医药学论文：探讨MicroRNAs在SLE患者外周血中的异常表达

1 材料和方法
1.2 方法
1.2.2 microRNA的提取 抽取受检人群的外周抗凝血2 mL, 淋巴细胞分离液分离PBMC, 分别将SLE患者组和健康对照组的PBMC混合, 加入TRIzol裂解, 按mirVana分离试剂盒的说明提取总RNA和microRNA, 采用A值测定和电泳检查确定样品总RNA量和质量。
1.2.4 芯片杂交和数据分析 将荧光标记的microRNA探针变性后加到芯片上, 盖上盖玻片, 放入杂交舱并封好, 放置于42℃空气浴摇床中以300 RPM速度晃动18～24 h。洗片, 干燥后扫描, 将图像转化为基于荧光强度的数字信号(Imagequant 5.0; Array Vision 6.0), 随后进行数据分析和处理。
2或< 0.5代表有明显的表达差异。
2.1 microRNA提取的质量 分别将SLE患者组和健康对照组的PMBC混合后提取总RNA和microRNA, 电泳结果显示两组混合样品总RNA均有清晰的18S和28S条带, A260/A280比值符合要求, 样品质量符合实验要求。
表1 SLE组中高表达和低表达的microRNAs（略）
3 讨论
杂交后microRNA表达谱芯片的扫描结果显示两组样品中有效杂交信号点不多（一共38种表达）, 但是检测到的有效杂交信号强度较高, 其原因主要与样品来源性质有关。因为SLE是全身性的自身免疫性疾病, SLE的发生发展与遗传因素、 环境诱发因素以及机体免疫系统紊乱有关, 其中机体免疫功能紊乱在SLE的发生发展过程中起着至关重要的作用。其免疫学特征为多克隆B细胞自发激活和T细胞功能异常, 产生多种自身抗体。因此我们检测的是SLE患者PBMC中的microRNA表达。许多研究表明相比其他的组织器官（如脑、 心、 肾、 肺等）, PBMC能检测到的表达数量最少。