa was 22.5%(9/40).The positive rate was distinct difference between cancer tissues and corresponding mucosa or normal stomach mucosa （P< 0.001）. The expression of E2F-1 in cancer tissues was not correlated with the tumor stage，pathological type，lymph node metastasis and the depth of invasion.Conclusion The results suggest that E2F-1 is over expressed in gastric carcinomas. And anomalous expression of E2F-1 may permit the gastric tumorigenesis and progression.
【Key words】 gastric carcinoma；immunohistochemistry；E2F-1
E2F-1是细胞周期调控机制中cyclin-cdk-Rb通道最重要的转录因子，研究发现E2F-1对细胞生长具有双向调节作用，它既能作为靶基因的激活剂使细胞由G1期向S期过渡促进细胞进程，又能作为靶基因的抑制剂并可诱导细胞凋亡。它在肿瘤形成中是起癌基因作用还是起抑癌基因作用取决于两种作用的程度，并与器官特异性有关。胃癌是最常见的恶性肿瘤，但对胃癌中E2F-1的作用了解甚少。本实验用免疫组化方法观察E2F-1在胃癌中的表达，探讨其在胃癌发生、发展中的作用和意义。
1 材料与方法
1.1 材料 80例胃癌标本均随机取自广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科2001年11月～2004年4月间经临床病理确诊的部分胃癌住院患者。男62例，女18例，年龄35～68岁。临床病理分期：Ⅰ、Ⅱ期33例，Ⅲ、Ⅳ期47例。术中标本切下后，取胃癌和距癌边缘5cm以上无癌细胞浸润的黏膜组织各1块，经10%的福尔马林固定，石蜡包埋，5μm厚切片2张，分别用于HE常规染色和E2F-1免疫组化染色。另收取胃镜下正常胃黏膜活检标本40例做正常对照组。标本收取时，钳夹黏膜组织两小块，处理方法同上。
1.2 试剂 鼠抗人E2F-1单克隆抗体（mAb）购于Neo Markers公司，山羊血清、二抗、DAB染色试剂盒、PBS等均购于福州迈新公司。
1.3 方法 （1）切片依次浸入二甲苯、梯度酒精中脱蜡；(2)3% H2O2室温孵育10min，以消除内源性过氧化物酶活性；(3)切片浸入0.01M枸橼酸钠缓冲液(pH 6.0)中，高压处理1.5min；(4)5%正常山羊血清室温孵育5min；(5)滴加4μg/ml的E2F-1 mAb 4℃过夜；(6)滴加生物素标记二抗室温孵育10min；(7)滴加辣根酶标记链霉卵白素室温孵育10min。上述各步骤之间均经PBS液冲洗。(8)用新鲜配制的DAB(5%v/v)孵育显色，然后用自来水冲洗苏木精稍稍衬染，脱水封片。加一抗时用PBS代替一抗分别作癌、癌旁正常黏膜阴性对照。阳性对照片由Neo Markers公司提供。
1.4 结果判定 E2F-1的阳性表达为细胞核内有棕褐色颗粒。判定结果时每例选择9个高倍镜视野(400×，向同一方向移动切片，不重复，不重叠)，按阳性细胞数占视野中总细胞数的百分比分为3个等级：无阳性着色或阳性细胞数< 5%为阴性(-)，阳性细胞数在5%～50%之间为阳性(+)，阳性细胞数＞50%为强阳性(++)。
1.5 统计学方法 统计数据采用SPSS 12.0统计软件进行统计学分析，用χ2检验，P< 0.05有统计学意义。
2 结果
80例组织切片均经病理证实为胃腺癌，其中管状腺癌16例、乳头状腺癌13例，低分化腺癌47例，印戒细胞癌4例。癌组织中E2F-1的阳性表达率为72.5%（58/80），癌旁黏膜和正常胃黏膜组的E2F-1阳性表达率为30.0%（24/80）和22.5%（9/40），3组间差异有非常显著性（P< 0.001）见表1，很明显癌组织中E2F-1呈高表达。两两比较，癌旁黏膜和正常对照组的E2F-1阳性表达率差异无显著性（P＞0.05）见表1。无论是癌组织还是癌旁黏膜，不同的临床期别间、不同的组织学分类之间、淋巴结转移是否转移E2F-1的阳性表达差异无显著性（P＞0.05），见表2、表3。