医药学论文：论Nogo受体拮抗剂对大鼠急性脊髓损伤的保护作用

1 材料和方法
NEP1-40、兔抗大鼠NeuN 抗体、小鼠抗大鼠NF-200抗体、抗兔IgG-FITC、抗小鼠IgG-RBITC，均购自北京博奥森生物技术有限公司。
健康成年Wistar大鼠48只(由苏州大学实验动物中心提供)， 雌性，体重250～300 g，随机分为生理盐水对照组、NEP1-40实验组。
参照Brosamle等［3］方法制作脊髓半横断模型。大鼠经腹腔麻醉后固定于立体定位仪上，常规消毒，以第8胸椎(T8)棘突为中心，手术显露棘突。手术显微镜下打开T8椎板，用刀片做T10脊髓的后半横断，损伤深度1.0 mm（横断后侧和后外侧皮质脊髓束）。向尾侧硬脊膜下置入硬脊膜管（PE-10导管，BD公司），盐水冲洗切口，固定硬脊膜管，依次缝合，模型制作完成。
生理盐水对照组通过置管每天注入生理盐水20 μl，NEP1-40组每天用微量进样器注入NEP1-40 10 μl(0.4 μg/μl)。每天分早、中、晚3次注射，每次注射完毕后用10 μl生理盐水冲管，以保证药物进入蛛网膜下腔，连续使用4周。术后人工挤压膀胱排尿，每天3次，直至形成排尿反射。术后3天给予青霉素4万U／只。硬脊膜管外口予无菌保护，定期换药。
所有动物均分别于脊髓损伤1、2、3、4周时用4%多聚甲醛经左心室-主动脉灌注后取出脊髓组织，灌注液中固定12 h左右，然后放入30%蔗糖溶液中，待组织沉底，冰冻切片机切片，厚度30 μm。
1.5.1 组织学检查
1.5.2 免疫荧光组织化学双重标记染色
1.6 运动功能评定
1.7 图像分析
1.8 统计学处理
2 结果
4周时苏木精-伊红染色显示生理盐水对照组出现神经元固缩、坏死、溶解，细胞体积变小；白质中见较多红细胞渗出，髓鞘肿胀和大量空泡；并有炎性细胞浸润和胶质细胞增生。NEP1-40实验组灰质肿胀变形、出血、小胶质细胞增生和炎性细胞浸润均较损伤组轻；白质点状出血，白质中有较多的正常轴突(图1)。

2.3 行为学观察
0．05)；术后3周时，NEP1-40实验组的BBB评分为11.37±0.32，高于对照组的7.39±0.21(P< 0.05)；术后4周时，NEP1-40实验组的BBB评分为12.04±0.31，高于对照组的7.90±0.20(P< 0.01) (表2)。表2 实验大鼠不同时期BBB行为功能评分(略)
NeuN是在神经科学领域内被广泛用于标记神经元的一种抗体，主要特异识别大鼠神经元组织。