摘要： 【目的】观察百合知母汤含药血清对氯化镉(CdCl2)致大鼠卵巢颗粒细胞(GC)损伤的影响。【方法】(1)分别选用23 d、3月和12月龄雌性SD大鼠各5只，取卵巢进行GC计数，连续观察10 d内GC的生长情况，采用噻唑蓝(MTT)比色法于490 nm波长处测定光密度(D)值，筛选最适卵巢GC。(2)于最适卵巢GC体外培养的第3天加入终浓度分别为10、20、40、60、80 μmol/L的CdCl2刺激液，37℃、体积分数5%CO2培养箱内培养48 h后，采用MTT法观察细胞生长情况，筛选CdCl2刺激液的最适浓度。(3)将筛选出最适的卵巢GC体外培养 72 h后，在96孔板内分别加入最适浓度的CdCl2刺激液及终浓度分别为体积分数125%、25%、5%、10%、20%的大鼠百合知母汤含药血清，依据含药血清浓度由低至高分为5组，同时另设对照组：①空白对照组：体积分数10%DMEM培养液，②模型组：体积分数10%DMEM培养液+最适浓度CdCl2刺激液，③空白血清组：空白血清+最适浓度 CdCl2刺激液。继续培养48 h后，采用MTT比色法测定D值，观察百合知母汤含药血清对大鼠卵巢GC以及对CdCl2致卵巢GC损伤后的影响。【结果】23 d龄大鼠卵巢GC数量多、形态好，呈指数生长，23 d为最适生长时间。CdCl2浓度与卵巢GC的活性呈剂量依赖性关系，随浓度增加而损伤加重，其中浓度为40 μmol/L CdCl2培养液中的GC细胞边缘出现皱缩，为最适CdCl2刺激液浓度。百合知母汤含药血清对卵巢GC生长有促进作用，能抵抗40 μmol/L CdCl2刺激液对GC的损伤作用。【结论】百合知母汤含药血清保护大鼠卵巢GC的作用与其能拮抗CdCl2的损伤和增加卵巢GC的活性和数量有关。
关键词： 百合知母汤/药理学;围绝经期综合征/中药疗法;血清药理学;细胞培养
1材料与方法
12药物及试剂百合知母汤(百合与知母质量比为3∶1)，制成含生药量为08 g/mL的浓缩液。DMEM为美国GIBCO公司产品，小牛血清(DBCS)为JRH biosciences公司产品。噻唑蓝(MTT)由Ultra pure grade, Amresco分装，临用前用磷酸盐缓冲液(PBS)配制成50 mg/L MTT溶液，于4℃冰箱保存。二甲基亚砜(DMSO)为上海久亿化学试剂有限公司产品。注射用血促性素(PMSG)为宁波市三生药业有限公司产品(批号：070909)，PBS(pH=70)为福州迈新公司产品(1小袋溶解在2 L蒸馏水中)，CdCl2由亭新化工试剂厂生产。
14卵巢GC最适生长时间和CdCl2刺激液最适浓度的筛选
142CdCl2刺激液最适浓度取最适卵巢GC，将细胞密度调至1×106个/mL后均匀接种于96孔培养板中，6个复孔，放入37℃、体积分数5%CO2培养箱内培养，第3 d时分别加入终浓度为10、20、40、60、80 μmol/L的CdCl2刺激液，空白对照组含CdCl2 0 μmol/L。继续培养48 h后，采用MTT法观察细胞生长情况，筛选出最适CdCl2刺激液浓度。
16百合知母汤含药血清对大鼠卵巢GC的影响取最适卵巢GC，将细胞密度调至1×106个/mL后均匀接种于96孔培养板中， 6个复孔，放入37℃、体积分数5%CO2培养箱内培养，预培养72 h后，换液并加入含药血清，依据含药血清浓度由低至高分为5组，使其终浓度分别为体积分数125%、25%、5%、10%、20%。另设对照组：①空白对照组：体积分数10%DMEM培养液，②空白血清组。继续培养48 h后，采用MTT比色法D值，观察含药血清对大鼠卵巢GC的影响。
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