医药学论文:006右旋
关键词: 右旋-氨基酸 分析方法 生理学
摘要 最近发现右旋-氨基酸,特别是右旋-天门冬氨酸和右旋-丝氨酸广泛存在于哺乳动物体内,提示人们关注右旋-氨基酸在哺乳动物生命活动中的意义。本文综述了右旋-氨基酸的分析方法、来源与生理特性。
一般认为人体和生物蛋白质均由左旋(L)-氨基酸组成,但从50年代始逐渐有人报道一些生物和人体内也有右旋(D)-氨基酸,而且当时认为D-氨基酸与某些疾病或衰老有关[1~4]。但随着科学技术的进步和分析方法的发展,人们不断发现海洋动物、无脊椎动物、脊椎动物、藻类及种子植物等含有多种游离的D-氨基酸,特别是对哺乳动物体内右旋-氨基酸的研究,提示人们应对D-氨基酸在哺乳动物体内的生理意义予以关注。
1.1酶法 D-氨基酸氧化酶或D-天门冬氨酸氧化酶,在黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)存在的条件下,将D-氨基酸氧化为α-酮酸并与二硝基联苯肼反应生成腙,然后在445nm测吸光度[5]。空白对照组则加入蒸馏水代替D-氨基酸。此外还有D-氨基酸的定量方法,但并非对各个D-氨基酸定量,一般用氨基酸分析仪分离定量各种氨基酸的L-型和D-型总量,然后将剩下试液中的D-氨基酸在D-氨基酸转氨酶和2-酮酸存在下,生成α-酮酸和氨基正己酸后,将未反应的L-氨基酸再次经氨基酸分析仪定量,两者之差即为D-氨基酸的量[6]。
1.3效液相色谱法 最近广泛应用的高效液相色谱(HPLC)法具有明显的高性能,但用它来分析自身吸光度低的氨基酸,如机体内微量的右旋-氨基酸是很困难的。因此,可将氨基作为目标,使其与分子吸光系数大的紫外可见光试剂和荧光试剂反应,然后检测其反应结合物。为了检测准确,所用的试剂的光谱纯度必须为100%,且不易使反应物旋光化[8]。
2.1近年来许多研究证实微生物、大鼠、鸡、鸽子、牛和人体中广泛存在D-氨基酸。最近,Nagata等[9]首次报道一些细菌、古生菌(archaea)及真核微生物的可溶性肽链上有D-氨基酸,用HPLC法分析发现,革兰氏阳性菌中丙氨酸和谷氨酸等的对映体比率为11.7%,枯草杆菌的谷氨酸对映体比率为22.3%;革兰氏阴性菌含有高浓度的D-天门冬氨酸;大鼠体内含有高浓度的D-丝氨酸,大脑皮质、海马及纹状体中分布最多,延髓、小脑和脊髓分布较少[10]。还发现不同年龄的人死后前脑皮质有高浓度的D-丝氨酸和D-天门冬氨酸。Huang等[11]报道,人尿中排出大量的D-丝氨酸,且排出量与年龄无关。成年狗尿中含有大量的D-丙氨酸,未断奶期和断奶期大鼠的D-丝氨酸的含量均很高,且随年龄增加而下降,但D-丙氨酸的含量则与年龄呈正相关。有人用分子生物学方法证
摘要 最近发现右旋-氨基酸,特别是右旋-天门冬氨酸和右旋-丝氨酸广泛存在于哺乳动物体内,提示人们关注右旋-氨基酸在哺乳动物生命活动中的意义。本文综述了右旋-氨基酸的分析方法、来源与生理特性。
一般认为人体和生物蛋白质均由左旋(L)-氨基酸组成,但从50年代始逐渐有人报道一些生物和人体内也有右旋(D)-氨基酸,而且当时认为D-氨基酸与某些疾病或衰老有关[1~4]。但随着科学技术的进步和分析方法的发展,人们不断发现海洋动物、无脊椎动物、脊椎动物、藻类及种子植物等含有多种游离的D-氨基酸,特别是对哺乳动物体内右旋-氨基酸的研究,提示人们应对D-氨基酸在哺乳动物体内的生理意义予以关注。
1.1酶法 D-氨基酸氧化酶或D-天门冬氨酸氧化酶,在黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)存在的条件下,将D-氨基酸氧化为α-酮酸并与二硝基联苯肼反应生成腙,然后在445nm测吸光度[5]。空白对照组则加入蒸馏水代替D-氨基酸。此外还有D-氨基酸的定量方法,但并非对各个D-氨基酸定量,一般用氨基酸分析仪分离定量各种氨基酸的L-型和D-型总量,然后将剩下试液中的D-氨基酸在D-氨基酸转氨酶和2-酮酸存在下,生成α-酮酸和氨基正己酸后,将未反应的L-氨基酸再次经氨基酸分析仪定量,两者之差即为D-氨基酸的量[6]。
1.3效液相色谱法 最近广泛应用的高效液相色谱(HPLC)法具有明显的高性能,但用它来分析自身吸光度低的氨基酸,如机体内微量的右旋-氨基酸是很困难的。因此,可将氨基作为目标,使其与分子吸光系数大的紫外可见光试剂和荧光试剂反应,然后检测其反应结合物。为了检测准确,所用的试剂的光谱纯度必须为100%,且不易使反应物旋光化[8]。
2.1近年来许多研究证实微生物、大鼠、鸡、鸽子、牛和人体中广泛存在D-氨基酸。最近,Nagata等[9]首次报道一些细菌、古生菌(archaea)及真核微生物的可溶性肽链上有D-氨基酸,用HPLC法分析发现,革兰氏阳性菌中丙氨酸和谷氨酸等的对映体比率为11.7%,枯草杆菌的谷氨酸对映体比率为22.3%;革兰氏阴性菌含有高浓度的D-天门冬氨酸;大鼠体内含有高浓度的D-丝氨酸,大脑皮质、海马及纹状体中分布最多,延髓、小脑和脊髓分布较少[10]。还发现不同年龄的人死后前脑皮质有高浓度的D-丝氨酸和D-天门冬氨酸。Huang等[11]报道,人尿中排出大量的D-丝氨酸,且排出量与年龄无关。成年狗尿中含有大量的D-丙氨酸,未断奶期和断奶期大鼠的D-丝氨酸的含量均很高,且随年龄增加而下降,但D-丙氨酸的含量则与年龄呈正相关。有人用分子生物学方法证
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