医药学论文：探讨宝宝乐口服液对瘦素调节VMN神经元膜电位的影响

1.1 动物及分组
日龄35～40 d的SD大鼠45只，平均体质量(60±10)g（第四军医大学实验动物中心提供），合格证号SCXK（军）200707。随机分为对照组、模型组和治疗组，每组15只。所有动物均单笼饲养，自由进食水。

1.3 膜片钳记录
大鼠腹腔注射10%(φ)水合氯醛（0.33 mL/100 g），麻醉后断头取脑，迅速置于冰水混合的细胞外液（NaCl 126，KCl 2.5，Na2HPO4 1.2， NaHCO3 24，Glucose 11.1，MgSO4 1.2，CaCl2 2.4，单位mmol·L-1，pH7.2～7.4，渗透压浓度299 mOsm）中充氧（95%O2和5%CO2，下同）1 min，移至振动切片机（机槽内注满持续充氧的冰水细胞外液）做200 μm厚的横切面脑片，置入28 ℃持续充氧的细胞外液中孵育1 h，然后在正置纤维镜（Axoskop I；Zeiss，Thornwood，NY）水浸镜头下进行可视膜片钳记录，膜片钳放大器使用MultiClamp 700B（Axon Instruments，美国）。pClamp8软件（Axon Instrument，Foster City，CA）用来记录和分析数据。
全细胞记录（whole cell patch）使用的电极内液成分(单位:mmol·L-1)为：Kgluconate132.3，NaCl 4，CaCl2 0.5，Hepes 10，EGTA 5，ATPMg 4，GTPNa 0.5，Phosphocretin 10，pH 7.2～7.3，渗透压280 mOsm，充灌电极后的电极电阻为6～8 MΩ。电极尖端与细胞膜形成高阻封接（达1～10 GΩ），然后吸破细胞膜，在电流钳gapfree状态下持续记录膜电位，观察瘦素（Leptin，50 nmol·L-1）对VMN神经元膜电位的影响，取给药前5 min的基础膜电位与给药最后1min的膜电位进行比较。
所有的化学试剂和药理试剂均购自Sigma公司。

2 结果
在对照组（n=15）、模型组（n=16）和治疗组（n=14）大鼠脑片上观察了瘦素对VMN神经元膜电位的影响。瘦素使大部分神经元去极化（如图1A示），膜电位改变为：对照组（5.01±1.23）mV（n=8），模型组（4.94±0.76）mV（n=13），治疗组（4.99±0.83）mV（n=6），各组间比较差异无显著性。少数VMN神经元在瘦素作用下超极化（如图1B示），膜电位改变为：对照组（4.16±0.72）mV（n=3），模型组4.85 mV（n=1），治疗组（3.88±0.94）mV（n=3），各组间比较差异亦无显著性。然而，模型组VMN神经元的膜电位被瘦素去激化而导致自发放电增加的细胞比例增多，被瘦素超极化而自发放电减少的细胞比例减少，对瘦素无反应的细胞比例也减少。这些结果与瘦素对VMN神经元mIPSC的影响一致，进一步表明瘦素使模型大鼠VMN神经元的兴奋性增强。而治疗组去极化、超极化和无反应的细胞数与对照组差异无显著性（图1C），提示宝宝乐口服液能降低瘦素对模型大鼠VMN神经元的去极化作用。