医药学论文：谈双黄连颗粒中绿原酸含量的HPLC测定

摘要： 目的 采用高效液相色谱法测定双黄连颗粒中绿原酸的含量。方法 用外标一点法,Diamonsil ODS1 C18色谱柱,甲醇-水-冰醋酸(15∶85∶1)为流动相,流速为1.0 mL/min,λ＝324 nm。结果 绿原酸在0.060～1.210 μg范围内呈良好线性,回归方程为Y＝105 427X＋586.43,r2＝0.999 5,平均加样回收率为99.3%,RSD＝0.82%(n＝6)。结论 本方法简便、准确,专属性强,测定结果重复性好,为双黄连颗粒中绿原酸的定量分析提供了科学有效的方法。

关键词： 双黄连颗粒；绿原酸；高效液相色谱法；含量测定
双黄连颗粒收载于2005年版《中华人民共和国药典》(一部),处方由金银花、黄芩、连翘组成,功能疏风解表、清热解毒,用于外感风热所致的感冒。金银花为方中君药。原标准中只收载了黄芩的含量测定方法,没有君药金银花的成分含量测定方法,因此,不能有效和全面地控制药品质量。为了更好地控制双黄连颗粒的质量,提高双黄连颗粒的质量标准,我们参照2005年版《中华人民共和国药典》(一部)中收载的双黄连片,采用高效液相色谱(HPLC)法对金银花的主要成分绿原酸进行了含量测定,并进行了方法学研究。现报道如下。
高效液相色谱仪：SPD-10A日本岛津；紫外分光仪：上海康化生化仪器制造厂；超声波清洗器：SK3200H上海科导超声仪器有限公司。
2 方法与结果
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以甲醇-水-冰醋酸(15∶85∶1)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为324 nm。理论塔板数按绿原酸峰计算应不低于6 000。
2.2.1 对照品溶液的制备 取绿原酸对照品适量,精密称定,置于棕色量瓶中,加50%甲醇制成每1 mL含60 μL的溶液,即得对照品溶液。
2.2.3 阴性样品的测试 取缺金银花的样品,按供试品制备方法制备阴性样品后测定,在绿原酸相应位置无峰出现,说明阴性样品的其他成分无干扰。色谱图见图1。图1双黄连颗粒HPLC图谱 注：A.对照品；B.供试品；C.阴性样品
取同一对照品溶液(60.51 μg/mL),分别精密吸取1、2.5、5、10、20 μL注入液相色谱仪,测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标,绿原酸对照品进样量为横坐标绘制标准曲线,计算回归方程为：Y＝105 427X＋586.43,r2＝0.999 5,表明绿原酸在0.060～1.210 μg之间呈良好的线性关系。
取同一对照品溶液,重复进样6次,每次进样10 μL,测定绿原酸峰面积,结果RSD＝0.14%,表明精密度良好。
取同一批号(批号20081101)供试品,按供试品溶液制备方法制备5份供试液,依法测定每份样品中绿原酸的含量。结果RSD＝1.18%,表明本法重复性良好。
取同一批号(批号20081101)供试品,按"2.2.2"项下方法制备供试品溶液,分别在0、2、4、6、8 h测定峰面积,RSD＝0.76%(n＝5)。表明制备的供试品溶液在8 h内稳定。
采用加样回收法。精密称取已知含量的同一批样品(批号20081101,含量为5.217 mg/g)0.2 g,置50 mL量瓶中,分别精密加入绿原酸对照品溶液(0.375 mg/mL)各3 mL,蒸干,按"2.2.2"项下方法制备供试液,照上述色谱条件测定。分别进样10 μL,测定绿原酸峰面积并计算绿原酸含量(见表1) 表1加样回收率试验结果,结果平均回收率为99.3%,RSD＝0.82%(n＝6)。
对3批中试产品进行测定,结果见表2。表2样品测定结果
根据3批测定结果,每1 g含金银花以绿原酸(C16H18O9)计均不少于5.0 mg,考虑到药材产地、加工、运输、贮藏等因素的影响,药材中绿原酸也会有较大的差别,因此暂规定本品每1 g含金银花以绿原酸(C16H18O9)计,不得少于4.5 mg。
本研究采用HPLC法对双黄连颗粒中绿原酸进行含量测定,试验结果表明,所建立的方法稳定、准确、可行,能有效控制双黄连颗粒的内在质量,确保临床疗效。