医药学论文：论高血糖对脑出血大鼠细胞凋亡及Bax表达的影响

1 材料与方法
1.2 主要仪器及试剂 江湾Ⅱ型立体定位仪、微量进样器、显微外科手术器械、牙科钻、罗氏血糖仪(德国罗氏诊断有限公司)、兔抗大鼠Bax多克隆抗体、SP系列二抗、DBA显色液(均购北京中杉生物技术有限公司)、TUNEL试剂盒(Sigema公司);Streptozotocin(STZ)(Sigema公司);普通胰岛素，每瓶400U(10ml)(江苏万邦生化医药股份有限公司)。
1.4 大鼠尾状核脑出血模型、高血糖模型的建立 高血糖模型成功后，胰岛素干预组腹壁皮下注射普通胰岛素，3次/d,4 U/次，将血糖控制在8.3 mmol/L以下，直至实验结束。注射参照Xue等的方法，大鼠用10%的水合氯醛(300 mg/kg)腹腔注射麻醉后，俯卧位固定于立体定向仪，行顶部正中切口，调整立体定向仪使大鼠前囟和后囟在同一水平面，于前囟前0.2 mm，中线向右旁开3.0 mm处进针，深度5 mm，即尾状核位置。假手术组缓慢注入50 μl灭菌生理盐水，其余各组缓慢注入50 μl自体动脉血，动脉血采自股动脉，15 min注射完毕，留针10 min后缓慢缓慢退出，缝合皮肤。
1.6 图像采集分析 光学显微镜下，DBA染色阳性细胞染色呈棕黄色，利用德国Leica显微成像系统和上海山富科学有限公司Biosens Digital Imaging System图像分析软件，计算每组大鼠血肿周围Bax阳性细胞的平均积分光密度。TUNEL结果计算：凋亡阳性细胞的细胞核呈棕黄色，细胞出现黄至棕黄褐色颗粒。在装有目镜网格测微尺的400倍视野下随机计数血肿周围4个视野内的阳性细胞数及神经细胞，计算凋亡指数(凋亡细胞数/神经细胞×100%)。
2 结果
0.05)， 假手术组相应部位也有少量Bax的表达。均数间的两两比较，胰岛素干预组与正常血糖组差异无统计学意义(P>0.05)，余差异均有统计学意义(P< 0.01)。见表1。表1 4组各时间点血肿周围Bax阳性细胞的平均积分光密度的变化注：与假手术组相比，○P< 0.01;与正常血糖组相比，▲P< 0.01;与高血糖组相比，●P< 0.01
0.05)，假手术组的凋亡细胞数最低;凋亡细胞数间的两两比较，胰岛素干预组与正常血糖组差异无统计学意义(P>0.01)，余差异均有统计学意义(P< 0.01)。见表2。表2 4组各时间点血肿周围神经细胞凋亡指数的变化注：与假手术组相比，○P< 0.01;与正常血糖组相比，▲P< 0.01;与高血糖组相比，●P< 0.01
3 讨论