摘要： 目的 研究RGS4对常氧和低氧培养条件下HUEVC细胞凋亡的影响及地塞米松在其中的作用，以探讨RGS4在HUEVC细胞凋亡中的作用及地塞米松处理对其的影响。方法 采用O2/N2/CO2三气培养箱模拟常氧和低氧条件培养HUEVC细胞，RGS4真核表达载体转染HUEVC细胞后采用流式细胞仪（AnnexinVFITCPI法）检测细胞凋亡。结果 常氧条件下RGS4转染细胞和地塞米松处理对细胞凋亡无明显影响，低氧培养条件下细胞凋亡增加(P< 0.01)，RGS4转染后可使HUEVC细胞凋亡显著减少(P< 0.01)，地塞米松和RGS4同时处理后HUEVC细胞的凋亡与单纯RGS4转染无显著差别。结论 RGS4不影响常氧条件下的HUEVC细胞凋亡，但可明显抑制低氧条件下的HUEVC细胞凋亡，地塞米松抑制细胞凋亡的作用可能与RGS4有关或者通过相同的细胞信号通路抑制低氧条件下的细胞凋亡。
关键词： 细胞凋亡 地塞米松 RGS4
1 资料与方法
1.2 实验分组及指标检测时相点 （1）常氧实验分组：1) 空白对照组：(control N1)；2) pcDNA3.1(+)组：(转染pcDNA3.1(+)空质粒，cotrol N2)；3) RGS4转染组：(转染RGS4表达质粒，RGS4N)；4)RGS4转染＋地塞米松处理组(RGS4＋DEX N)；（2）低氧实验分组(1％O2／5％CO2／94 N2％)：1) 空白对照组：(control H1)；2) pcDNA3.1(+)组：(转染pcDNA3.1(+)空质粒，cotrol H2)；3) RGS4转染组：(转染RGS4表达质粒，RGS4H)；4) RGS4转染＋地塞米松处理组(10－7M )(RGS4＋DEX H)（3）检测时相点：流式细胞仪检测细胞凋亡分别于低氧处理后6小时、24小时和48小时测定。
1.4 HUEVC细胞的培养 取液氮中冻存的HUEVC细胞株，迅速放入40℃水浴中，快速溶解细胞。超净工作台内将细胞悬液移入离涯管中，滴加DMEM培养基至8毫升，洗涤细胞。2000转、离心5分钟、弃上清，用DEME再次洗涤沉淀。沉淀用DEME培养基＋小牛血清悬浮+3%内皮细胞生长因子，移入到细胞培养瓶中培养备用。
1.6 流式细胞仪检测细胞凋亡
1.6.2 细胞凋亡的检测 采用AnnexinVFITCPI 法检测： 取6孔板上培养的细胞，0.25%胰酶500μl，消化9分钟后抽出胰酶，加入1ml培养基终止消化，吹打细胞成细胞悬液。2000转4℃离心5分钟，弃上清。4℃预冷的PBS洗涤细胞，2000转4℃离心5分钟后弃上清，再次悬浮离心。加5μl AnnexinVFITC溶液和2.5μl PI到100μl细胞悬浮液中，混匀后避光反应10分钟，计入150μl样品稀释液到样品中，混匀后上机检测。
2 结果
表1 常氧条件下各组凋亡率的变化(占细胞总数的%，n=4)（略）
2.2 低氧条件下各组细胞凋亡率的变化 低氧条件下，Control H1和Control H2组间没有显著差别，但是RGS4 H组和DEXH组各时相点的凋亡率均显著低于上述两组(P值均< 0.01)，DEX H组与RGS4组各时相点的细胞凋亡率均无显著差异(P< 0.05)(见表2)。
0.05）DEXH组各时相点的凋亡情况与RGSH组各时相点的凋亡情况类似，即6小时和24小时的凋亡率显著高于DEXN组和ControlN1和Control N2组(P< 0.05)，48小时的细胞凋亡率则与DEXN、ControlN1和ControlN2组无显著差异（P>0.05）（图1）。
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